CMIA 法和ELISA 法診斷HBV 感染準確率的對比研究

趙晨李萌 戚潤鵬

（1. 河南中醫藥大學第五臨床醫學院，河南 鄭州 450000；2. 鄭州人民醫院檢驗科，河南 鄭州 450000）

乙型肝炎簡稱乙肝，是由乙型肝炎病毒（HBV）持續感染的肝臟慢性疾病。據調查結果顯示，我國約有9300 萬人攜帶HBV，感染者達7000 萬，這也是近年肝癌、肝硬化、肝功能衰竭等疾病發病率較高的原因之一[1]。乙型肝炎具有病程遷延、預后差、難治愈等特點，HBV 感染已成為全球范圍內亟待解決的公共衛生問題[2]。HBV 經血液、體液等途徑傳播，HBV感染患者早期癥狀不易被察覺，極易導致漏診。及早對HBV 感染患者確診，并及時采取有效治療減輕病情發展，可明顯改善預后。

HBV 常用血清標志物為乙肝五項，即乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗體（HBsAb）、乙肝e 抗體（HBeAb）、乙肝e 抗原（HBeAg）、乙肝核心抗體（HBcAb）。臨床通常采取酶聯免疫吸附法（ELISA）對其進行檢測，ELISA 法具有操作簡單、快速等特點，但結果易受環境影響，造成準確率降低[3]。近年來隨著檢測技術的不斷發展，化學發光微粒子免疫法（CMIA）結合免疫發光系統、免疫反應，利用化學發光標記的抗體、抗原，定量檢測抗原、抗體，在乙肝五項檢測中具有較好的應用價值[4]。為此，筆者收集我院86 例HBV 感染患者血清標本，主要分析CMIA 法、ELISA 法對患者乙肝五項診斷準確率的影響。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性選取我院2020 年5 月至2022 年4 月就診的85 例HBV 感染患者，其中女性32 例，男性53例；年齡21~56 歲，平均39.17±5.88 歲；體質量指數19.0~26.5 kg·m-2，平均22.52±1.33 kg·m-2。納入標準：均符合乙型肝炎診斷標準[5]：HBsAg 陽性超過6 m 以上或既往有乙型肝炎病史，現在HBsAg 或（和）HBV DNA 仍為陽性；患者出現不同程度肝臟腫大、腹水、惡心嘔吐等癥狀；未接受抗病毒相關治療。排除標準：妊娠期或哺乳期女性；精神疾病、溝通、語言、認知障礙者；嚴重腦、心、肝、腎等器官衰竭；造血系統疾病；惡性腫瘤；艾滋病感染；免疫功能異常；結締組織病。本研究已獲得本院倫理委員會批準同意，患者均簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

采集患者清晨空腹靜脈血3~5 mL，3000 r·min-1離心10 min，收集上清液，置于-20℃冰箱保存，分別采用CMIA 法、ELISA 法檢測HBsAb、HBeAg、HBsAg、HBeAb、HBcAb 濃度，并在當天內檢測完畢。

CMIA 法：使用美國雅培Axsym 全自動微粒子酶免疫化學發光儀檢測，試劑盒由鄭州安圖公司提供，操作步驟嚴格按照操作試劑盒進行。

ELISA 法：使用美國貝克曼UniCel-DxI-800 化學發光免疫分析儀進行檢測，試劑盒由上海科華生物公司提供，操作步驟嚴格按照操作試劑盒進行。

1.3 評估標準

CMIA 法陽性判定標準：HBsAb＞10 m IU·mL-1，HBcAb＞0.15 PEI U·mL-1，HBeAb＞1 PEI U·mL-1，HBsAg＞0.05 IU·mL-1，HBeAg＞0.1 PEI U·mL-1。

ELISA 法陽性判定標準：HBsAg 檢測值＞0.05 IU·mL-1，即為陽性；用標本OD 值/臨界OD 值比值（S/CO）測定，HBsAg、HBsAb、HBeAg＞1 S/CO，HBeAb、HBcAb＜1 S/CO。

1.4 觀察指標

1.4.1 兩種方法檢測的準確率比較

1.4.2 兩種方法血清學標志物檢測結果陽性率比較

1.4.3 CMIA 法檢測HBsAb、HBsAg 回收率分析

將收集ELISA 法HBsAb、HBsAg 高值血清（H）、低值血清（L），按5 L、4 L+1H、3 L+2H、2 L+3H、l L+4H、5H 梯度進行混合，以X 表示各標本預期值（理論值），以Y 表示各標本的實測值，定量標準溶液各200 μL，放入相應試管內，取1 分HBsAb、HBsAg陽性血清加入已知濃度試管內，用CMIA 法進行檢測，重復3 次取平均值，即實測值；ELISA 法檢測HBsAb、HBsAg 高值血清標本進行3 次重復測定，取均值作為實驗理論值。回收率=各濃度實測值/理論值×100%。

1.5 統計學分析

采用Excel 2019 軟件錄入數據，用統計學軟件SPSS 25.0 處理數據；計數資料用n（%）表示，用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CMIA 法、ELISA 法檢測HBV 感染的準確率

經CMIA 法檢測發現，確診例數82 例，診斷準確率為96.47%；經ELISA 法檢測，確診例數73 例，診斷準確率為85.88%，CMIA 法診斷準確率高于ELISA 法（P＜0.05）。

2.2 CMIA 法、ELISA 法血清學標志物檢測結果分析

CMIA 法檢測HBsAg、HBeAb、HBcAb 陽性率高于ELISA 法（P＜0.05）；CMIA 法、ELISA 法檢測HBsAb、HBeAg 陽性率比較，差異無統計學意義。見表1。

表1 CMIA 法、ELISA 法血清學標志物檢測結果分析（n（%），n=85）

2.3 CMIA 法檢測HBsAb、HBsAg 回收率

HBsAg 平均回收率為97.87%（94.16%~99.71%），HBsAb 平均回收率為98.11%（96.68%~99.54%）。見表2、表3。

表2 不同濃度HBsAg 回收率

表3 不同濃度HBsAb 回收率

3 討論

乙型肝炎是常見傳染性疾病，HBV 感染是導致肝癌發生主要危險因素，約占肝癌患者的80%[6]。研究發現，長期HBV 感染患者后期發展為肝癌、肝硬化等肝臟疾病概率遠高于健康人群，嚴重時可危及患者生命[7]。臨床通過檢測血清學標志物診斷HBV 感染情況，常用血清學標志物為乙肝五項，HBsAg 是乙肝病毒的外殼物質，自身沒有傳染性，人體通常在HBV 感染后2~6 m 后，可在血液中檢測出大量HBsAg，這是感染HBV 特異性標志[8]。HBsAb 是HBV感染恢復期最早出現的特異性抗體，主要由HBsAg誘導產生，高濃度HBsAb 可及時清除體內HBV，是HBV 的免疫和保護性抗體[9]。HBeAg 可在HBV 感染后被檢測出，是一種傳染性的指標，HBeAg 檢出率上升提示肝細胞嚴重損傷，導致患者HBV 傳染性較強[10]。HBeAb是HBeAg 刺激產生的一種蛋白質，HBeAb陽性表示病毒傳染性降低，此時人體處于恢復階段[11]。HBcAb 是乙肝核心抗體，一般在表面抗原出現后4 w 左右形成，是比較敏感的血清學標志物[12]。ELISA法是檢測HBV 血清學標志物常用方法，具有靈敏、簡單快速、穩定等特點，可用于免疫反應定量、定性檢測，但該檢測方法可能出現HBsAg假陽性現象[13-14]。CMIA法是在放射免疫分析法、ELISA法基礎上改進的一種檢測方法，通過微粒子擴大抗體與待測抗原結合，結合化學發光系統、免疫反應等抗體或抗原反應。有研究發現，與ELISA 法相比，CMIA 法不僅具有特異性強、用樣少、靈敏度高，還具有操作簡便、反應時間短等特點[15]。本研究顯示，CMIA 法檢測HBV 感染的診斷準確率 96.47%高于 ELISA 法85.88%，HBsAg 平均回收率為97.87%，HBsAb 平均回收率為98.11%，表明CMIA 法用于檢測患者血清學標志物水平準確率、精密度、回收率較高，與張楠研究相似[16]。可能是因為CMIA 法全自動化設備、操作步驟簡便，可減少因檢測環境等對結果的影響，從而提高檢測準確度。此外，CMIA 法檢測HBsAg、HBeAb、HBcAb 陽性率高于ELISA 法，HBsAb、HBeAg 陽性率比較無明顯差異，表明應用CMIA 法用于檢測HBV 感染患者血清學標志物水平具有較高診斷價值。綜上所述，應用CMIA 法、ELISA 法檢測HBV 感染患者具有一定診斷價值，其中用CMIA 法檢測HBV 感染患者血清學標志物水平準確率、回收率較高，具有較高的臨床應用價值。