卵巢癌組織中LncRNA SNHG11、miR-184 表達與患者臨床病理特征和預后的關系

楊洋，胡娟，黃潤強

1 十堰市太和醫院婦科，湖北 十堰 442000；2 三峽大學附屬仁和醫院婦科

卵巢癌是臨床常見的女性生殖系統惡性腫瘤之一，2022 年我國卵巢癌新發病例57 090 例，死亡39 306 例，嚴重威脅女性生命健康［1］。及時評估卵巢癌患者預后對促進其預后改善很有必要。長鏈非編碼核糖核酸（LncRNA）、微小核糖核酸（miRNA）等非編碼核糖核酸（ncRNA）是基因組的新興元素，雖不編碼蛋白質，但參與腫瘤細胞增殖、分化、侵襲、轉移、耐藥、凋亡等的調控［2］。LncRNA小核仁核糖核酸宿主基因11（SNHG11）是新發現的LncRNA 成員，其在卵巢癌中異常表達［3］。LncRNA SNHG11 與食管鱗癌、肝細胞癌患者預后有關［4-5］。miR-184 是進化高度保守的一種miRNA，在卵巢癌中異常表達［6］。miR-184 與舌鱗狀細胞癌、腎透明細胞癌患者預后有關［7-8］。本研究擬探討卵巢癌組織中LncRNA SNHG11、miR-184 表達與臨床病理特征和預后的關系，旨在為改善患者預后提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2019 年1 月—2020 年5 月在十堰市太和醫院手術切除的104 例份卵巢癌組織及其癌旁組織（距離癌組織邊緣≥2 cm 且經病理檢查為正常組織）標本，取樣后立即液氮速凍后保存于-80 ℃冰箱中?；颊吣挲g31～74（60.54 ± 5.68）歲；病理類型：漿液性癌83例、黏液性癌21例；腫瘤最大徑≥3 cm 41例、＜3 cm 63例；分化程度：低分化39例、中高分化65 例；國際婦產科聯盟（FIGO）分期［9］：Ⅰ～Ⅱ期41例、Ⅲ期63例；淋巴結轉移45例。納入標準：患者或家屬知情同意；經病理檢查確診為卵巢癌；初次確診，且入院前未接受化療、放療、免疫治療、靶向治療等。排除標準：年齡＜18 歲；臨床資料不完整；繼發性卵巢癌；合并其他部位惡性腫瘤；合并自身免疫性疾??；合并精神疾病。本研究經醫院倫理委員會批準。

1.2 卵巢癌組織中LncRNA SNHG11、miR-184 檢測 采用實時熒光定量PCR 法。將凍存組織剪碎后，用RNA 提取試劑盒［天根生化科技（北京）有限公司］提取組織總RNA，分光度計測定吸光度。用逆轉錄試劑盒（北京百邁客生物科技有限公司）將RNA 轉錄為互補RNA 后，用熒光定量PCR 試劑盒（北京百邁客生物科技有限公司），以互補RNA 為模板進行反應。反應體系：互補RNA 5 μL、2×SYBR Green PCRmix 12.5 μL、上游引物1.0 μL、下游引物1.0 μL，ddH2O 加至總體積25 μL。反應條件：95 ℃加熱10 min，95 ℃變性10 s、64 ℃退火10 s、延伸72 ℃ 30 s 循環35 次。LncRNA SNHG11 上游引物5'-TGGGAGTTGTCATGTTGGGA-3'，下游引物5'-ACTCGTCACTCTTGGTCTGT-3'；內參GAPDH 上游引物5'-ATGTTCGTCATGGGTGTGAA-3'，下游引物5'-CAGTGATGGCATGGACTGT-3'。 miR-184 上游引物5'-TGGACGGAGAACTGAUAAGGGT-3'，下游引物5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3'；內參U6 上游引物5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，下游引物5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。用2-ΔΔCT法計算組織中LncRNA SNHG11、miR-184相對表達量。

1.3 預后隨訪 通過電話或門診對卵巢癌患者隨訪3 年，第1 年每3 個月隨訪1 次，之后2 年每6個月隨訪1 次。隨訪至患者死亡或2023 年5 月，統計患者生存率。

1.4 統計學方法 采用SPSS28.0 統計軟件。計量資料以-x±s表示，比較采用配對或獨立t檢驗；采用Pearson 相關法分析卵巢癌組織中LncRNA SNHG11與miR-184表達的相關性；用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，用Log-rank 檢驗比較生存率；用多因素Cox回歸分析卵巢癌患者預后的影響因素。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 卵巢癌組織與癌旁組織中LncRNA SNHG11、miR-184表達比較 卵巢癌組織中LncRNA SNHG11表達高于癌旁組織，miR-184 表達低于癌旁組織（P均＜0.05）。見表1。

表1 卵巢癌組織與癌旁組織中LncRNA SNHG11、miR-184相對表達量比較（-x ± s）

2.2 卵巢癌組織中LncRNA SNHG11 與miR-184 表達的相關性 用StarBase 軟件預測發現，LncRNA SNHG11 與miR-184 存在結合位點。Pearson 相關分析顯示，卵巢癌組織中LncRNA SNHG11 表達與miR-184表達呈負相關（r＝-0.711，P＜0.05）。

2.3 LncRNA SNHG11、miR-184表達與卵巢癌患者臨床病理特征的關系 不同分化程度、FIGO 分期、淋巴結轉移的卵巢癌組織中LncRNA SNHG11、miR-184 表達比較差異有統計學意義（P均＜0.05），不同年齡、病理類型、腫瘤最大徑的卵巢癌組織中LncRNA SNHG11、miR-184 表達比較差異無統計學意義（P均＞0.05）。見表2。

表2 LncRNA SNHG11、miR-184表達與卵巢癌患者臨床病理特征的關系（-x ± s）

2.4 LncRNA SNHG11、miR-184表達與卵巢癌患者預后的關系 104 例卵巢癌患者隨訪3 年，死亡45例，總生存率為56.73%（59/104）。根據卵巢癌組織中LncRNA SNHG11、miR-184 表達均值分為高/低表達組。LncRNA SNHG11 高表達組（≥2.27，53 例）總生存率45.28%（24/53）低于LncRNA SNHG11 低表達組（＜2.27，51 例）的68.63%（35/51）；miR-184高表達組（≥1.02，54 例）總生存率68.52%（37/54）高于miR-184 低表達組（＜1.02，50 例）的44.44%（22/50）；比較差異有統計學意義（P均＜0.05）。

2.5 卵巢癌患者預后的單因素和多因素Cox 回歸分析 以隨訪時間為時間變量，臨床病理特征和LncRNA SNHG11、miR-184 為自變量，生存狀態（死亡/存活=1/0）為因變量。多因素Cox 回歸分析顯示，FIGO 分期Ⅲ期、淋巴結轉移、LncRNA SNHG11≥2.27 為卵巢癌患者死亡的獨立危險因素，miR-184≥1.02為獨立保護因素（P＜0.05）。見表3。

表3 影響卵巢癌患者預后的單因素和多因素Cox回歸分析結果

3 討論

卵巢癌是起源于輸卵管或卵巢上皮細胞的惡性腫瘤，根治性切除是早期卵巢癌最有效的治療方法，但由于卵巢深處盆腔且卵巢癌早期無特異性癥狀，導致70%左右的患者在初診時即為晚期，失去最佳切除時機［10］。盡管近年來腫瘤細胞減滅術和化療、放療、免疫、靶向等治療技術或藥物取得較大進展，但仍難以獲得滿意的療效，且隨著治療時間的延長，耐藥和復發轉移愈發常見，導致卵巢癌患者總體預后仍然較差［11-13］。分析卵巢癌患者預后相關因素，對指導臨床干預和改善患者預后意義重大。

卵巢癌是多種因素和機制導致的一種實體腫瘤，細胞內外的ncRNA 能通過轉錄或轉錄后調控等方式調控細胞多種病理生理功能，進而參與卵巢癌發生、發展［14］。LncRNA 是長度＞200 個核苷酸的ncRNA，該類ncRNA雖然缺乏典型的開放閱讀框，但能通過海綿miRNA競爭性結合信使核糖核酸或直接調控信使核糖核酸，參與蛋白質調節、轉錄調節、表觀遺傳調控等過程，進而參與腫瘤進程［15］。LncRNA SNHG11 是定位于人染色體20q11.23 上的一種LncRNA，參與多種惡性腫瘤過程。如LncRNA SNHG11 能靶向miR-324-3p 上調血管內皮生長因子A，促進胰腺癌細胞增殖、遷移和血管生成［16］；LncRNA SNHG11能靶向下調miR-193a-5p表達促進非小細胞肺癌細胞增殖、侵襲和遷移［17］。上述研究提示，LncRNA SNHG11 是一種促癌基因。研究顯示，LncRNA SNHG11 表達升高與結直腸癌、前列腺癌患者預后不良有關［18-19］。有研究報道，LncRNA SNHG11 在卵巢癌中呈高表達［3］。然而關于LncRNA SNHG11 與卵巢癌患者的關系尚不清楚。本研究結果顯示，卵巢癌組織中LncRNA SNHG11高表達，與分化程度、FIGO 分期和淋巴結轉移有關，提示LncRNA SNHG11 高表達參與卵巢癌發生發展。分析原因可能是LncRNA SNHG11 表達升高能結合β-連環蛋白激活Wnt/β-連環蛋白途徑，促進卵巢癌細胞增殖、遷移、侵襲和血管生成，導致卵巢癌惡性進展［20］。

miRNA是長度約22個核苷酸的單鏈ncRNA，能通過與靶標基因完全或不完全互補結合，抑制蛋白質翻譯而負向調控信使核糖核酸表達，參與腫瘤進程［21］。miR-184是定位于人染色體7q32.2上的一種以miR-183/96/182 基因簇形式存在的miRNA。近年多項研究證實miR-184 可參與腫瘤進程，如miR-184能靶向下調鋅指蛋白3表達，調控上皮間質轉化，促進口腔鱗狀細胞癌細胞增殖、遷移及侵襲［22］；miR-184能靶向下調補體1和腫瘤壞死因子受體6 表達，抑制肺腺癌細胞惡性進展［23］。上述研究提示，miR-184 在腫瘤發生、發展過程中發揮促癌或抑癌作用。實驗報道，miR-184 在卵巢癌中呈低表達［6］。且相關研究顯示，miR-184 異常表達與胃癌、肝細胞癌患者預后不良有關［24-25］。本研究結果顯示，卵巢癌組織中miR-184 低表達，與卵巢癌分化程度、FIGO 分期和淋巴結轉移有關，提示miR-184 低表達參與卵巢癌發生、發展。分析原因可能是miR-184 表達降低會導致類Sm 蛋白4 表達上調，導致細胞周期紊亂，使卵巢癌細胞不受控制的增殖、分化、遷移和侵襲，促進卵巢癌惡性進展［6］。

本研究通過StarBase 軟件預測發現，LncRNA SNHG11與miR-184存在結合位點，相關性分析也發現二者在卵巢癌組織中表達呈負相關，提示LncRNA SNHG11 和miR-184 可能共同參與卵巢癌進程。李少儒等［3］通過雙熒光素酶報告基因實驗也證實LncRNA SNHG11 與miR-184 存在靶向關系，下調LncRNA SNHG11 表達能靶向上調miR-184 表達，降低卵巢癌細胞增殖、遷移與侵襲能力。本研究結果還顯示，LncRNA SNHG11高表達患者總生存率較低表達患者低，是卵巢癌患者死亡的獨立危險因素；miR-184 高表達患者總生存率較低表達患者高，是卵巢癌患者死亡的獨立保護因素。這說明卵巢癌組織中LncRNA SNHG11、miR-184 表達與患者預后有關，可能成為卵巢癌預后評估新的標志物。

綜上所述，卵巢癌組織中LncRNA SNHG11 高表達，miR-184 低表達，二者表達變化與分化程度、FIGO 分期、淋巴結轉移和預后有關。但本研究結果還需多中心研究進行驗證。