新版人畜共患傳染病名錄病種檢測(cè)技術(shù)淺析

呂偉軍,沈紅霞,池麗娟,楊 磊,孫思琪,周 煒

(1.浙江省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,浙江 杭州 311119;2.中國動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心)

習(xí)近平總書記在中共中央政治局第三十三次集體學(xué)習(xí)時(shí)強(qiáng)調(diào)“要實(shí)行積極防御、主動(dòng)治理,堅(jiān)持人病獸防、關(guān)口前移,從源頭前端阻斷人獸共患病的傳播路徑”。目前,有記載的人獸共患病有200余種,有些病種尚無有效檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn),有些病種檢測(cè)方法林林總總,有些病種已有檢測(cè)用試劑盒但尚未標(biāo)準(zhǔn)化或尚未在較大范圍內(nèi)試用、驗(yàn)證。如何切實(shí)有效開展針對(duì)性防控、嚴(yán)守生物安全底線,是每一個(gè)畜牧獸醫(yī)工作者需要面對(duì)的問題。

2023年6月,農(nóng)業(yè)農(nóng)村部針對(duì)全國現(xiàn)在主要人畜共患病流行情況,發(fā)布了新修訂的人畜共患傳染病名錄,共收錄24種人畜共患傳染病,包括4種病毒病、8種細(xì)菌病、8種寄生蟲病和4種其他疫病(朊病毒、立克次氏體、螺旋體和衣原體),為開展針對(duì)性的防控指明了方向。因而,對(duì)于這些病種的檢測(cè)所采用的權(quán)威檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)、確診方法以及檢測(cè)過程中需要處于何種生物安全級(jí)別成為疫病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的重中之重。本文旨在梳理新版人畜共患傳染病名錄中24個(gè)病種的現(xiàn)行有效的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)(國際標(biāo)準(zhǔn)、國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn))和開展相應(yīng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)活動(dòng)所需生物安全級(jí)別,以期為相應(yīng)檢測(cè)的開展提供更為明析的參考。以下各病種情況具體見表1。

表1 相關(guān)疾病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)規(guī)范

1 病毒病

1.1高致病性禽流感 高致病性禽流感的病原為禽流感病毒,按照中華人民共和國農(nóng)業(yè)部令 第53號(hào)《動(dòng)物病原微生物分類名錄》和《農(nóng)業(yè)部關(guān)于進(jìn)一步規(guī)范高致病性動(dòng)物病原微生物實(shí)驗(yàn)活動(dòng)審批工作的通知》(農(nóng)醫(yī)發(fā)[2008]27號(hào))的規(guī)定(后續(xù)病種同此依據(jù)),屬第一類動(dòng)物病原微生物,病原分離培養(yǎng)、動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)需在生物安全第三級(jí)實(shí)驗(yàn)室(以下簡(jiǎn)稱三級(jí)實(shí)驗(yàn)室,其他級(jí)別同)條件下開展;未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料實(shí)驗(yàn)(感染性材料處理需在Ⅱ級(jí)生物安全柜中進(jìn)行)、滅活材料實(shí)驗(yàn)需在二級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。按照世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(WOAH;原為OIE)《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》的分類,禽流感為A類疾病。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1,《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》尚未指定其診斷方法,指定的替代診斷方法為瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)和血凝試驗(yàn)。

現(xiàn)在《GB/T 18936 高致病性禽流感診斷技術(shù)》所涉及的試劑均有商品化試劑盒,所需雞紅細(xì)胞也相對(duì)易于獲取與制備,因而該標(biāo)準(zhǔn)使用較為廣泛。除該標(biāo)準(zhǔn)所述方法以外,還有乳膠凝集試驗(yàn)、瓊脂凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)、神經(jīng)氨酸酶抑制試驗(yàn)、ELISA、H5亞型AIV膠體金診斷試驗(yàn)、免疫熒光技術(shù)、PCR-ELISA技術(shù)、核酸依賴的擴(kuò)增技術(shù)和基因芯片技術(shù)等方法。

1.2狂犬病 狂犬病的病原為狂犬病病毒,屬第二類動(dòng)物病原微生物,病原分離培養(yǎng)、動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)和未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料實(shí)驗(yàn)需在三級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展,滅活材料實(shí)驗(yàn)需在二級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。按照《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》的分類,狂犬病為B類多種動(dòng)物共患病。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1,《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》尚未指定其替代診斷方法,指定的診斷方法為病毒中和試驗(yàn)。

除表內(nèi)列入方法外,還有關(guān)于競(jìng)爭(zhēng)ELISA、雙抗夾心ELISA、間接免疫熒光、快速熒光灶抑制試驗(yàn)和膠體金免疫層析技術(shù)等抗體檢測(cè)技術(shù),乳膠凝集試驗(yàn)、熒光抗體試驗(yàn)、原位雜交、基因芯片和核酸環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(loop mediated isothermal amplification, LAMP)等抗原檢測(cè)技術(shù)。目前,已有狂犬病抗體ELISA檢測(cè)的商品化試劑盒,適用于可疑病犬的初步診斷或狂犬病疫苗免疫合格率的監(jiān)測(cè),該方法更簡(jiǎn)便易行。

1.3日本腦炎(流行性乙型腦炎) 日本腦炎的病原為日本腦炎病毒,屬第三類動(dòng)物病原微生物,病原分離培養(yǎng)、動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)、未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料實(shí)驗(yàn)需在二級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展,滅活材料實(shí)驗(yàn)則僅需在一級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。與我國將其歸類為豬病病原微生物不同,《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》將日本腦炎歸為B類馬病。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1。《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》尚未指定其診斷方法和替代診斷方法。

除表內(nèi)列入方法外,還有免疫熒光試驗(yàn)、乳膠凝集試驗(yàn)、SPA協(xié)同凝集試驗(yàn)、HRP-SPA ELISA、Dot-ELISA、膠體金、免疫層析試紙法和斑點(diǎn)金免疫滲透法等血清學(xué)方法,RT-PCR、套式RT-PCR、LAMP技術(shù)、TaqMan熒光探針、SYBR熒光染料法和基因芯片技術(shù)等分子生物學(xué)方法。

1.4尼帕病毒性腦炎 尼帕病毒性腦炎的病原為尼帕病毒,該病為外來病種,《動(dòng)物病原微生物分類名錄》尚未收錄,《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》中將其歸為生物安全第四級(jí)病原體,屬B類國際貿(mào)易中的其他重要疾病(尼帕病毒)。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》尚未指定其診斷方法和指定替代診斷方法。

目前,我國對(duì)尼帕病毒的研究報(bào)道相對(duì)較少。樊歡等基于多重PCR結(jié)合核酸侵入反應(yīng)及納米金顯色技術(shù),建立了一種包括尼帕病毒在內(nèi)的5種腦炎腦膜炎病毒檢測(cè)技術(shù)。

2 細(xì)菌病

2.1炭疽 炭疽的病原為炭疽芽孢桿菌,屬第二類動(dòng)物病原微生物,病原分離培養(yǎng)、動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)和未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料實(shí)驗(yàn)需在三級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展,滅活材料實(shí)驗(yàn)需在二級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。炭疽未收錄進(jìn)《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1。《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》尚未指定其診斷方法和替代診斷方法。

除表內(nèi)列入方法外,更高層次的方法還有基于芽孢、細(xì)菌繁殖體、基因、毒素蛋白的檢測(cè)方法。王素華等基于炭疽桿菌2個(gè)不同位點(diǎn)的基因片段建立了雙重?zé)晒釶CR檢測(cè)技術(shù),以提高其分子生物學(xué)檢測(cè)的敏感性和準(zhǔn)確度。目前,已有炭疽病菌核酸檢測(cè)的商品化試劑盒,適用范圍包括可疑病料及可疑病畜接觸過環(huán)境的初步判定檢測(cè)。

2.2布魯氏菌病 布魯氏菌病的病原為布氏桿菌,屬第二類動(dòng)物病原微生物,病原分離培養(yǎng)和動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)需在三級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展,未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料實(shí)驗(yàn)和滅活材料實(shí)驗(yàn)需在二級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。按照《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》的分類,布魯氏菌病為B類牛病、綿羊和山羊病、豬病。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1。《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》中指定牛布病的診斷方法為緩沖布氏桿菌抗原試驗(yàn)(BBAT)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CF)和ELISA,替代診斷方法為熒光偏振試驗(yàn)(FPA);山羊和綿羊布病的診斷方法為BBAT和CF,替代診斷方法為布魯氏菌素試驗(yàn);豬布病的診斷方法為ELISA,替代診斷方法為BBAT和FPA。

近年來,膠體金快速檢測(cè)技術(shù)也得到了快速發(fā)展與應(yīng)用,部分產(chǎn)品的靈敏度與ELISA方法相當(dāng)、準(zhǔn)確性略優(yōu)于ELISA方法,但多數(shù)品牌的產(chǎn)品同樣不適用于粗糙型布魯氏菌的檢測(cè)。此外,由中國獸醫(yī)學(xué)會(huì)頒布的團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《T/CVMA 20動(dòng)物布魯氏菌實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法》中規(guī)定了適用于動(dòng)物脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、血液、奶樣、精液、陰道分泌物、流產(chǎn)胎兒內(nèi)容物和被布魯氏菌污染的環(huán)境樣品中布魯氏菌實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法,為環(huán)境樣品的布病檢測(cè)提供了新的解決方案。

2.3沙門氏菌病 沙門氏菌病的病原為沙門氏菌,屬第三類動(dòng)物病原微生物,病原分離培養(yǎng)和動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)需在二級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展,未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料和滅活材料實(shí)驗(yàn)則僅需在一級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。按照《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》的分類,沙門氏菌病為B類國際貿(mào)易中的其他重要疾病。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1。《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》尚未指定其診斷方法,指定替代診斷方法為病原鑒定。

目前,除表內(nèi)列入方法外,關(guān)于ELISA(雙抗體夾心、直接、間接)、免疫磁珠分離、免疫熒光檢測(cè)等免疫分析檢測(cè)技術(shù),RT-PCR、LAMP、基因芯片等分子生物學(xué)檢測(cè)方法,生物傳感器檢測(cè)技術(shù)、納米技術(shù)等新型檢測(cè)技術(shù)被運(yùn)用于沙門氏菌病檢測(cè)。

2.4牛結(jié)核病 牛結(jié)核病的病原為結(jié)核分枝桿菌(以牛分枝桿菌為主),屬第三類動(dòng)物病原微生物,病原分離培養(yǎng)和動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)需在三級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展,未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料需在二級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展(感染性材料處理需在Ⅱ級(jí)生物安全柜中進(jìn)行),滅活材料實(shí)驗(yàn)僅需在一級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。按照《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》的分類,牛結(jié)核病為B類牛病。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1。《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》尚未指定其替代診斷方法,指定診斷方法為結(jié)核菌素試驗(yàn)。

除表內(nèi)列入的方法外,針對(duì)牛結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)還有ELISA、免疫斑點(diǎn)測(cè)定法、熒光偏振檢測(cè)法、斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)、免疫印跡法、固相抗體競(jìng)爭(zhēng)試驗(yàn)、固相抗體競(jìng)爭(zhēng)夾心酶聯(lián)法、膠體金等血清學(xué)檢測(cè)方法,DNA探針、指紋、圖譜技術(shù)等分子生物學(xué)方法。

2.5豬鏈球菌Ⅱ型感染 豬鏈球菌Ⅱ型感染的病原為豬鏈球菌Ⅱ型,致病性鏈球菌屬第三類動(dòng)物病原微生物,病原分離培養(yǎng)、動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)、未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料實(shí)驗(yàn)需在二級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展,滅活材料實(shí)驗(yàn)則僅需在一級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。豬鏈球菌Ⅱ型感染未收錄進(jìn)《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1。豬鏈球菌Ⅱ型感染未收錄進(jìn)《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》。

目前,關(guān)于豬鏈球菌的檢測(cè)技術(shù)研究包括病原學(xué)、分子生物學(xué)、分子分型和免疫學(xué)方法。病原學(xué)集中在優(yōu)化細(xì)菌的選擇性分離培養(yǎng)方向,分子生物學(xué)檢測(cè)方法主要有PCR、多重PCR、熒光定量PCR、LAMP和基因芯片技術(shù),分子分型已有多位點(diǎn)序列分型、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA、核糖體分型、脈沖場(chǎng)凝膠電泳等方法的研究報(bào)道,免疫學(xué)方法則有ELISA法、膠體金法和電化學(xué)免疫傳感器技術(shù)等。

2.6馬鼻疽 馬鼻疽的病原為鼻疽伯克霍爾德氏菌(原名為鼻疽假單胞菌),屬第三類動(dòng)物病原微生物,馬鼻疽在我國為已消滅病種。病原分離培養(yǎng)、動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)和未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料實(shí)驗(yàn)需在二級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展,滅活材料實(shí)驗(yàn)可在一級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。按照《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》的分類,馬鼻疽為B類馬病。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1。《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》尚未指定其替代診斷方法,其指定診斷方法為馬來因試驗(yàn)(即鼻疽菌素點(diǎn)眼試驗(yàn))。

2.7李氏桿菌病 李氏桿菌病的病原為李氏桿菌(現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中用名還涉及:李斯特菌、李斯特氏菌、單核細(xì)胞增多性李斯特桿菌),屬第三類動(dòng)物病原微生物,病原分離培養(yǎng)和動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)需在二級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展,未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料實(shí)驗(yàn)和滅活材料實(shí)驗(yàn)可在一級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。按照《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》的分類,李氏桿菌病為B類國際貿(mào)易中的其他重要疾病。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1。《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》尚未指定其診斷方法和替代診斷方法。

2.8類鼻疽 類鼻疽的病原為類鼻疽伯克霍爾德菌,屬第三類動(dòng)物病原微生物,病原分離培養(yǎng)、動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)和未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料實(shí)驗(yàn)需在二級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展,滅活材料實(shí)驗(yàn)可在一級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。類鼻疽未收錄進(jìn)《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1。《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》尚未指定其診斷方法和替代診斷方法。

此外,類鼻疽病原的檢測(cè)方法還包括LF-RPA法、LAMP-納米生物傳感器快速檢測(cè)法。

3 寄生蟲病

3.1弓形蟲病 弓形蟲病的病原為龔地弓形體,屬第四類動(dòng)物病原微生物,病原分離培養(yǎng)、動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)、未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料實(shí)驗(yàn)和滅活材料實(shí)驗(yàn)均可在一級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。按照《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》的分類,弓形蟲病為B類國際貿(mào)易中的其他重要疾病。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1。《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》尚未指定其診斷方法和替代診斷方法。

3.2棘球蚴病 棘球蚴病又稱包蟲病,病原為棘球絳蟲(棘球絳蟲的幼蟲稱棘球蚴),屬第四類動(dòng)物病原微生物,病原分離培養(yǎng)、動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)、未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料實(shí)驗(yàn)和滅活材料實(shí)驗(yàn)均可在一級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。按照《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》的分類,棘球蚴病為B類多種動(dòng)物共患病。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1。《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》尚未指定其診斷方法和替代診斷方法。

3.3日本血吸蟲病 日本血吸蟲病的病原為日本血吸蟲病,屬第三類動(dòng)物病原微生物,病原分離培養(yǎng)和動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)需在二級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展,未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料和滅活材料實(shí)驗(yàn)僅需在一級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。日本血吸蟲病未收錄進(jìn)《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1。日本血吸蟲病未收錄進(jìn)《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》。

3.4旋毛蟲病 旋毛蟲病的病原為旋毛蟲,屬第四類動(dòng)物病原微生物,病原分離培養(yǎng)、動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)、未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料實(shí)驗(yàn)和滅活材料實(shí)驗(yàn)均可在一級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。按照《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》的分類,旋毛蟲病為B類多種動(dòng)物共患病。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1。《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》指定其診斷方法為病原鑒定,指定替代診斷方法為ELISA法。

3.5囊尾蚴病 囊尾蚴病的病原為豬帶絳蟲的幼蟲,屬第四類動(dòng)物病原微生物,病原分離培養(yǎng)、動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)、未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料實(shí)驗(yàn)和滅活材料實(shí)驗(yàn)均可在一級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。按照《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》的分類,囊尾蚴病為B類牛病、豬病和國際貿(mào)易中的其他重要疾病。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1。《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》尚未指定其替代診斷方法,其指定診斷方法為病原鑒定法。

3.6片形吸蟲病 片形吸蟲病的病原為片形吸蟲(復(fù)殖目片形科片形屬,主要為:肝片吸蟲和大片形吸蟲),屬第四類動(dòng)物病原微生物,病原分離培養(yǎng)、動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)、未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料實(shí)驗(yàn)和滅活材料實(shí)驗(yàn)均可在一級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。片形吸蟲病未收錄進(jìn)《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1。《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》尚未指定其診斷方法和替代診斷方法。

3.7利什曼原蟲病 利什曼原蟲病的病原為利什曼原蟲屬原蟲,屬第四類動(dòng)物病原微生物,病原分離培養(yǎng)、動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)、未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料實(shí)驗(yàn)和滅活材料實(shí)驗(yàn)均可在一級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。按照《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》的分類,利什曼原蟲病為B類多種動(dòng)物共患病。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1。《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》尚未指定其診斷方法,指定替代診斷方法為病原鑒定。

3.8華支睪吸蟲病 華支睪吸蟲病的病原為華支睪吸蟲(復(fù)殖目后睪科支睪屬),屬第四類動(dòng)物病原微生物,病原分離培養(yǎng)、動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)、未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料實(shí)驗(yàn)和滅活材料實(shí)驗(yàn)均可在一級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。華支睪吸蟲病未收錄進(jìn)《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1。《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》尚未指定其診斷方法和指定替代診斷方法。

除表內(nèi)經(jīng)典的病原學(xué)診斷外,主要還有分子生物學(xué)診斷方法(包括:PCR法、LAMP、熒光PCR法和數(shù)字PCR法等)、免疫學(xué)診斷(包括:染色試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)、凝集試驗(yàn)、間接熒光抗體試驗(yàn)、ELISA法、膠體金法等)。由于這些方法原理基本相同,特定基因、蛋白的改變,且很多尚未標(biāo)準(zhǔn)化、商品化,本文不作一一贅敘。

4 其他疫病

4.1牛海綿狀腦病 牛海綿狀腦病的病原為朊病毒,屬第一類動(dòng)物病原微生物,其相關(guān)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)(病原分離培養(yǎng)、動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)、未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料實(shí)驗(yàn)和滅活材料實(shí)驗(yàn))均需在三級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。按照《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》的分類,牛海綿狀腦病為B類牛病。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1。《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》尚未指定其診斷方法和替代診斷方法。

牛海綿狀腦病為外來疫病,其檢測(cè)主要集中于出入境檢疫環(huán)節(jié)。何儉和彭鈺欣等的論文顯示,除表內(nèi)方法外,還有小鼠接種試驗(yàn)、電鏡檢查和ELISA等方法。兩研究均認(rèn)為因存在300 d的潛伏期,小鼠試驗(yàn)實(shí)用性差;腦切片HE染色鏡檢法對(duì)檢驗(yàn)人員經(jīng)驗(yàn)要求較高;電鏡法僅適用于新鮮或僅經(jīng)冷凍處理過的腦組織樣本;而免疫組化法和免疫轉(zhuǎn)印法有相對(duì)較高的準(zhǔn)確性。

4.2Q熱 Q熱的病原為伯納特柯克斯體(一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生菌),屬第四類動(dòng)物病原微生物,病原分離培養(yǎng)、動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)、未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料實(shí)驗(yàn)和滅活材料實(shí)驗(yàn)均可在一級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。按照《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》的分類,Q熱為B類多種動(dòng)物共患病。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1。《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》尚未指定其診斷方法,指定替代診斷方法為補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)。

目前,鮮有Q熱病的新的血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)研究報(bào)道,基于分子生物學(xué)的病原學(xué)檢測(cè)中PCR、LAMP、重組酶聚合酶擴(kuò)增、基因芯片等檢測(cè)技術(shù)則不斷被引入。

4.3鉤端螺旋體病 鉤端螺旋體病的病原為致病性鉤端螺旋體,屬第三類動(dòng)物病原微生物,病原分離培養(yǎng)、動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)需在二級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展,未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料實(shí)驗(yàn)和滅活材料實(shí)驗(yàn)則可在一級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。按照《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》的分類,鉤端螺旋體病為B類多種動(dòng)物共患病。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1。《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》尚未指定其診斷方法,指定替代診斷方法為顯微凝集試驗(yàn)。

現(xiàn)有文獻(xiàn)顯示,除病原學(xué)和血清學(xué)診斷方法外,PCR、熒光PCR、基因芯片等分子生物學(xué)技術(shù)也被應(yīng)用于鉤端螺旋體的診斷和分型。

4.4鸚鵡熱 鸚鵡熱(現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)用名還涉及:禽衣原體病)的病原為鸚鵡熱衣原體,屬第三類動(dòng)物病原微生物,病原分離培養(yǎng)、動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)和未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料實(shí)驗(yàn)需在二級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展,滅活材料實(shí)驗(yàn)可在一級(jí)實(shí)驗(yàn)室條件下開展。按照《OIE 陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》的分類,鸚鵡熱(禽衣原體病)為B類禽病。

我國主要現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)見表1。《國際動(dòng)物衛(wèi)生法典》尚未指定其診斷方法和替代診斷方法。

根據(jù)韓娥等的綜述,鸚鵡熱基因檢測(cè)方法中新出現(xiàn)了DNA微陣列技術(shù),乳膠凝集、原生小體凝集、間接血凝、膠體金等血清學(xué)檢測(cè)方法也先后被引入,且膠體金技術(shù)已獲新獸藥證書。

5 展望

隨著全球人流和物流不斷加深,加之動(dòng)物的跨地域遷徙、病毒的不斷變異,人畜共患傳染病的防控壓力也不斷加大。在新形勢(shì)下,防疫基層一線、養(yǎng)殖主體合理科學(xué)地根據(jù)實(shí)際情況選擇相應(yīng)的檢測(cè)技術(shù)勢(shì)在必行,復(fù)核確診單位則需選擇相對(duì)權(quán)威的符合生物安全防控要求的檢測(cè)方法和確診標(biāo)準(zhǔn),使更大范圍內(nèi)對(duì)疫情的處置措施更加科學(xué)、合理和嚴(yán)謹(jǐn)。在新的檢測(cè)技術(shù)研究、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)制訂、試劑盒研發(fā)工作者的共同努力和不懈奮斗下,我國人畜共患傳染病的防控工作必將走上更高的臺(tái)階。