定時人工授精對湖羊受胎率的影響

高 慧,金慧佳,武利恒,趙麗莉,王爭光*

(1.浙江省畜牧技術推廣與種畜禽監測總站,浙江 杭州 310021;2.浙江大學動物科學學院;3.浙江華欣牧業有限公司;4.衢州市畜牧業發展中心)

湖羊是中國獨有的、歷史悠久的多胎綿羊品種,主要分布在浙江嘉興地區和太湖周邊。被列入《國家畜禽遺傳資源保護名錄》,因其宜圈養特性,在我國羊產業集約化發展中具有十分重要的地位。但由于過分追求生產利益,湖羊產業中出現了近親繁殖、種質退化等問題,迫切需要擴繁優秀純種湖羊群體。人工授精是促進家畜繁殖和育種的關鍵技術,能夠加快純種擴繁速度,從而提高家畜繁殖力。而家畜的繁殖過程嚴格受到各種生殖激素的協調控制。通過體外不同激素的刺激,如前列腺素、孕激素、促性腺激素釋放激素或其類似物等可以人為地改變母畜的生殖周期。母羊排卵發生在情期結束前后,人工授精一般在排卵之前或排卵過程中進行。作為人工授精的輔助手段,定時發情可以有效調控母畜的發情周期,在特定時間段內實現母畜的同時發情、統一配種和同步妊娠,便于生產管理,從而提高養殖業的經濟效益。定時人工授精技術在母羊定時發情的基礎上,不僅能夠使優良種公畜的繁殖性能得到充分發揮,而且也降低發情鑒定所需要的人力成本,從而提高畜牧業的經濟效益。定時人工授精技術已經成為家畜繁殖技術研究的熱點。本研究通過改進陰道栓法的一些技術環節和方法,優化湖羊定時發情控制技術,便于冷凍精液應用于大規模羊場,為湖羊定時人工授精技術推廣應用提供技術儲備。

1 試驗時間和地點

本試驗從2022年4月開始,陸續開展。試驗所用的湖羊均養殖于浙江華欣牧業有限公司。根據下述實驗設計,每個試驗組的湖羊在同一欄舍飼養。

2 試驗材料

2.1試驗動物 選擇18-36月齡的健康公羊采集精液,選擇15月齡、體重接近的健康經產母羊進行同期發情處理。

2.2主要試劑 誘導母羊定時發情用的主要激素如促卵泡素(FSH)、孕馬血清促性腺激素(PMSG)、氯前列醇鈉注射液(PG)均購自寧波第二激素廠,多胎素、生元導管式棉栓(CIDR)購自河南信南春生物科技有限公司。

3 試驗方法

3.1試驗分組 本研究共分3組,分別按照以下方案進行操作。對照組:不做處理自然發情。試驗組1(方案1):直接放置 CIDR栓處理12 d,分別在第12 d、第13 d 注射 FSH 50 IU,第14 d去栓并注射PG 0.1 mg,去栓后12 h開始試情。試驗組2(方案2):直接放置 CIDR栓處理12 d,同時試驗羊飼喂多胎素。放栓后第11 d注射PMSG 400單位、PG 0.1 mg,分開注射。放栓后第12 d撤栓,停止飼喂多胎素。放栓后第14 d,上午和下午各人工輸精一次。試驗母羊早上不予飼喂,僅中午喂食。

3.2公羊試情方法 選用性欲旺盛、健康無病的公羊作為試情對象,并在早、晚各進行一次試情。為防止偷配,試情公羊需要戴上試情布。同時,試情公羊與母羊應當遵循1∶15的比例,一旦出現發情母羊需要立即挑出,降低干擾。因試情耗費的時間較長,如果母羊沒有在10～20 min內接受公羊爬跨,理論上記為一次試情結束。同時,采用人工檢查的方法判斷母羊的發情情況。若母羊出現嗅聞公羊、接受爬跨等行為,或者表現出外陰有黏液流出、發紅發腫等癥狀,均判定為母羊發情。定時發情處理后72 h內發情的母羊均作為定時處理有效對待。

3.3公羊采精 本研究采用假陰道法對公羊的精液進行采集。將發情的母羊固定在采集架上。將集精杯裝入假陰道的一段,另一端涂抹凡士林潤滑,保持內胎的溫度在40 ℃左右。把公羊趕到固定的發情母羊邊上,讓公羊爬跨,迅速將陰莖導入假陰道內。公羊射精后,取下采精杯,記錄射精量,快速放入37 ℃水浴中保溫。

3.4精液品質檢查、稀釋、冷凍、解凍 精液品質檢查主要包括外觀檢查、射精量測量、精子活力測定、精子密度測定和精子形態學檢查。采用傳統的血細胞計數法測定湖羊精子的密度,采用10級制目測法進行精子活力測定,通過計算精子頂體異常率和精子畸形率兩項指標對精子進行形態學評估。正常健康的精液在顯微鏡下呈現翻騰的云霧狀,顏色為乳白色。湖羊的正常射精量為0.5～2 mL,每毫升精液中精子的數量為20億～30億,且精液中不含有尿液等其他成分。精液稀釋、冷凍、保存和解凍均按照之前試驗得出的最優方案進行。

3.5母羊人工授精 采用子宮頸深部輸精方法對發情母羊進行授精。早上進行第一次輸精,間隔10～12 h后進行第二次輸精。在輸精過程中,打開內窺鏡的光源,將器械插入陰道深部,并通過旋轉器械來確定子宮頸位置。然后將輸精器插入子宮頸約1.0 cm深,輕輕往里注入0.1～0.2 mL精液即可。輸精完成后先取出輸精器再抽出內窺鏡。同時,母羊需要在原位置停留一段時間。人工授精過程中使用的器械均需要用生理鹽水沖洗干凈。

3.6定時發情效果評價 本試驗通過以下三項指標來評估不同定時發情方法的處理效果:發情率、定時發情時間分布和處理后人工授精受胎率。進行不同處理后,72 h內發情的母羊數在該處理組總母羊數中所占的百分率,即定時發情率。定時發情處理后,發現母羊有發情表現的時刻,即定時發情時間。處理后72 h內發情者均作為同期處理有效對待。配種后受胎的母羊數在參與配種母羊數中所占的百分率,即受胎率。

3.7數據統計與分析 所有試驗所得數據均被整理和記錄于Excel軟件中,采用SPSS19.0軟件統計分析。試驗數據以記錄為平均值±標準差,利用one-way ANOVA進行各試驗組之間的差異比較。

4 結果與分析

4.1不同處理對母羊定時發情率的影響 由表1可知,對照組母羊的定時發情率平均為21.1%,均低于其他兩個處理組;試驗1 組定時發情率平均為77.2%,顯著高于對照組(P<0.05);試驗2組獲得了最高的定時發情率87.8%,與對照組比較差異極顯著(P<0.01)。

表1 不同處理對母羊定時發情率的影響

4.2不同處理對母羊定時發情時間分布的影響 由表2可知,對照組發情時間集中在48～72 h;試驗1組集中在36～60 h;試驗2組集中在36～48 h。各處理組的發情時間存在差異。試驗2組的發情時間更加集中,便于后續的人工授精和管理,且發情母羊的數量也明顯高于對照組和試驗1組。

表2 不同處理對母羊定時發情時間分布的影響

4.3不同處理對母羊情期受胎率的影響 由表3可知,自然發情的母羊,配種受胎率較低,平均為46.1%,試驗組1處理后平均受胎率為59.2%,顯著高于對照組(P<0.05)。試驗組2獲得的受胎率最高,顯著高于另外二組(P<0.05),效果更明顯。

表3 不同處理對母羊情期受胎率的影響

5 討論

生殖激素的協調作用是母羊正常繁殖的關鍵。利用生殖激素誘導定時發情的方式,可提高湖羊的定時發情效率。而陰道栓法就是一種通過人為添加孕激素模擬自然黃體形成的方法。在休情期,通過陰道栓向母羊注入孕激素,可使母羊體內的孕激素水平升高,從而形成人工黃體。在預定的發情時間,撤去陰道栓,使母羊體內的孕激素水平迅速降低,同時注射PMSG使母羊體內的促卵泡素水平迅速升高,此時母羊的卵泡開始發育,表現為發情狀態。海綿栓和CIDR配合PMSG等激素都是定時發情的有效方法,結合不同的處理手段呈現出的效果存在差異。周洪剛等采用“孕酮海綿栓+PMSG+PG”定時發情方案處理母羊,得到了比其他處理組更高的發情率,對發情母羊進行人工授精,受胎率得到顯著提高,可達95%,這一改進措施進一步降低了湖羊的繁殖和生產成本,平均每只羊可下降247.5元。在生產中普遍應用的羊用陰道栓主要有CIDR和海綿栓兩種類型。張文倩等通過對比CIDR和海綿栓對湖羊定時發情的效果,發現采用“CIDR+PMSG+PGF2α”方案處理湖羊,定時發情效果明顯更好,發情率可達90.74%。CIDR配合應用PMSG、PGF2α等激素的處理效果要優于海綿栓。成海榮等比較了不同栓劑對肉羊同期發情的影響,對200只肉羊分為四組,分別放置進口CIDR栓、進口海綿栓、國產海綿栓,以及國產硅膠栓,撤栓后皮下注射330 IU PMSG,24 h開始試情,分別于36 h與48 h開始實施人工授精。采取“CIDR+PMSG”法處理,發情率為95.83%,受胎率為89.13%,均高于其他各組,且母羊陰道發炎率也更低,效果更穩定、更好。不同劑量PMSG對于定時發情的效果也存在差異。高峰等發現,應用“CIDR+PMSG+PG”處理方案的前提下,針對1～2歲齡左右的50 kg試驗湖羊,PMSG的使用劑量在200～240 IU比較合理。趙曉錕等發現“孕酮海綿栓+PMSG+PG”定時發情方案處理,母羊在撤栓后48 h左右處于發情和排卵高峰,與撤栓后48 h和56 h兩次定時人工輸精組合,受胎率達76%。湖羊定時發情技術與人工授精技術相結合,可以極大程度地利用公母羊的繁殖優勢,顯著提高母羊的繁殖率,降低羊場的管理成本,可在規模化湖羊生產中推廣應用。

6 結論

根據各種不同的實驗設計,綜合分析得到理想的湖羊定時發情處理方案,母羊直接放置 CIDR栓處理12 d,同時飼喂多胎素,放栓后第11 d分開注射PMSG 400單位、PG 0.1 mg,放栓后第12 d撤栓,同時停止飼喂多胎素,定期發情率高達87.8%,發情時間集中在湖羊發情處理后的36-48 h。在放栓后第14 d的上午和下午對試驗母羊各進行一次人工輸精,受胎率最高可達61.1%。