早產(chǎn)兒BPD 的危險(xiǎn)因素及血漿BMP-7 miR-15b 25-（OH）D3 對(duì)其診斷價(jià)值分析

馬萌萌 趙學(xué)輝 楊 潔

支氣管肺發(fā)育不良（bronchopulmonary dysplasia，BPD）是引起持續(xù)性呼吸窘迫的一種慢性肺部疾病，在早產(chǎn)兒中具有較高的發(fā)病率[1］。早產(chǎn)兒一旦發(fā)生BPD可引起黏膜上皮出現(xiàn)不可逆損傷，即使患兒接受足療程治療，也會(huì)嚴(yán)重影響生長發(fā)育[2］。因此，有效分析早產(chǎn)兒BPD 的危險(xiǎn)因素，對(duì)降低早產(chǎn)兒BPD 的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，并促進(jìn)早產(chǎn)兒生長發(fā)育意義重大。既往報(bào)道，早產(chǎn)兒BPD 的發(fā)生可能與胎齡、吸氧時(shí)間、機(jī)械通氣時(shí)間及細(xì)胞因子水平變化等有關(guān)[3-4］。骨形成蛋白-7（bone morphogenetic protein-7，BMP-7）是轉(zhuǎn)化生長因子超家族重要成員，其參與機(jī)體的肺損傷及損傷后組織修復(fù)過 程[5］。微 小 核 糖 核 酸-15b（Microribonucleic acid-15b，miR-15b）可參與細(xì)胞增殖分化、血管生成等調(diào)控過程，其水平變化與肺部疾病進(jìn)展過程有關(guān)[6］。25 羥基維生素D3[25 hydroxyvitamin D3，25-（OH）D3］是一種促進(jìn)機(jī)體生長發(fā)育的類固醇激素，其低表達(dá)可在一定程度上影響肺功能和結(jié)構(gòu)[7］。但目前關(guān)于早產(chǎn)兒BPD的危險(xiǎn)因素及血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3對(duì)其的診斷價(jià)值仍需探究。基于此，本研究以早產(chǎn)兒為對(duì)象進(jìn)行研究，旨在進(jìn)一步探索早產(chǎn)兒BPD 的危險(xiǎn)因素及血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3對(duì)其診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2022 年1 月至2023 年3月河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院收治的136 例早產(chǎn)兒的臨床資料。根據(jù)是否伴有BPD[8］，將其分為BPD 組（n=45）和非BPD 組（n=91）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①胎齡＜32 周者；②住院時(shí)間≥28 d 者；③出生后2 d 內(nèi)入院并進(jìn)行生化檢查者；④臨床資料齊全者等。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有染色體異常、嚴(yán)重先天畸形、先天性心臟病及遺傳代謝性疾病者；②并發(fā)氣胸、膈疝、胸腔積液、胎糞吸入綜合征者；③病情嚴(yán)重難以存活者；④重癥肺炎引起的肺實(shí)變、肺不張需長期氧依賴者等。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)研究倫理委員會(huì)批準(zhǔn)并同意（倫理批號(hào)：CZX2022017），患兒家屬均知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 資料收集 由經(jīng)統(tǒng)一培訓(xùn)的臨床資料調(diào)查員收集符合納入排除標(biāo)準(zhǔn)的患兒臨床資料，主要包括胎兒數(shù)目、分娩方式、出生體質(zhì)量、胎齡、性別、機(jī)械通氣時(shí)間、吸氧時(shí)間、吸氧濃度、有無胎膜早破、有無顱內(nèi)出血、有無膿毒血癥、母親年齡、母親有無妊娠高血壓綜合征、母親有無妊娠糖尿病等。

1.2.2 血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3及血清清蛋白（albumin，ALB）、前白蛋白（prealbumin，PA）水平檢測(cè) 出生后2 d 內(nèi)采集所選患兒的空腹靜脈血6 mL，取4 mL 抗凝后進(jìn)行離心處理（時(shí)間15 min，離心半徑8 cm，速率3 000 r/min），取2 mL 血漿用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定血漿BMP-7、25-（OH）D3水平，試劑盒均購自美國貝克曼庫爾特有限公司。同時(shí)取2 mL 血漿用Trizol 法（試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司）提取總核糖核酸（ribonucleic acid，RNA），得到合格標(biāo)本（濃度為100～500 ng/μL、吸光度值為1.8～2.0）后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，獲得互補(bǔ)脫氧核糖核酸（complementary deoxyribonucleic acid，cDNA），反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自北京智杰方遠(yuǎn)科技有限公司。采用ABI Prizm7300 序列檢測(cè)系統(tǒng)（美國Applied Biosystems 公司）進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reactio，PCR）測(cè)定血漿miR-15b 水平。美國賽默飛公司提供引物設(shè)計(jì)及合成，以U6 為內(nèi)參，PCR 引物序列如下：U6 正向引物為5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，反向引物為5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'；miR-15b 正向引物為5'-TAGCAGCACATAATGGTTTGTG-3'，反向引物為5'-GCGTAGCAGCACATCATGG-3'。采用2-ΔΔCt法計(jì)算miR-15b 相對(duì)濃度。另取2 mL 全血進(jìn)行離心處理（時(shí)間15 min，離心半徑8 cm，速率3 000 r/min），取血清用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定血清ALB、PA 水平，試劑盒均購自美國貝克曼庫爾特有限公司。

1.3 觀察指標(biāo) 比較兩組患兒胎兒數(shù)目、分娩方式、出生體質(zhì)量、胎齡、性別、機(jī)械通氣時(shí)間、吸氧時(shí)間、吸氧濃度、有無胎膜早破、有無顱內(nèi)出血、有無膿毒血癥、母親年齡、母親有無妊娠高血壓綜合征、母親有無妊娠糖尿病 及 血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3、血清ALB、PA 水平；分析早產(chǎn)兒發(fā)生BPD 的危險(xiǎn)因素；評(píng)估血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3對(duì)早產(chǎn)兒BPD 的診斷價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 24.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料用率表示，采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以-x±s表示，兩組間均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。采用單因素分析影響早產(chǎn)兒發(fā)生BPD 的相關(guān)因素，并利用多因素logistic 回歸分析其危險(xiǎn)因素。采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線分析血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3對(duì)早產(chǎn)兒BPD 的診斷價(jià)值。以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 早產(chǎn)兒BPD 的單因素分析 兩組患兒機(jī)械通氣時(shí)間、吸氧時(shí)間、有無膿毒血癥及血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩組胎兒數(shù)目、分娩方式、出生體質(zhì)量、胎齡、性別、吸氧濃度、有無胎膜早破、有無顱內(nèi)出血、母親年齡、母親有無妊娠高血壓綜合征、母親有無妊娠糖尿病及血清ALB、PA 水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 早產(chǎn)兒BPD的單因素分析

2.2 早產(chǎn)兒BPD 的多因素logistic 回歸分析 將有差異的單因素（機(jī)械通氣時(shí)間、吸氧時(shí)間、血漿BMP-7 水平、血漿miR-15b 水平、血漿25-（OH）D3 水平：具體數(shù)值；膿毒血癥：無=0，有=1）作為自變量，將早產(chǎn)兒BPD發(fā)生情況作為因變量（BPD=1，非BPD=0），采用向前極大似然法進(jìn)行多因素logistic 回歸分析，結(jié)果顯示，機(jī)械通氣時(shí)間長（＞均值7 d）、血漿BMP-7、miR-15b 水平偏高、血漿25-（OH）D3水平偏低是早產(chǎn)兒BPD 的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。見表2。

表2 早產(chǎn)兒BPD的多因素logistic回歸分析

2.3 血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3對(duì)早產(chǎn)兒BPD的診斷價(jià)值 以BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3為檢驗(yàn)變量，以早產(chǎn)兒BPD 發(fā)生情況為狀態(tài)變量，繪制ROC曲線，結(jié)果顯示，BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3的曲線下面積值＞0.8，準(zhǔn)確度較高，將3 項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合，其預(yù)測(cè)早產(chǎn)兒BPD 的曲線下面積值為0.947，高于3 項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)（P＜0.05），靈敏度為84.44%，特異度為90.11%。見表3、圖1。

圖1 血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3 診斷早產(chǎn)兒BPD 的ROC曲線

表3 血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3對(duì)早產(chǎn)兒BPD的診斷價(jià)值

3 討論

BPD 是早產(chǎn)兒常見的并發(fā)癥之一，在早產(chǎn)兒中具有較高的病死率，嚴(yán)重影響早產(chǎn)兒生存質(zhì)量[9-11］。因此，早診斷、早治療早產(chǎn)兒BPD，對(duì)預(yù)防早產(chǎn)兒發(fā)生反復(fù)下呼吸道感染、高反應(yīng)性氣道疾病，并促進(jìn)患兒生長發(fā)育遲緩等情況的改善尤為關(guān)鍵。

本研究發(fā)現(xiàn)，兩組患兒機(jī)械通氣時(shí)間、吸氧時(shí)間、有無膿毒血癥及血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，機(jī)械通氣時(shí)間長、血漿BMP-7、miR-15b 水平偏高、血漿25-（OH）D3水平偏低是早產(chǎn)兒BPD 的危險(xiǎn)因素。機(jī)械通氣時(shí)間長容易導(dǎo)致早產(chǎn)兒氣道黏膜受損，進(jìn)一步增加氣壓傷的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)而易損傷患兒肺組織和結(jié)構(gòu)，增加BPD 的發(fā)生概率[12-14］。BMP-7 是絲氨酸/蘇氨酸激酶受體，其可通過參與調(diào)控Smads 信號(hào)通路而參與機(jī)體肺損傷過程，正常情況下其水平較低，但當(dāng)機(jī)體發(fā)生肺損傷時(shí)其水平異常升高[15］。既往有學(xué)者指出，血漿BMP-7 是早產(chǎn)兒BPD 的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，且其對(duì)早產(chǎn)兒BPD 具有一定的診斷價(jià)值[16］，與本研究結(jié)果基本相符。BMP-7 參與早產(chǎn)兒BPD 的疾病進(jìn)展過程，考慮可能與BMP-7 水平升高可加重機(jī)體肺損傷有關(guān)。miR-15b 被認(rèn)為是一種致癌基因，可參與細(xì)胞增殖與分化過程，并可參與調(diào)節(jié)血管生成的各個(gè)階段[17-18］。血漿miR-15b在BPD 早產(chǎn)兒血漿中明顯上調(diào)[19］。miR-15b 參與早產(chǎn)兒BPD 的疾病進(jìn)展過程考慮可能與miR-15b 水平升高可損傷肺結(jié)構(gòu)和功能有關(guān)。維生素D 屬類固醇激素，在促進(jìn)機(jī)體生長發(fā)育過程中起著重要作用[20］。25-（OH）D3可通過AD 受體介導(dǎo)而和AD 反應(yīng)元件結(jié)合，發(fā)揮調(diào)節(jié)AD 靶基因表達(dá)的作用，而AD 信號(hào)通路基因在機(jī)體肺發(fā)育的囊狀期、假腺期均處于偏高水平，可在一定程度上促進(jìn)生長發(fā)育[21］。25-（OH）D3缺乏，會(huì)增加肺部炎癥發(fā)生的概率，而充足的25-（OH）D3不僅可促進(jìn)蛋白質(zhì)及肺表面活性磷脂的合成，還可促進(jìn)纖維原細(xì)胞及Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞的分化，使肺功能成熟，但當(dāng)其水平偏低時(shí)可在一定程度上影響肺功能成熟，進(jìn)而影響生長發(fā)育[22］。25-（OH）D3參與早產(chǎn)兒BPD 的疾病進(jìn)展過程，考慮可能與25-（OH）D3水平降低可影響肺功能成熟有關(guān)。此外，本研究發(fā)現(xiàn)，血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3聯(lián)合診斷早產(chǎn)兒BPD 的曲線下面積值高于血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3單獨(dú)檢測(cè)，表明血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3聯(lián)合檢測(cè)可相互補(bǔ)足，進(jìn)一步提高對(duì)早產(chǎn)兒BPD 的診斷價(jià)值。

綜上，早產(chǎn)兒BPD 的危險(xiǎn)因素與機(jī)械通氣時(shí)間長、血漿BMP-7、miR-15b 水平偏高、血漿25-（OH）D3水平偏低有關(guān)，且血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3聯(lián)合檢測(cè)對(duì)早產(chǎn)兒BPD 的診斷價(jià)值更高。