HPV檢測聯合TCT檢查在宮頸上皮內瘤變診斷中的應用價值

陳麗娜 張惠菊 謝春紅

宮頸上皮內瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）是指宮頸上皮細胞發生異常增生和變異，但尚未轉變為宮頸癌的早期病變。CIN 通常由人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染引起，尤其是高危型HPV，性行為活躍的女性更容易感染HPV，由于CIN 患者存在較高的癌變風險，因此定期進行宮頸篩查和HPV 疫苗接種對于預防CIN 的發生較為重要[1]。CIN 通常分為3 個不同程度的病變，即CIN Ⅲ級、CIN Ⅱ級、CIN Ⅰ級，代表了上皮細胞異常程度的遞增。對于CIN Ⅰ級，可能自然消退而無需干預，僅需定期進行宮頸細胞學檢查或宮頸活檢等來監測病情；對于CIN Ⅱ級和CIN Ⅲ級，一般需要通過手術或局部破壞治療來切除或銷毀異常的宮頸組織[2]。因此，早期診治CIN 病變具有重要的意義。HPV 檢測是通過檢測HPV 感染來判斷女性是否存在宮頸上皮細胞發生異常的風險，可以在早期發現HPV 感染，尤其是高危型HPV 感染，從而提供預防宮頸癌和CIN 的機會[3]。液基薄層細胞學（thinprep cytologic test，TCT）檢查是通過對宮頸細胞進行顯微鏡下的檢查來評估細胞的形態學變化，可以發現宮頸上皮細胞的異常變化，如CIN、宮頸癌細胞等。這種檢查也可以同時進行HPV 檢測，以提高CIN 的診斷準確性[4]。通常情況下，HPV 檢測和TCT檢查結合可以提供更全面的評估和診斷。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2021年1—12月在廈門醫學院附屬第二醫院檢驗科進行CIN 篩查的416 例女性，均進行過HPV 檢測與TCT 檢查。納入標準：（1）疑似CIN。（2）出現陰道出血、白帶異常等異常癥狀。（3）有性生活史。（4）月經結束后3 ～7 d。（5）患者均知情同意。（6）無惡性腫瘤。排除標準：（1）全身性感染。（2）子宮、宮頸手術史。（3）檢查前3 d 內性生活或外陰清洗、陰道用藥。（4）嚴重腎臟功能損傷。（5）合并陰道炎癥或其他婦科疾病。（6）精神類疾病。其中150 例經宮頸組織病理學診斷確診為CIN，年齡22 ～67 歲，平均（41.36±5.51）歲；身體質量指數18.3 ～26.8 kg/m2，平均（21.87±0.79）kg/m2；孕次1 ～5 次，平均（2.36±0.28）次；產次0 ～3 次，平均（1.68±0.25）次。266 例非CIN，年齡23 ～68 歲，平均（41.77±5.62）歲；身體質量指數18.5 ～26.0 kg/m2，平均（21.69±0.84）kg/m2；孕次1 ～5 次，平均（2.34±0.31）次；產次0 ～3 次，平均（1.73±0.21）次。本研究獲廈門醫學院附屬第二醫院醫學倫理委員會批準[倫審2020（53）號]。

1.2 方法

（1）樣本的收集與存儲。采用一次性HPV 取樣器（麥瑞科林，95000L）和TCT 取樣器（深圳康安達，11001 型），在子宮頸部位進行順時針旋轉，以便從宮頸外口與宮頸管內收集到脫落細胞。收集完畢后，將脫落的細胞妥當地放入HPV 取樣管和TCT 儲存液瓶中進行保存。

（2）HPV 檢測。以聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）體外擴增及DNA 反向點雜交相結合技術檢測HPV 分型，儀器選用杭州BIOER 科技有限公司生產的Line Gene 9660 熒光定量PCR 儀，試劑采用廣東凱普生物科技股份公司的HPV 分型檢測試劑盒，可檢出24 種高危型及低危型HPV 感染，具體操作步驟依據試劑盒的說明書開展。在HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68 等高危HPV 型別當中，至少發現1 種即可判定為陽性，否則認定為陰性。

（3）TCT 檢查。取得TCT 的保存液瓶，同時搜集宮頸的脫落細胞。然后，以半徑8 cm 和速度1 200 r/min 進行5 min的離心操作。離心后，拋棄上方的液體。借助一體化制片染色設備（湖北德立森科技）進行處理，最后做成直徑2 cm的細胞涂片薄層。涂片制作完畢后，進行封片和顯微鏡檢查。所有流程均按照伯塞斯達系統的宮頸細胞學評定進行。對宮頸鱗狀上皮內疾病進行等級劃分，各個級別包括：①有鱗狀上皮癌的情況。②存在比較嚴重的鱗狀上皮內疾病。③存在非常規鱗狀細胞，但不能排除有嚴重鱗狀上皮內疾病的可能。④低級別的鱗狀上皮內疾病存在。⑤存在無明確解釋的非典型鱗狀細胞。⑥有上皮內疾病或惡性疾病的情況。把有上皮內疾病或惡性疾病的情況義為陰性，而把其他的所有疾病定義為陽性。

（4）病理學檢查。采用電子陰道鏡和活檢鉗，按照規定的3、6、9、12 點四處取樣，這只針對正常狀況下的檢測；若存在異常，則在異常區域進行更多的取樣。取得的樣本立即放入含有10%甲醛的液體中以固定，再交由病理科進行深入檢查。根據病理學的診斷標準，宮頸病可以分為5 種類型：①宮頸癌（含有鱗癌、腺癌）。②CIN Ⅲ級。③CIN Ⅱ級。④CIN Ⅰ級。⑤正?；蜓装Y。在這些診斷中，如果結果顯示為正?；蜓装Y，則結果為陰性；而其他所有的診斷結果均視作陽性。

1.3 觀察指標

（1）進行HPV 檢測、TCT 檢查，以宮頸組織病理學診斷為“金標準”，分別計算HPV 檢測、TCT 檢查及兩者聯合用于臨床診斷CIN 的結果與宮頸組織病理學診斷結果的一致性Kappa 值。（2）計算HPV 檢測、TCT 檢查及兩者聯合用于臨床診斷CIN 的敏感度、特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值，并比較3 種診斷方式的診斷效能。

1.4 統計學處理

采用SPSS 22.0 統計學軟件進行數據處理。計量資料以（±s）表示，組間比較采用獨立樣本均數t檢驗；計數資料以n（%）表示，采用χ2檢驗。用Kappa 值檢驗HPV檢測聯合TCT 檢查與宮頸組織病理學診斷結果的一致性。檢驗水準α＝0.05。

2 結果

2.1 HPV 檢測、TCT 檢查結果

宮頸組織病理學診斷結果顯示，進行CIN 篩查的416例女性中150 例確診為CIN，266 例為陰性。HPV 檢測、TCT 檢查及兩者聯合診斷結果見表1。聯合診斷結果與宮頸組織病理學診斷結果的Kappa 值為0.877，高于HPV 檢測與宮頸組織病理學診斷結果的Kappa 值0.749，也高于TCT檢查與宮頸組織病理學診斷結果的Kappa 值0.694。

表1 HPV 檢測、TCT 檢查結果（例）

2.2 HPV 檢測、TCT 檢查及聯合診斷的診斷效能

HPV 檢測、TCT 檢查聯合診斷宮頸癌的敏感度、特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值均高于HPV 檢測、TCT檢查，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 HPV 檢測、TCT 檢查及聯合診斷的診斷效能（%）

3 討論

CIN 是指宮頸上皮細胞發生異常增生和變異的病，通常是由HPV 感染引起，并經過多年的發展可能逐漸演變為宮頸癌[5]。CIN 是宮頸癌的前期病變，如不及時治療，可能會進一步發展成宮頸癌，而宮頸癌是全球女性最常見的惡性腫瘤之一，嚴重影響女性的健康和生活質量[6]。CIN 可導致子宮頸功能受損，影響生育能力，在治療過程中，一些手術方法可能會對宮頸造成創傷，進而影響妊娠和分娩[7]。CIN 的診斷和治療過程會給患者帶來心理和情感上的壓力，擔心疾病的進展、治療效果和未來健康均會對患者產生負面影響。

早期發現和治療CIN 可以顯著降低宮頸癌的發病率和死亡率；因此，定期接受宮頸癌篩查，并根據醫生的建議進行相關的檢查和治療非常重要。常用的篩查方法包括HPV 檢測與TCT 檢查，HPV 可以檢測感染情況，從而提供更準確的宮頸癌風險評估，TCT 檢查通過觀察宮頸細胞形態學的變化來評估是否存在異常[8]。HPV 是宮頸癌和CIN的主要致病因子之一，HPV 感染與宮頸癌發生的風險密切相關。HPV 檢測通常通過采集宮頸拭子或組織樣本，然后進行分子生物學技術檢測，以確定是否存在HPV 感染，并進一步鑒定感染的HPV 型別[9]。常見的HPV 檢測方法包括PCR、液基細胞培養和原位雜交等。診斷CIN 時，HPV檢測可敏感地檢測出HPV 感染，尤其是高危型HPV 感染，這對早期發現潛在的CIN 非常重要，從而提供更早的治療干預機會[10]。HPV 檢測可以區分不同類型的HPV 病毒，包括高危型和低危型，這有助于評估感染的HPV 型別與宮頸癌發生的風險相關性。HPV 感染被認為是CIN 和宮頸癌的潛在前兆，通過定期進行HPV 檢測，可以監測感染情況及其持續時間，從而更好地評估患者的癌變風險。與傳統的宮頸細胞學檢查相比，HPV 檢測可以作為輔助手段來提高宮頸癌的篩查準確性，HPV 檢測可以在早期檢測到HPV 感染，即使沒有明顯異常細胞，仍有存在CIN 的風險。TCT 是一種常用的宮頸癌篩查方法，通過收集宮頸細胞樣本，并在實驗室中進行細胞學檢查，以評估細胞形態學的異常變化[11]。TCT 檢查可以更好地減少血液、炎癥細胞和其他干擾物質的存在，使細胞樣本在顯微鏡下更清晰可辨。由于細胞分散均勻，TCT 檢查能夠更準確地檢測到早期的CIN 和宮頸癌前病變，提高檢出率。TCT 檢查樣本通常可用于后續的HPV 檢測，通過結合HPV 檢測，進一步評估患者是否存在高風險的HPV 感染，從而更好地評估宮頸癌的風險[12]。TCT 檢查可以保存樣本，以便進行再次檢查和重復測試，有助于減少假陰性和假陽性結果。

本研究結果顯示，聯合診斷結果與宮頸組織病理學診斷結果的Kappa 值為0.877，高于HPV 檢測與宮頸組織病理學診斷結果的Kappa 值0.749，也高于TCT 檢查與宮頸組織病理學診斷結果的Kappa 值0.694。HPV 檢測、TCT 檢查聯合診斷宮頸癌的敏感度為96.00%（144/150）、特異度為93.23%（248/266）、準確度為94.23%（392/416）、陽性預測值為88.89%（144/162）、陰性預測值為97.64%（248/254），均高于HPV 檢測[87.33%（131/150）、88.72%（236/266）、88.22%（367/416）、81.37%（131/161）、92.55%（236/255）]、TCT 檢 查[88.67%（133/150）、83.46%（222/266）、85.34%（355/416）、75.14%（133/177）、92.89%（222/239）]?？梢?，聯合兩者診斷宮頸癌前病變可提升診斷的準確性，有助于提高早期診斷率，減少假陽性和假陰性結果，進而改善患者的管理和治療方案制訂?？赡苁怯捎贖PV 檢測和TCT 檢查是2 種不同的方法，從不同方面對宮頸癌前病變進行評估；TCT 檢查主要通過觀察細胞形態學的異常變化來確定是否存在CIN，而HPV 檢測則可以檢測到感染高危型HPV 病毒的存在，這2種方法的結果互為補充，提供了更全面的信息[13-14]。CIN 通常在早期沒有明顯的癥狀，但可能已經存在HPV 感染，單獨的TCT 檢查可能會錯過早期病變，而聯合HPV 檢測可以提高早期病變的檢出率，增加診斷的敏感性[15]。因此，HPV 檢測與TCT 檢查的聯合使用可以提供更全面、準確的信息來評估CIN 的風險和存在，幫助醫生更好地評估患者的宮頸癌風險，并為每例患者制訂個體化的管理計劃。

綜上所述，HPV 檢測與TCT 檢查在臨床診斷CIN 中均具有一定的應用價值，兩者聯合可提升診斷價值。