子宮肌瘤患者血清lncRNA MIAT 和lncRNA XIST 的表達及臨床意義

李玉萍 馬 會 禹 航

子宮肌瘤是育齡婦女最常見的子宮良性腫瘤之一，發(fā)病率高，且有20%～40% 的子宮肌瘤患者會發(fā)生惡性病變[1-2］，其主要臨床癥狀包括月經(jīng)過多、異常子宮出血、不孕、反復自然流產(chǎn)和其他盆腔疾病[3］。此外，子宮肌瘤是導致子宮切除的主要事件，嚴重影響著患者的生活質(zhì)量[4］。超聲是評估子宮肌瘤的一線成像技術，它可提供形態(tài)學特征信息，例如病變的囊性區(qū)域、回聲、邊界和血管化[5］。然而，超聲容易受到患者腸道氣體的干擾影響檢查結(jié)果。血清標志物對于腫瘤的早期篩查具有效率高、創(chuàng)傷小等優(yōu)點[6］，因此，深入挖掘新的診斷子宮肌瘤的血清標志物具有重要的意義。長鏈非編碼RNA（long non coding RNA，lncRNA）心肌梗死相關 轉(zhuǎn) 錄 本（myocardial infarction associated transcript，MIAT） 、lncRNA X 染色體失活特異轉(zhuǎn)錄本（ X inactive specific transcript，XIST）作為近年來在腫瘤中研究較為火熱的lncRNA，已有研究報道，lncRNA MIAT 在子宮肌瘤組織中呈高表達狀態(tài)[7］；lncRNA XIST 在平滑肌瘤組織中的表達水平顯著高于匹配的子宮肌層組織[8］。以上研究表明lncRNA MIAT、lncRNA XIST 可能參與子宮肌瘤的發(fā)生與發(fā)展。目前關于lncRNA MIAT、lncRNA XIST 在子宮肌瘤患者血清中的表達以及將lncRNA MIAT、lncRNA XIST 作為血清標志物來診斷子宮肌瘤的研究較少。因此，本研究主要探究lncRNA MIAT、lncRNA XIST 在子宮肌瘤患者血清中的表達及對子宮肌瘤的診斷價值，旨在為子宮肌瘤的臨床診治提供新的理論參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年5 月至2022 年5 月在張家口市婦幼保健院就診的120 例子宮肌瘤患者作為子宮肌瘤組，年齡21～58 歲，平均（43.5±2.5）歲；身體質(zhì)量指數(shù)（body mass index，BMI）19.21～23.57 kg/m2，平均（21.35±3.28） kg/m2。其中年齡＜40 歲54 例，≥40歲66 例；肌瘤最大徑＜5 cm 42 例，≥5 cm 78 例；肌瘤數(shù)目分為＜2 個44 例，≥2 個76 例；無乳腺增生43 例，有乳腺增生77 例；未絕經(jīng)65 例，絕經(jīng)55 例；流產(chǎn)次數(shù)＜2 次50 例，≥2 次70 例；無婦科疾病52 例，有婦科疾病68 例。納入標準：①經(jīng)影像學檢查確診為子宮肌瘤，且符合子宮肌瘤的診斷標準；②經(jīng)檢查無其它內(nèi)分泌性疾病；③經(jīng)檢查無其它腦部疾病；④經(jīng)檢查無其它免疫性疾病；⑤經(jīng)檢查無嚴重肝腎疾病。排除標準：①近3 個月接受過激素治療或者其它治療的患者；②同時患有子宮內(nèi)膜異位癥的患者；③患有嚴重精神疾病的患者。同時選擇同時期在本院進行體檢的120 例健康體檢者作為對照組，對照組無子宮肌瘤，其他納入排除標準同子宮肌瘤組，全為女性，年齡20～59 歲，平均（43.0±3.0）歲，BMI 19.73～23.94 kg/m2，平均（21.52±3.71） kg/m2。兩組患者年齡、BMI 比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究已經(jīng)獲得本院倫理委員會的批準（倫理審批號：20180412001），所有參與者均知情并簽署了知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 血液樣本的采集 分別采集子宮肌瘤組患者入院當日以及對照組體檢當日的空腹靜脈血5 mL，利用高速離心機在4℃條件下以3 000 r/min 的轉(zhuǎn)速離心20 min，收集血清并置于-80℃冰箱保存，用于后續(xù)lncRNA MIAT、lncRNA XIST 表達水平的檢測。

1.2.2 實時熒光定量聚合酶鏈式反應（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）檢測血清中l(wèi)ncRNA MIAT、lncRNA XIST 表達水平 Trizol 試劑（貨號：A3180）購自北京康瑞納生物科技有限公司；Power SYBR? Green PCR master mix（貨號：4367659）購自朗智（上海）生物科技有限公司。使用Trizol 試劑提取血清中的總RNA。將1 μg RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA 后，使用Power SYBR? Green PCR master mix 進行qRTPCR 以分析lncRNA MIAT、lncRNA XIST 表達水平。GAPDH 作為lncRNA MIAT、lncRNA XIST 的內(nèi) 參 基因。使用2-ΔΔCt方法計算lncRNA MIAT、lncRNA XIST的相對表達量。引物序列見表1。

表1 qRT-PCR引物序列

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 24.0 對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。符合正態(tài)分布的計量資料均以±s表示，采用獨立樣本t檢驗比較兩組樣本間的差異；計數(shù)資料以例表示，采用χ2檢驗；用Pearson 相關性分析血清lncRNA MIAT 與lncRNA XIST 水平的相關性；多因素logistic 回歸分析子宮肌瘤患病的危險因素；用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線評價血清lncRNA MIAT、lncRNA XIST 對子宮肌瘤的診斷價值。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對象基線資料比較 兩組對象年齡、是否絕經(jīng)比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；兩組對象有無乳腺增生、流產(chǎn)次數(shù)、有無婦科疾病比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組對象基線資料比較

2.2 兩組研究對象血清中l(wèi)ncRNA MIAT、lncRNA XIST 水平比較 與對照組比較，子宮肌瘤組血清中l(wèi)ncRNA MIAT、lncRNA XIST 水平升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 各組血清中l(wèi)ncRNA MIAT、lncRNA XIST水平比較（xˉ± s）

2.3 子宮肌瘤患者血清lncRNA MIAT、lncRNA XIST表達水平與臨床病理特征的單因素分析 不同年齡、絕經(jīng)狀態(tài)的子宮肌瘤患者血清lncRNA MIAT、lncRNA XIST 表達水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。肌瘤最大徑≥5 cm、肌瘤數(shù)目≥2 個、有乳腺增生、流產(chǎn)次數(shù)≥2 次、有婦科疾病的子宮肌瘤患者血清中l(wèi)ncRNA MIAT、lncRNA XIST 表達水平明顯高于肌瘤最大徑＜5 cm、肌瘤數(shù)目＜2 個、無乳腺增生、流產(chǎn)次數(shù)＜2 次、無婦科疾病的子宮肌瘤患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4 子宮肌瘤患者血清lncRNA MIAT、lncRNA XIST表達水平與臨床病理特征的關系（±s）

表4 子宮肌瘤患者血清lncRNA MIAT、lncRNA XIST表達水平與臨床病理特征的關系（±s）

臨床病理特征年齡（歲）例數(shù)lncRNA MIAT t值0.746 P值0.457 lncRNA XIST t值0.476 P值0.635＜40≥40肌瘤最大徑（cm）＜5≥5肌瘤數(shù)目（個）＜2≥2乳腺增生無有絕經(jīng)否是流產(chǎn)次數(shù)（次）＜2≥2婦科疾病54 66 42 78 44 76 43 77 65 55 50 70 1.54±0.50 1.61±0.52 1.38±0.44 1.69±0.55 1.41±0.46 1.68±0.54 1.46±0.47 1.65±0.53 1.52±0.49 1.65±0.53 1.47±0.48 1.66±0.53 3.148 2.782 2.765 1.395 2.013 2.231 0.002 0.006 0.007 0.166 0.046 0.028 1.46±0.43 1.50±0.48 1.31±0.41 1.57±0.49 1.32±0.43 1.57±0.48 1.34±0.41 1.56±0.49 1.44±0.45 1.53±0.47 1.35±0.41 1.57±0.50 2.929 2.854 2.495 1.070 2.557 2.472 0.004 0.005 0.014 0.287 0.012 0.015無有52 68 1.46±0.47 1.67±0.54 1.36±0.42 1.57±0.49

2.4 子宮肌瘤患者血清中l(wèi)ncRNA MIAT、lncRNA XIST 表達水平的相關性 Pearson 相關性分析顯示，子宮肌瘤患者血清中l(wèi)ncRNA MIAT 與lncRNA XIST 表達水平呈正相關（r=0.458，P＜0.001）。見圖1。

圖1 子宮肌瘤患者血清中l(wèi)ncRNA MIAT、lncRNA XIST表達水平的相關性

2.5 子宮肌瘤患病影響因素的多因素logistic 回歸分析 以單因素分析中有差異有統(tǒng)計學意義的乳腺增生（≥2 次=1，＜2 次=0）、流產(chǎn)次數(shù)（有=1，無=0）、婦科疾病（有=1，無=0）、lncRNA MIAT、lncRNA XIST 表達水平（高表達=1，低表達=0）為自變量，是否患病（未患病=0，患病=1）為因變量進行多因素logistic 回歸分析。結(jié)果顯示，lncRNA MIAT 高表達、lncRNA XIST 高表達是子宮肌瘤發(fā)生的危險因素（P＜0.05）。見表5。

表5 子宮肌瘤患病影響因素的多因素logistic回歸分析

2.6 血清lncRNA MIAT、lncRNA XIST 對子宮肌瘤的診斷價值 以是否患子宮肌瘤為狀態(tài)變量（是=1，否=0），以血清lncRNA MIAT、lncRNA XIST 水平（連續(xù)變量）為檢驗變量，并利用SPSS 軟件分析二者聯(lián)合的預測概率，構(gòu)建ROC 曲線，血清lncRNA MIAT 診斷子宮肌瘤的AUC 為0.817（95%CI：0.763～0.871），靈敏度62.5%，特異度為91.7%，截斷值為1.45；血清lncRNA XIST 診斷子宮肌瘤的AUC 為0.776（95%CI：0.718～0.835），其靈敏度為71.7%，特異度為86.7%，截斷值為1.35；兩者聯(lián)合診斷子宮肌瘤的AUC 為0.846（95%CI：0.794～0.898），其 靈敏度、特異度 分別為61.2%、97.5%，兩者聯(lián)合診斷的AUC 顯著大于lncRNA XIST 單獨診斷的AUC（Z=1.734，P=0.041），兩者聯(lián)合診斷的AUC 與lncRNA MIAT 單獨診斷的AUC比 較 差 異 無 統(tǒng) 計 學 意 義（Z=0.746，P=0.228）。見圖2。

圖2 血清lncRNA MIAT、lncRNA XIST 診斷子宮肌瘤的ROC曲線

3 討論

子宮肌瘤是最常見的女性疾病。統(tǒng)計資料顯示，40%～80% 的育齡婦女被診斷患有子宮肌瘤[9］。子宮肌瘤是由于子宮肌層、平滑肌細胞層的單克隆轉(zhuǎn)化而產(chǎn)生的，可引起多種并發(fā)癥，如不孕、流產(chǎn)、出血、疼痛、痛經(jīng)和月經(jīng)過多等[10］。除子宮切除術外，大多數(shù)治療通常只能提供暫時的緩解，并非對所有患者都有效。此外，該病對婦女的生產(chǎn)力和曠工率也有明顯的影響[11］。因此，挖掘新的血清生物標志物用于診斷子宮肌瘤，對于早期干預該疾病具有重要意義。

lncRNA 是長度＞200 nt 的非編碼RNA，其不具有編碼蛋白質(zhì)的能力，但它們在骨肉瘤、子宮肌瘤等腫瘤的發(fā)病機制中發(fā)揮關鍵作用[12］。lncRNA MIAT 是一種與心肌梗死易感性相關的lncRNA[13］。據(jù)報道，lncRNA MIAT 在卵巢癌組織中高表達，沉默lncRNA MIAT 可抑制卵巢癌細胞增殖、遷移與侵襲[14］；甲狀腺癌組織lncRNA MIAT 表達水平上調(diào)，lncRNA MIAT 在組織中的表達水平與甲狀腺癌患者UICC 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關[15］；lncRNA MIAT 在肝癌患者血清中高表達，血清lncRNA MIAT 水平可作為診斷肝癌的生物學標志物，其在評估肝癌的惡性進展、手術療效以及預測腫瘤復發(fā)方面具有潛在臨床應用價值[16］；lncRNA MIAT 高表達與胃癌患者的腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關[17］。以上研究表明lncRNA MIAT 在卵巢癌、甲狀腺癌、肝癌、胃癌等腫瘤中具有促進腫瘤進展的作用。已發(fā)現(xiàn)lncRNA XIST 在多種腫瘤中異常表達，如胰腺癌組織中的lncRNA XIST 表達量增高與腫瘤分化程度具有負相關性[18］；宮頸癌組織中l(wèi)ncRNA XIST 的表達明顯上調(diào)，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織大小及臨床分期之間存在相關性[19］；沉默lncRNA XIST 可抑制結(jié)直腸癌細胞增殖和轉(zhuǎn)移[20］。以上研究表明lncRNA XIST 在胰腺癌、宮頸癌、結(jié)直腸癌等腫瘤中發(fā)揮著癌基因的作用。而關于lncRNA MIAT、lncRNA XIST 在子宮肌瘤患者血清中的表達鮮有報道。本研究利用qRT-PCR 檢測了子宮肌瘤患者血清中l(wèi)ncRNA MIAT、lncRNA XIST 水平，結(jié)果顯示，與對照組比較，子宮肌瘤組血清中l(wèi)ncRNA MIAT、lncRNA XIST 水平升高。提示lncRNA MIAT、lncRNA XIST 可能參與了子宮肌瘤的進展。相關研究顯示，絕經(jīng)狀態(tài)、肌瘤最大徑、肌瘤數(shù)目、乳腺增生等因素與子宮肌瘤的高發(fā)病率有關[21-22］。本研究分析了子宮肌瘤患者血清lncRNA MIAT、lncRNA XIST 表達水平與臨床病理特征的關系，結(jié)果顯示，肌瘤最大徑≥5 cm、肌瘤數(shù)目≥2 個、有乳腺增生、流產(chǎn)次數(shù)≥2 次、有婦科疾病的子宮肌瘤患者血清中l(wèi)ncRNA MIAT、lncRNA XIST 表達水平明顯高于肌瘤最大徑＜5 cm、肌瘤數(shù)目＜2 個、無乳腺增生、流產(chǎn)次數(shù)＜2 次、無婦科疾病的子宮肌瘤患者，提示子宮肌瘤患者血清中l(wèi)ncRNA MIAT、lncRNA XIST 表達水平升高與子宮肌瘤的發(fā)生發(fā)展有關。Pearson 相關性分析顯示，子宮肌瘤患者血清中l(wèi)ncRNA MIAT、lncRNA XIST 表達水平呈正相關，多因素logistic 回歸分析結(jié)果顯示，lncRNA MIAT 高表達、lncRNA XIST 高表達是子宮肌瘤發(fā)生的危險因素，臨床上可根據(jù)上述指標的變化，對患者的病情做出有效的判斷。

為了進一步探究lncRNA MIAT、lncRNA XIST 是否對子宮肌瘤有診斷價值，本研究進行了ROC 曲線分析結(jié)果顯示，血清lncRNA MIAT、lncRNA XIST 診斷子宮肌瘤的AUC 分別為0.817、0.776，截斷值分別為1.45、1.35，兩者聯(lián)合診斷子宮肌瘤的AUC 為0.846，且特異性更高，有助于臨床醫(yī)生對患者是否患子宮肌瘤做出快速診斷。當患者血清lncRNA MIAT 表達水平高于1.45 且lncRNA XIST 表達水平高于1.35 時，結(jié)合其它臨床指標，可對疾病做出快速的判斷，及時干預，阻礙子宮肌瘤的進展，以改善預后。

綜上所述，子宮肌瘤患者血清中l(wèi)ncRNA MIAT、lncRNA XIST 表達水平升高，二者與子宮肌瘤發(fā)生發(fā)展顯著相關，二者聯(lián)合對子宮肌瘤具有較高的輔助診斷價值。然而，樣本量不足是本研究的不足之一，可能會導致實驗結(jié)果存在一定的誤差。因此，后期將會進一步收集大量樣本來完善和補充本研究結(jié)果。此外，lncRNA MIAT、lncRNA XIST 作為子宮肌瘤可能的診斷標志物，切除子宮肌瘤后lncRNA MIAT、lncRNA XIST 是否有變化，以及l(fā)ncRNA MIAT、lncRNA XIST 的半衰期是多少，其升高是否有新的子宮肌瘤產(chǎn)生，這將也是本研究后續(xù)研究的重要方向之一。