連山香萸顆粒對人工感染雞大腸桿菌的療效試驗

楊修鎮，劉少寧，劉霄飛，張 坤，李玉姣

（山東省畜產品質量安全中心，山東 濟南 250010）

隨著我國養禽業集約化發展迅速，雞細菌性疾病已成為日益威脅養禽業健康發展的重要疾病，其死亡率也明顯升高，其中大腸桿菌病危害嚴重，該病由大腸埃希桿菌感染引起，可出現死胚、敗血癥、腦膜炎、眼球炎、臍炎、關節滑膜炎、肉芽腫、輸卵管炎、卵黃性腹膜炎、腫頭綜合征等[1]，以敗血癥較常見，易導致死亡，給養禽業帶來巨大經濟損失。該病的治療以土霉素、新霉素、恩諾沙星等[2-3]抗菌藥物為主，禽大腸桿菌對抗菌藥物易產生耐藥性[4]，且抗菌藥物易在肌肉、內臟、蛋等產品中產生殘留危害消費者健康。

采用中藥治療禽病在我國有著悠久的歷史，具有不產生耐藥性、低毒、無有害物殘留等優點[5]。連山香萸顆粒是山東省畜產品質量安全中心研制的新獸藥，以黃連、常山、木香、吳茱萸四味藥材組成。黃連清熱燥濕、瀉火解毒，可有效殺滅痢疾桿菌等腸道致病菌；常山富含常山酮具有廣譜抗寄生蟲作用；木香行氣導滯，對腸道平滑肌有較強的解痙作用；吳茱萸散寒止痛。四味藥配伍使用擬用于治療禽腸道致病菌和寄生蟲感染引起的腹痛、腹瀉、急慢性腸炎等病癥。本試驗旨在探究連山香萸顆粒對人工感染雞大腸桿菌病的治療效果，為其臨床應用提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 22日齡SPF雞，購自濟南斯帕法斯家禽有限公司，許可證號SCXK（魯）20180005。

1.1.2 菌種與培養基 雞源大腸桿菌O1型標準菌株（CVCC 249），購自中國獸醫藥品監察所；營養瓊脂平板、營養肉湯培養基，購自廣東環凱微生物科技有限公司。

1.1.3 試驗藥物 連山香萸顆粒，由黃連、常山、木香、吳茱萸四味藥材組成，每1 g顆粒相當于原生藥材1 g，批號20210501，山東晟陽生物工程有限公司中試生產；地錦草顆粒，批號20210301，山東華爾康獸藥有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 攻毒劑量測定 依據參考文獻[6-7]方法，以大腸桿菌半數致死量（LD50）為攻毒劑量，將雞源大腸桿菌O1型標準菌株接種到營養瓊脂平板，挑選典型菌落接種于營養肉湯中，37 ℃ 培養18 h，4 ℃ 冰箱保存備用。取試驗雞80只，隨機平均分為4組，分別為菌原液10-2組、10-3組、10-4組、10-5組，頸部皮下注射0.3 mL/羽攻毒，觀察72 h，記錄死亡情況，對死亡雞進行剖檢，取臟器進行分離培養鑒定，按Reed and Muench法[8]計算半數致死量LD50＝10-3.1，為便于菌液稀釋選用攻毒濃度為10-3稀釋液，劑量為0.3 mL/羽。

1.2.2 治療試驗 依據參考文獻[9-10]方法，將180只22日齡SPF雞隨機平均分成6組，除空白對照組外，每組以攻毒劑量頸部皮下注射菌液，注射后觀察臨床表現，待出現精神萎靡、羽毛松亂、兩翼下垂、怕冷擠堆、閉眼昏睡、食欲減退、排黃綠色稀便等癥狀時投服試驗藥物。用藥前禁水2 h，試驗藥物投入少量飲水中，一日劑量平均分2次，早晚各1次，供試驗雞自由飲水，連續用藥5 d，高、中、低劑量組投藥劑量分別為4 g/L、2 g/L、1 g/L。對照藥物為地錦草顆粒，投藥劑量2 g/L，陽性對照組感染但不給藥，空白對照組不感染不給藥，其他進行一致常規飼養。觀察各組臨床癥狀，主要包括精神狀態、食欲、糞便等，記錄各組發病時間、發病及死亡情況，對死亡雞進行剖檢，取臟器進行分離培養鑒定，確定死因，連續用藥5 d，停藥后繼續觀察5 d。

1.2.3 評價指標 在試驗期間，雞經混飲給藥后，大腸桿菌感染癥狀消失，其精神狀態、食欲、呼吸等恢復正常者均屬治愈，治愈率=癥狀消失雞數/試驗雞數。用藥后治愈的和沒有死亡但有臨床癥狀表現的雞均為有效，有效率=存活雞數/試驗雞數。在試驗期間，出現大腸桿菌感染的典型癥狀并死亡，剖檢內臟能分離出大腸桿菌，判定為感染死亡，根據死亡雞數計算死亡率。

2 結果

2.1 空白對照組

空白對照組在試驗期間未出現大腸桿菌感染癥狀，精神狀態和飲食狀況均正常，試驗結束后剖檢無病變。

2.2 陽性對照組

陽性對照組在攻毒8 h后全部出現大腸桿菌感染癥狀，24 h內死亡6只，24～48 h死亡8只，48～72 h死亡1只，72 h后無死亡出現，試驗結束時有3只已無明顯癥狀。剖檢病死雞，可見盲腸、十二指腸出血，取臟器進行分離培養鑒定證實為大腸桿菌感染。

2.3 治療組

治療組在攻毒8 h后全部出現大腸桿菌感染癥狀，用藥24 h后精神狀態明顯好轉，采食量稍有增加。高劑量組24 h內死亡1只，24～48 h死亡1只，72 h后逐步恢復正常，試驗結束時有輕微臨床癥狀者5只；中劑量組24 h內死亡2只，24～48 h死亡1只，72 h后逐步恢復正常，試驗結束時有輕微臨床癥狀者6只；低劑量組24 h內死亡4只，24～48 h死亡3只，72 h后逐步恢復正常，試驗結束時有輕微臨床癥狀者10只；對照藥物組24 h內死亡3只，24～48 h死亡2只，72 h后逐步恢復正常，試驗結束時有輕微臨床癥狀者7只（表1）。

表1 連山香萸顆粒對雞大腸桿菌病治療結果

對試驗雞治愈率和有效率進行X2檢驗，結果表明連山香萸顆粒高、中劑量組與對照藥物相比差異顯著（P＜0.05）。山香萸顆粒高、中劑量組治愈率分別為76.67%和70.00%，有效率高達93.33%和90.00%，表明對人工感染雞大腸桿菌病具有明顯治療效果。

3 討論與結論

山東地區禽大腸桿菌耐藥性嚴重，有學者[11]研究表明對泰樂菌素的耐藥率達100%，對克林霉素的耐藥率達95.6%，對阿莫西林、土霉素、磷霉素的耐藥率也超過80%。高迎春等[6]通過中藥提取物對耐藥菌株持續進行耐藥性消除試驗，尋找出具有抗耐藥的地錦草提取物，研發了地錦草顆粒，故選取其為對照藥物評價連山香萸顆粒的治療效果。與已有文獻[7,12-13]報道的復方白頭翁顆粒、錦珠草顆粒、苦參功勞顆粒對人工感染雞大腸桿菌的治療效果相比較，連山香萸顆粒具有明顯優勢，且生產工藝[14]先進，可在10～30℃的水中快速分散混懸均勻，避免了傳統中藥顆粒需要熱水沖泡的缺點，能更好地滿足集約化養殖用藥需求。

本試驗證明連山香萸顆粒對人工感染雞大腸桿菌病具有良好的治療效果，高、中劑量組治愈率分別為76.67%、70.00%，有效率分別為93.33%和90.00%，考慮經濟成本，以中劑量為推薦劑量用于雞大腸桿菌病的臨床治療。