血液乙醇樣本保存條件對(duì)酒駕認(rèn)定的價(jià)值分析

姚鳳娟

周口三川司法鑒定所，河南 周口 466000

根據(jù)《車輛駕駛?cè)藛T血液、呼氣酒精含量閾值與檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)》（GB19522-2010）的規(guī)定，酒后駕車和醉駕被明確定義為血液中酒精濃度（BAC）在20mg/100ml 至80mg/100ml 之間和超過80mg/100ml 的狀態(tài)。目前，中國主要依賴呼氣式酒精檢測儀和頂空氣相色譜法兩種主要方法，來檢測涉嫌酒后駕駛或醉酒駕駛的人員。一般情況下，交通警察會(huì)在現(xiàn)場使用呼氣式酒精檢測儀來初步檢測被懷疑醉酒駕駛的司機(jī)的呼氣中的乙醇濃度（Breath Alcohol Concentration，BrAC）。對(duì)于經(jīng)測試涉嫌醉酒的人，隨后會(huì)采集其血液樣本并送往實(shí)驗(yàn)室，使用頂空氣相色譜法進(jìn)行進(jìn)一步的血液乙醇濃度檢測。

然而，問題在于這兩種檢測方法的結(jié)果往往不一致。部分人的呼氣酒精濃度較低，但血液檢測結(jié)果卻較高。而另一些人的呼氣酒精濃度較高，但血液檢測結(jié)果可能低于80mg/100ml。因此，研究呼氣值與血液檢測值存在的差異對(duì)于涉嫌酒后駕駛案件的處理具有重要意義。

一、材料與方法

（一）實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)使用無水乙醇和叔丁醇，都屬于色譜純。乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液包括不同濃度的乙醇（0.10、0.20、0.50、0.80、1.00、2.00、3.00mg/mL），并在4℃冷藏。從99.5%高純度的叔丁醇中取適量，溶解于100mL 容瓶中，加入蒸餾水并混勻，得到5.0mg/mL的對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。將該儲(chǔ)備液稀釋125 倍，制得40.0μg/mL 的內(nèi)標(biāo)工作液。

實(shí)驗(yàn)使用酒的酒精濃度為45%，從超市購買。采血使用一次性真空采血管，包括不同規(guī)格的管?？瞻籽涸醋晕捶幷撸瑢?shí)驗(yàn)中使用重蒸餾水作為實(shí)驗(yàn)水［1］。

（二）實(shí)驗(yàn)儀器

實(shí)驗(yàn)所使用的設(shè)備和條件如下：首先，使用島津GC-2010plus 色譜儀，搭配島津HS-20 頂空儀進(jìn)行分析。在色譜柱方面，采用兩種毛細(xì)柱，分別是Rtx-BAC1 和Rtx-BAC2，規(guī)格為30×0.32 毛細(xì)柱。為了維持恒定的溫度，色譜柱設(shè)置在40℃。在進(jìn)樣過程中，進(jìn)樣口的溫度保持在150℃，柱流量為5mL/min，吹掃流量為3mL/min，而分流比則為6.4。血儲(chǔ)容器包括枸櫞酸鈉1∶9 管、肝素鈉管、EDTA-k2 管、氟化鈉-草酸鉀管、枸櫞酸鈉1∶4 管。

采用兩個(gè)FID 火焰離子化檢測器檢測化合物，檢測時(shí)溫度設(shè)定為250℃。在頂空進(jìn)樣條件下，設(shè)置恒溫爐、樣品流路和傳輸線的溫度分別為65℃、105℃、110℃。樣品瓶在恒溫爐中導(dǎo)入時(shí)間為0.8min，導(dǎo)入平衡時(shí)間為0.4min，平衡10min，加壓時(shí)間為0.3min，加壓平衡時(shí)間為0.3min，進(jìn)樣時(shí)間為0.5min［2］。

（三）實(shí)驗(yàn)方法

首先，準(zhǔn)備兩個(gè)20ml 容量的頂空樣品瓶。接著，在每個(gè)瓶子中，分別加入1.00ml 濃度為40.0μg/ml 的叔丁醇內(nèi)標(biāo)溶液，以及0.20ml 待測血液樣品。隨后，密封瓶口并充分混勻，確保內(nèi)標(biāo)和待測血液樣品充分混合。

其次，將兩個(gè)密封瓶放入65℃的加熱環(huán)境中，進(jìn)行加熱處理，持續(xù)5min。之后，從每個(gè)瓶子中提取1.00ml 的液體上層氣體，提取物將用于進(jìn)行頂空氣相色譜分析。

對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析時(shí)，采用Duncan 氏新復(fù)極差法來比較不同處理之間的顯著差異性。這種方法有助于確定各處理組之間是否存在顯著性差異。數(shù)據(jù)分析過程中，借助諸如Excel 和SPSS20.0 等軟件工具，進(jìn)行數(shù)據(jù)整理、圖表繪制和統(tǒng)計(jì)分析。這包括使用單因素方差分析和重復(fù)測量數(shù)據(jù)的方差分析，以進(jìn)一步探究數(shù)據(jù)之間的差異和相關(guān)性［3］。

最后，在統(tǒng)計(jì)分析中，設(shè)定顯著性水平（α），通常取0.05。這一水平用于確定結(jié)果是否具有統(tǒng)計(jì)顯著性。通常情況下，如果觀察到的概率小于0.05，即認(rèn)為結(jié)果是顯著的，即存在顯著性差異。

二、結(jié)果與分析

（一）-20℃血液乙醇含量穩(wěn)定性隨時(shí)間產(chǎn)生的變化

在-20℃條件下，對(duì)三種真空抗凝管在4 ～8℃冰箱冷藏下血液乙醇含量的穩(wěn)定性進(jìn)行了詳細(xì)研究。結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)初期（0d 和3d）枸櫞酸鈉1∶9管、肝素管、EDTA-k2 管的血液乙醇含量分別為108.08±0.21Aa、107.57±0.4Aa，107.65±0.29 Aa、107.26±0.25Aa，107.67±0.37Aa、107.02±0.48Aa，三者相近。

隨時(shí)間推移，35d 內(nèi)各管血液乙醇含量保持相似，枸櫞酸鈉1∶9 管為107.06±0.31Aa，肝素管為106.24±0.19Ba，EDTA-k2 管為106.41±0.44 Aa，且無顯著差異。然而，42d 時(shí)枸櫞酸鈉1∶9 管和肝素管的含量急劇下降至80.77±0.40Ba 和69.27±0.46Cb，而EDTA-k2 管的含量仍保持相對(duì)穩(wěn)定（106.23±0.52Ac）。49d 時(shí)，枸櫞酸鈉1∶9管和肝素管的含量進(jìn)一步下降至80.24±1.42Ba和69.29±0.34Cb，而EDTA-k2 管的含量為106.88±0.36Ac。

隨時(shí)間推移，枸櫞酸鈉1∶9 管和肝素管的血液乙醇含量顯著下降，而EDTA-k2 管性能相對(duì)穩(wěn)定，特別是在長達(dá)49d 的儲(chǔ)存期。因此，在-20℃冰箱冷藏條件下，確認(rèn)EDTA-k2 管為最佳血液乙醇儲(chǔ)存容器，如表1 所示。法律通常要求準(zhǔn)確測量血液乙醇含量，以便判斷酒后駕駛或醉駕。因此，選擇EDTA-k2 管有助于確保法律程序的公正和司法公正［4］。

表1 三種采血管中血液乙醇含量變化

（二）檢測時(shí)間對(duì)血液樣品中乙醇含量的影響

隨著時(shí)間的推移，血液乙醇含量呈逐漸下降的趨勢（見表2）。在最初的3d 內(nèi)，乙醇含量相對(duì)穩(wěn)定，保持在約106.32±0.78 的水平。然而，在接下來的一周內(nèi)，即7d 后，乙醇含量開始顯著下降，降至約106.02±0.73。這種下降趨勢在隨后的時(shí)間段內(nèi)繼續(xù)，分別為14d、21d、30d、60d 和90d，乙醇含量逐漸減少，分別降至105.79±0.91、105.47±0.88、105.22±0.59、104.92±0.63 和104.68±0.71。

表2 不同保存時(shí)間下血液乙醇含量的變化（mg/100ml）

然而，在90d 后觀察到乙醇含量下降速度有所減緩，且變得更為平穩(wěn)。這表明在90d 之內(nèi)，血液乙醇含量保持相對(duì)恒定，而超過90d 后，乙醇含量的下降趨勢變得顯著。因此，根據(jù)這些觀察結(jié)果，可以得出結(jié)論，酒駕血液樣本的最佳保存期限為90d。

此外，通過Duncan 氏新復(fù)極差測驗(yàn)，表明在-20℃冰箱冷藏條件下，血液中乙醇含量的變化幅度最小。這表明在-20℃的低溫環(huán)境中冷藏血液樣本，可以有效減緩乙醇含量的下降速度，延長其有效保存期限［5-6］。

采用回歸分析探究乙醇含量與時(shí)間的關(guān)系，通過三次函數(shù)表示樣本失效情況。從圖1 中可以看出乙醇含量隨時(shí)間增長逐漸下降，且這種下降速度隨保存時(shí)間的延長而逐漸增加。換言之，隨著時(shí)間推移，樣本中的乙醇含量逐漸減少，且這一減少趨勢隨樣本保存時(shí)間的延長而變得更加顯著。當(dāng)保存時(shí)間超過90d 時(shí)，測定血液乙醇含量的結(jié)果將不再具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1 -20℃保存溫度下血液乙醇含量的三次函數(shù)回歸方程

綜上所述，這些數(shù)據(jù)和分析結(jié)果明確指出，酒駕血液樣本的最佳保存期限為90d，而在-20℃的低溫條件下冷藏可以延長樣本的穩(wěn)定性。這對(duì)于司法和法醫(yī)領(lǐng)域的血液乙醇含量測定具有重要的實(shí)際意義。

三、結(jié)論

首先，在-20℃冰箱冷藏條件下，EDTA-k2 管表現(xiàn)出最好的穩(wěn)定性，而枸櫞酸鈉1∶9 管和肝素管的性能在儲(chǔ)存時(shí)間延長時(shí)顯著下降。這為司法程序中的血液乙醇含量準(zhǔn)確測量提供了重要的指導(dǎo)，特別是在長時(shí)間的儲(chǔ)存情況下選擇EDTA-k2管作為血液乙醇儲(chǔ)存容器更為可靠。

其次，乙醇含量在初始的3 天內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定，然后開始逐漸下降。然而，在90d 內(nèi)，乙醇含量變化幅度有所減緩，維持在相對(duì)穩(wěn)定的水平。因此，我們建議酒駕血液樣本的最佳保存期限為90d。此外，在-20℃的低溫環(huán)境中冷藏可以有效延長樣本的穩(wěn)定性和保存期限。

最后，乙醇含量會(huì)隨時(shí)間的延長而逐漸降低，且在保存時(shí)間超過90d 時(shí)，測定血液乙醇含量將失去統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。