致密細(xì)斑點(diǎn)型抗核抗體陽性患兒的臨床特點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)對免疫性疾病診斷中的價值分析

張 雷 徐遠(yuǎn)久 鄒 燕 何 流 楊 敏 四川省廣安市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 638000

抗核抗體(ANA)是臨床上應(yīng)用較為廣泛的一種自身免疫性疾病(AID)血清學(xué)生物標(biāo)志物,在系統(tǒng)性AID以及器官特異性AID患者中均可存在異常表達(dá),因此在AID的鑒別診斷以及臨床分型中具有極其重要的意義[1]。既往,臨床上主要是通過HEp-2細(xì)胞為機(jī)制的間接免疫熒光法實(shí)現(xiàn)對ANA的檢測,且該檢測方式受到國內(nèi)外不少權(quán)威指南認(rèn)可,已成為ANA檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”[2]。在臨床實(shí)際工作中,采用間接免疫熒光法檢測ANA時,可能會發(fā)現(xiàn)多種特征性熒光模式,其中以致密細(xì)斑點(diǎn)型抗核抗體(DFS)熒光模式最被關(guān)注。且有研究報(bào)道顯示,DFS熒光模式多見于ANA陽性患者中,尤其是在ANA陽性的健康人員中具有24.0%～33.1%的檢出率[3]。迄今為止,國內(nèi)針對ANA熒光模式為DFS的有關(guān)研究鮮有報(bào)道,特別是在兒童人群中的報(bào)道極為少見。鑒于此,本文通過研究DFS陽性患兒的臨床特點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)對免疫性疾病診斷中的價值,以期為兒童AID的臨床診斷提供參考依據(jù),現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2018年1月—2022年1月于醫(yī)院接受ANA常規(guī)檢查的7 513例兒童臨床資料。其中男4 407例,女3 106例;年齡30d～12歲,平均年齡(6.13±1.34)歲。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)所有受試者均擬行ANA常規(guī)檢查;(2)年齡≤12歲;(3)入選前尚未接受過免疫藥物治療;(4)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并惡性腫瘤者;(2)神志異?；虬橛兄袠猩窠?jīng)系統(tǒng)病變者;(3)正參與其他研究/調(diào)查者。選取同期于醫(yī)院接受體檢的30名健康兒童作為對照組。其中男17例,女13例;年齡30d～12歲,平均年齡(6.02±1.36)歲。各組上述資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),可比性較高。入組人員監(jiān)護(hù)人均已簽同意書,醫(yī)院內(nèi)部評審委員會已批準(zhǔn)。

1.2 方法 (1)ANA檢測:實(shí)驗(yàn)基質(zhì)共有兩種,即①HEp-2細(xì)胞;②猴肝組織冰凍切片。間接免疫熒光法的具體操作遵循試劑說明書完成,試劑選用德國歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司相關(guān)產(chǎn)品。首次溫育期間,將稀釋血清標(biāo)本和固定于載片反應(yīng)區(qū)域的生物薄片中細(xì)胞進(jìn)行反應(yīng),若標(biāo)本呈陽性,則特異性抗體和相關(guān)抗原結(jié)合。第二次溫育時,結(jié)合抗體和羊抗人IgG抗體(經(jīng)異硫氰酸熒光素標(biāo)記)反應(yīng),之后與熒光顯微鏡觀察下明確熒光結(jié)果。一應(yīng)操作以試劑說明書為準(zhǔn)。所有標(biāo)本的熒光顯微檢查結(jié)果均由另一名高年資檢驗(yàn)人員核對。(2)DFS結(jié)果判定:①HEp-2細(xì)胞:分裂間期HEp-2細(xì)胞核漿呈致密細(xì)斑點(diǎn)型熒光染色,且染色強(qiáng)度均勻一致,核仁區(qū)域熒光任何高度類似于核漿,已有部分表現(xiàn)為陰性。分裂期細(xì)胞濃縮染色體區(qū)表現(xiàn)為均勻一致的致密細(xì)斑點(diǎn)型熒光染色,且區(qū)域外熒光染色呈陰性。②猴肝組織切片:肝細(xì)胞核呈熒光染色陰性或細(xì)顆粒狀熒光染色,且強(qiáng)度相較于HEp-2細(xì)胞更弱(見圖1～2)。相較于細(xì)胞核均質(zhì)型而言,細(xì)胞核均質(zhì)型于分裂間期HEp-2細(xì)胞中呈均質(zhì)型或均質(zhì)周邊型熒光染色。猴肝切片肝細(xì)胞核則以均質(zhì)型熒光染色為主,且強(qiáng)度和HEp-2幾無差異。相較于典型細(xì)胞核斑點(diǎn)型熒光模式鑒別的標(biāo)準(zhǔn):典型細(xì)胞核斑點(diǎn)型于分裂期HEp-2細(xì)胞濃縮染色體熒光染色陰性(見圖3～4)。(3)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測:采用全自動特定蛋白儀以及相關(guān)配套免疫球蛋白G(IgG)、IgM、IgA、C3以及C4試劑完成上述指標(biāo)水平的檢測。

圖1 致密細(xì)斑點(diǎn)型于HEp-2細(xì)胞上熒光染色表現(xiàn) 圖2 致密細(xì)斑點(diǎn)型于猴肝組織上熒光染色表現(xiàn) 圖3 核均質(zhì)型于HEp-2細(xì)胞上熒光染色表現(xiàn) 圖4 核斑點(diǎn)型于HEp-2細(xì)胞上熒光染色表現(xiàn)

1.3 評價指標(biāo) 分析ANA常規(guī)檢查患兒ANA和DFS的科室分布情況,DFS陽性患兒首發(fā)癥狀與累及部位情況,DFS陽性患兒及健康對照組兒童實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)水平。

2 結(jié)果

2.1 患兒ANA和DFS的科室分布情況分析 ANA陽性檢出率前3位科室分別為風(fēng)濕免疫科33.07%、內(nèi)分泌科31.61%、皮膚科30.23%,DFS陽性檢出率前3位科室分別為消化科4.61%、兒內(nèi)科3.28%、感染科3.11%,見表1。

表1 患兒ANA和DFS的科室分布情況分析[n(%)]

2.2 DFS陽性患兒首發(fā)癥狀與累及部位情況分析 DFS陽性患兒首發(fā)癥狀發(fā)生率前3位分別為發(fā)熱24.72%、皮疹20.22%、關(guān)節(jié)痛17.42%;累及部位發(fā)生率前3位分別為皮膚25.28%、四肢關(guān)節(jié)19.10%、腎臟16.85%,見表2。

表2 DFS陽性患兒首發(fā)癥狀與累及部位情況分析(%)

2.3 DFS陽性患兒及健康對照組兒童實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)水平對比 AID組IgG、IgM、IgA、C3以及C4水平低于非AID組;非AID組IgG、IgA水平均高于健康對照組;AID組IgM、C3以及C4水平均低于健康對照組,而IgA水平高于健康對照組(均P<0.05),見表3。

表3 DFS陽性患兒及健康對照組兒童實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)水平對比

3 討論

有研究指出,開展間接免疫熒光法實(shí)現(xiàn)ANA檢測時,可將熒光模式遵循靶抗原于實(shí)驗(yàn)基質(zhì)中分布狀況的差異細(xì)分為多種不同類型,包括核斑點(diǎn)型、核仁型、核均質(zhì)型以及胞漿型等[4]。而隨著近年來有關(guān)研究的日益深入,不少學(xué)者研究報(bào)道了關(guān)于IIF檢測ANA的新型熒光模式——DFS。典型DFS熒光模式主要是指分裂間期細(xì)胞核與分裂期染色質(zhì)出現(xiàn)均勻一致的致密細(xì)斑點(diǎn)型[5-6]。DFS熒光核型主要出現(xiàn)在抗DFS70抗體,晶狀體上皮衍生生長因子以及DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄攻擊或因子P75均是其靶抗原[7],故此DFS多見于一系列AID以及慢性感染性疾病患者中,且在健康人群中亦有一定陽性表達(dá),可能具有一定的輔助篩查AID價值。

本文結(jié)果顯示:7 513例兒童經(jīng)ANA篩查的陽性率為26.85%,且DFS陽性率為2.37%,其中ANA陽性兒童中DFS陽性為8.82%。這提示了DFS屬于ANA陽性患者中的多見熒光模式之一,應(yīng)予以足夠的重視。然而,另有相關(guān)研究報(bào)道顯示[8],ANA陽性患者中DFS的陽性率為24.0%,明顯高于于本文結(jié)果。導(dǎo)致兩項(xiàng)研究發(fā)生上述差異的主要原因可能和納入研究人群不同有關(guān)。故此,在往后的研究中應(yīng)盡量增加對不同年齡跨度ANA患者的研究,以獲取更為可靠數(shù)據(jù)。此外,ANA陽性檢出率前3位科室分別為風(fēng)濕免疫科33.07%、內(nèi)分泌科31.61%、皮膚科30.23%,DFS陽性檢出率前3位科室分別為消化科4.61%、兒內(nèi)科3.28%、感染科3.11%。反映DFS陽性檢出以非免疫疾病科室為主,提示了DFS70抗體狀況和系統(tǒng)自身免疫性風(fēng)濕性疾病無密切相關(guān),特別是在缺乏相關(guān)特異性自身抗體的狀態(tài)下,其檢出率無明顯異常[9]。另外,DFS陽性患兒首發(fā)癥狀以發(fā)熱、皮疹以及關(guān)節(jié)痛等為主,而累及部位多見皮膚、四肢關(guān)節(jié)以及腎臟等?？紤]原因,可能和疾病本身有關(guān)。另外,AID組IgG、IgM、IgA、C3以及C4水平低于非AID組;而非AID組IgG、IgA水平相較于健康對照組升高;AID組的IgM、C3及C4水平相較于健康對照組下降,而IgA水平相較于健康對照組升高。反映DFS陽性AID、非AID患兒以及正常兒童的體液免疫指標(biāo)均存在一定的差異,但其具體機(jī)制仍需更為深入的研究進(jìn)行證實(shí),這也為今后的研究提供了新的方向。另有相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[10],DFS熒光模式中抗DFS70抗體陽性率達(dá)91%,而其他ANA熒光模式的抗DFS70抗體陽性率低至3%,并無足夠證據(jù)證實(shí)DFS陽性和系統(tǒng)性AID有關(guān)。因此,實(shí)際工作中若患兒ANA熒光模式結(jié)果顯示呈DFS陽性,則需考慮其特異性抗體DFS70的情況,從而為AID的鑒別診斷提供輔助依據(jù)。

綜上所述,ANA陽性患兒中存在一定的DFS陽性,且DFS陽性患兒首發(fā)癥狀以發(fā)熱、皮疹以及關(guān)節(jié)痛等為主,而累及部位多見皮膚、四肢關(guān)節(jié)以及腎臟等。此外,DFS抗體多見于非系統(tǒng)性AID患兒中,聯(lián)合檢測DFS及相關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)可能對AID的早期鑒別診斷具有重要的意義。