毒胡蘿卜素聯合吉非替尼改善人肺腺癌細胞PC9/GR 的耐藥性研究

杜江源，張蘭林，蔡同凱，曹永兵

（1.上海中醫藥大學附屬中西醫結合醫院脈管病研究所, 上海 200082；2.上海市同濟醫院, 上海 200065；3.海軍軍醫大學, 上海 200433）

針對非小細胞肺癌（NSCLC）的靶向藥EGFRTKIs，自第一代問世以來發展迅速，目前第四代已在臨床研發階段。但由于新的耐藥突變的不斷產生，導致其應用受限。因此如何克服EGFR-TKIs耐藥問題和尋找可改善肺癌靶向治療耐藥的藥物已成當務之急。植物來源的單體成分種類繁多，應用前景巨大。毒胡蘿卜（Thapsia garganicaL.，傘形科毒胡蘿卜屬）是于地中海西部沿海地區發現的一種開花植物，一直被作為止痛劑應用于傳統醫學。毒胡蘿卜素是從該植物中分離的單體化合物，作為內質網應激（ERS）的誘導劑，近年也被用于抗腫瘤和抗病毒研究。吉非替尼作為第一代EGFR-TKIs，副作用小，有效率高。本研究旨在探討毒胡蘿卜素和吉非替尼聯合用藥對人肺腺癌耐藥細胞株PC9/GR耐藥性的影響，并探討其可能的機制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

吉非替尼（純度99.94%，HY-50 895）、毒胡蘿卜素（純度99.95%，HY-13 433）、CCK8 試劑（HYK0301-500T）均購自美國MCE 公司；胎牛血清（F8318-500ML）和DMEM 培養基（D6429-500ML）購自美國Sigam Aldrich 公司；胰酶（25 200-072）購自美國Gibco 公司；凋亡試劑盒（559 763）購自美國BD 公司； ATF-6 抗體（#65880）、IRE1α 抗體（#3294）均購自美國CST 公司；羊抗兔二抗（AS003）購自abclonal；PVDF 膜購自Millipore；其余試劑均為國產分析純試劑。人肺腺癌細胞（PC9）由同濟醫院惠贈，PC9/GR 細胞購自湖南豐暉生物科技有限公司。

圖1 吉非替尼對PC9 和PC9/GR 細胞增殖率的影響

圖2 毒胡蘿卜素對PC9 和PC9/GR 細胞增殖的影響

圖3 不同濃度的毒胡蘿卜素聯合吉非替尼對PC9/GR 增殖的影響

1.2 方法

1.2.1 細胞株及細胞培養