LMR、miR-21、HOPX與宮頸癌同步放化療瘤體體積變化參數的關系及聯合預測患者預后的價值

符小春,劉秀玲,王茹娜

(駐馬店市中心醫院 腫瘤婦科,河南 駐馬店 463000)

我國宮頸癌發病率、病死率高,大部分患者確診時已處于中晚期,臨床常采用同步放化療進行治療,5 a生存率為60%～70%,但40%左右患者存在腫瘤復發、轉移[1-2]。血清因子水平已成為臨床病情評估、預測預后的重要手段,因而需尋找新型血清因子預測宮頸癌患者預后,有助于臨床調整治療方案。淋巴細胞/單核細胞比值(lymphocyte/monocyte ratio,LMR)降低與宮頸癌侵襲轉移有關[3]。微小RNA(microRNA,miRNA)可調控RNA轉錄水平功能,參與宮頸癌發生發展過程,研究表明微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)表達異常與宮頸癌發病密切相關[4]。轉錄因子含同源結構域蛋白同源盒(homeodomain-only protein homeobox,HOPX)與DNA靶定、細胞分化、蛋白復合體加工等有關,其在腫瘤組織中表達量降低,可發揮抑制腫瘤作用[5]。目前LMR、miR-21、HOPX與宮頸癌同步放化療患者預后關系尚未明確,本研究主要探討LMR、miR-21、HOPX與瘤體體積變化參數關系,并分析其對預后的預測效能。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年6月至2022年3月醫院收治的108例接受同步放化療宮頸癌患者為研究對象,收集研究對象臨床資料,包括年齡、體重指數、生育史、Karnofsky功能狀態(Karnofky performance status,KPS)評分[6]、腫瘤家族史、宮頸癌浸潤深度、國際婦產科聯盟FIGO分期、放療劑量、合并疾病。納入標準:符合宮頸癌診斷標準[7],且經病理檢查確診為宮頸癌;首次接受同步放化療;無腹部手術史;無放化療病史;簽署知情同意書。排除標準:已行宮頸癌根治術;合并或繼發性宮頸癌;伴有血液系統相關疾病;對本研究所用藥物等過敏;合并嚴重感染性疾病;合并其他惡性腫瘤。本研究經醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 治療方法

采用鉑類為基礎的同步化療聯合外照射(external beam radiotherapy,EBRT)、腔內后裝治療(intracavitary brachytherapy,ICBT)為標準治療方式,EBRT選用適形調強放療(intensity- modulated radiotherapy,IMRT),依據治療前MRI、CT圖像由靶區勾畫系統,定義腫瘤靶區、臨床靶區(clinical target volume,CTV)、計劃靶區,使用劑量為45 Gy,每次1.8 Gy,每周5次;高劑量率近距離ICBT(HDR-ICBT)。靶區處方劑量:中危靶區每次CTV 5～6 Gy,高危靶區每次CTV 7 Gy,每周2次,共4次,并統計患者放療總劑量。化療方案:順鉑(Hospira Australia PtyLtd,生產批號H20140372)75 mg·m-2,每3周使用1次,以21 d為1個周期,共化療3個周期。治療結束后通過電話、門診復查等方式進行隨訪,隨訪時間為3個月,采用腹盆腔B超、MRI、胸片、婦科檢查等評估有無宮頸癌復發或轉移征象,有宮頸癌復發或轉移征象納入預后不良組,否則納入預后良好組。

1.3 血清LMR、miR-21、HOPX水平

研究對象分別于治療前、治療后14 d采集空腹肘靜脈血5 mL,以3 000 r·min-1離心處理10 min,獲得上清液。采用Coulter LH750型血常規自動分析儀(美國貝克曼庫爾特公司)檢測淋巴細胞計數、單核細胞計數,并計算LMR。采用qRT-PCR法檢測miR-21、HOPXmRNA表達量:采用miRNA提取試劑盒(用于檢測miR-21)、Trizol試劑(用于檢測HOPXmRNA)分別提取血清總RNA,參照反轉錄試劑盒合成cDNA,使用qRT-PCR試劑盒進行擴增,反應體系為模板cDNA 2 μL,Real-Time Master Mix 10 μL,正反向引物各1 μL,RNase-Free ddH2O補足體系至20 μL;反應條件為95 ℃2 min,95 ℃ 30 s,60 ℃ 30 s,72 ℃ 60 s(循環35次)。采用2-ΔΔCt法計算miR-21、HOPXmRNA表達量。所有引物均使用Primer 6.0設計,委托上海生工生物公司合成。miR-21:F為5’-ACGTTGTGCAGCTTATCAGACTG-3’,R為5’-AATGGTTGTTCTCCACACTCTC-3’。HOPX:F為5’-CAGATCCGTCACAGACTAAG-3’;R為5’-GACTCAAAGGGAAATGCT-3’。

1.4 檢測瘤體縮減率(tumor volume reduction rate,TVRR)

治療前行MRI檢查,獲取治療前瘤體最大徑、瘤體體積,經1.5 T MRI掃描,腫瘤呈現層厚5 mm圖像,MRI有效圖像定義為腫瘤T2加權高信號病灶且與附近組織分界清晰。由2名放療科醫師確定圖片中腫瘤區面積,全部腫瘤平面面積與層高乘積即為腫瘤體積,按照美國腫瘤放射治療協作組指南進行瘤體勾畫,得到腫瘤體積數據。

1.5 統計學分析

2 結果

2.1 臨床資料

預后不良組宮頸癌浸潤深度≥50%、FIGO分期Ⅳ期占比高于預后良好組(P<0.05),見表1。

表1 兩組臨床資料比較

2.2 血清LMR、miR-21、HOPX水平及TVRR

治療前兩組血清LMR、miR-21、HOPX水平差異無統計學意義(P>0.05)。治療后14 d兩組血清LMR水平、HOPXmRNA表達量高于治療前,miR-21表達量低于治療前;預后不良組治療后14 d血清LMR水平、HOPXmRNA低于預后良好組,miR-21表達量高于預后良好組(P<0.05)。治療后14 d,預后不良組TVRR(76.85±5.61)低于預后良好組(86.54±6.88),差異有統計學意義(t=7.379,P<0.001)。見表2。

表2 兩組血清LMR、miR-21、HOPX水平及TVRR比較

2.3 血清各指標與TVRR相關性分析

治療前血清LMR、HOPX與宮頸癌浸潤深度、FIGO分期呈負相關,miR-21與宮頸癌浸潤深度、FIGO分期呈正相關;治療后14 d血清LMR、HOPX與TVRR呈正相關,miR-21與TVRR呈負相關(P<0.05)。見表3。

表3 血清各指標與TVRR相關性分析

2.4 宮頸癌同步放化療患者預后影響因素的logistic回歸分析

以宮頸癌同步放化療患者預后為因變量(預后良好=0、預后不良=1),以前述單因素分析(表1、2)中P<0.05指標/因素作為自變量,所有自變量均進行兩分類轉化:連續數值指標參考兩組均值進行分層,回歸過程采用逐步后退法,以進行自變量選擇、剔除。回歸結果顯示,LMR、miR-21、HOPXmRNA與宮頸癌同步放化療患者預后相關(P<0.05),見表4、5。

表4 賦值情況

表5 宮頸癌同步放化療患者預后影響因素的logistic回歸分析

2.5 血清各指標聯合預測預后的ROC分析

LMR、miR-21、HOPX對患者預后均有預測價值,且三者聯合預測價值最高(P<0.05),見表6。

表6 血清各指標聯合預測預后的ROC分析

3 討論

宮頸癌發生發展與炎癥反應、腫瘤細胞侵襲及轉移有關,炎癥反應可促進中性粒細胞轉移至腫瘤細胞周圍,增加破壞細胞核酸物質釋放量,為腫瘤生長提供有利條件[8]。宮頸癌中晚期患者預后不佳,因而選擇可靠指標預測患者預后,對臨床調整治療方案及個體精準化治療具有重要意義。

淋巴細胞、單核細胞可反映全身炎癥反應,并可預測腫瘤細胞侵襲、轉移,研究表明LMR降低時機體免疫應答、抗腫瘤免疫能力較弱,腫瘤進展較快,且與宮頸癌患者不良預后密切相關[9-10]。本研究結果顯示,預后不良組治療后14 d LMR低于預后良好組,提示LMR降低與宮頸癌同步放化療患者預后不良有關。由此推測LMR降低可促進腫瘤侵襲轉移,降低抗腫瘤免疫細胞的攻擊能力,促進腫瘤細胞增殖、黏附,影響腫瘤生長及轉移,并可促使中性粒細胞轉移至腫瘤細胞周圍,增加活性氧釋放量,造成預后不良。TVRR可反映放化療敏感度,且與宮頸癌預后有關[11]。本研究結果顯示,LMR與宮頸癌浸潤深度、FIGO分期呈負相關,而與TVRR呈正相關,提示LMR降低可能促進宮頸癌發生發展,并可能作為判斷患者預后的潛在指標。miR-21具有癌基因特性,可促進腫瘤細胞增殖、侵襲,抑制腫瘤細胞凋亡,進而參與腫瘤發生發展過程[12-13]。研究表明miR-21可調節激酶磷酸化水平,促進腫瘤生長,致使腫瘤患者預后不良[14]。本研究結果顯示,預后不良組治療后14 d血清miR-21表達量高于預后良好組,其與宮頸癌浸潤深度、FIGO分期呈正相關,且與TVRR呈負相關,提示miR-21表達量升高可能促進宮頸癌惡性進展,增加預后不良發生風險。分析其原因可能為miR-21可通過調節磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶 B信號通路,促進腫瘤細胞增殖,抑制細胞凋亡,并可促進上皮-間質轉化,增強宮頸癌細胞侵襲性,進而誘發預后不良[15]。

HOPX在多種腫瘤中呈低表達,其高表達可抑制腫瘤細胞增殖、遷移及侵襲[16]。HOPX過表達可促進p21表達,抑制細胞周期蛋白D1、CDK4表達,誘導細胞周期停滯、腫瘤細胞凋亡,抑制體內移植瘤生長[17]。本研究結果顯示預后不良組治療后14 d血清HOPX表達量低于預后良好組,且與臨床病理特征、TVRR密切相關,提示HOPX可能參與宮頸癌發生發展過程,且與宮頸癌同步放化療患者預后不良相關。由此可知HOPX低表達可能促進上皮-間質轉化發生,增強宮頸癌細胞侵襲轉移能力,促進細胞周期進展,進而降低同步放化療的治療效果,致使預后不良發生。目前LMR、miR-21、HOPX單一預測宮頸癌同步放化療患者預后具有一定局限性,因而本研究選取聯合預測模型,結果發現聯合預測預后的AUC大于單一指標預測,提示早期實施聯合檢測血清LMR、miR-21、HOPX水平可能作為臨床預測宮頸癌同步放化療患者預后的有效輔助手段。

4 結論

血清LMR、miR-21、HOPX水平與宮頸癌同步放化療患者TVRR及其預后密切相關,聯合檢測其水平對預后具有一定預測價值,可為宮頸癌同步放化療患者診療提供科學指導。