miR-92b、miR-320a表達水平與非小細胞肺癌患者臨床病理及術后3年生存率的關系

朱銘君

河南科技大學第一附屬醫院肺腫瘤外科,河南省洛陽市 471000

非小細胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)是臨床常見原發性肺癌類型,早期無特異性癥狀,難以被診斷,隨病情發展可表現出咳嗽、咯血、胸痛、呼吸困難等體征,雖然隨醫療技術進步,NSCLC患者顯示近年患者生存率明顯上升,但臨床仍有2/3的患者在就診時已錯過最佳手術時間,預后通常較差,5年生存率僅為26.4%[1]。微小RNA(MicroRNA,mi-RNA)是一類由內源基因編碼的非編碼單鏈RNA分子,可以在翻譯水平發揮調控基因表達的功能,具有高度保守性、時序表達特異性、時序表達特異性等特征[2]。近年來研究發現,mi-RNA與NSCLC發生、發展明顯關聯,其被認為可加強腫瘤侵襲、轉移能力及化療耐藥性[3],提醒研究mi RNA在NSCLC治療中的未來前景。基于此本研究以miR-92b、miR-320a表達水平與NSCLC患者臨床病理及術后3年生存率的關系展開討論,結果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧我院腫瘤外科2017年10月—2019年5月收治的86例NSCLC患者資料,其中男48例,女38例;年齡<60歲27例,≥60歲59例;吸煙者35例;組織學類型:鱗癌34例,腺癌52例;腫瘤TNM分期:Ⅰ期18例,Ⅱ期31例,Ⅲ期37例;淋巴結轉移48例。納入標準:(1)年齡18歲以上;(2)完善CT、MRI等檢查,經病理學活檢確診為NSCLC;(3)兩位高年資腫瘤科醫師判定生存期在1年以上;(4)臨床資料完整。排除標準:(1)合并其他器官嚴重器質性病變及惡性腫瘤;(2)未找到可供評價的實體瘤。所有患者及其家屬均對研究知情同意,本研究符合《世界醫學赫爾辛基宣言》。

1.2 檢測方法 取腫瘤組織及腫瘤邊緣5cm以上癌周組織,保存液氮中待檢,采用定時熒光定量聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測miR-92b、miR-320a表達水平。取待檢組織,研磨并以細胞裂解液裂解,用總RNA提取試劑盒提取總RNA,以分光光度計檢測結果A260/A280在1.8～2.0判定RNA純度。使用反轉錄試劑盒將RNA反轉錄為cDNA,按試劑盒說明擴增引物,miR-92b引物參數上游: 5’-AGGGACGGGACGCGGTGCAGTG-3’,下游: 5’-GCGAGCACAGAATTAATACGAC-3’;miR-320a引物參數上游:5’-TATTCGCACTGGATACGACTCCAGC-3’,下游:5’-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGG-3’。RT-PCR反應參數:94℃ 2min,94℃ 30s,58℃ 30s,miR-92b循環38次,miR-320a循環40次。采用 2-ΔΔCt法計算miR-92b、miR-320a表達量。

1.3 觀察指標 (1)比較患者腫瘤組織及癌周組織的miR-92b、miR-320a表達水平。(2)比較不同miR-92b、miR-320a表達水平患者的預后(術后3年累積生存率、平均生存時間),采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線。(3)收集患者臨床資料,比較不同miR-92b、miR-320a表達水平患者的臨床資料(性別、年齡、吸煙、組織學類型、腫瘤分期、淋巴結轉移)。(4)采用COX比例風險模型分析分析影響NSCLC患者預后獨立影響因素。

2 結果

2.1 腫瘤組織及癌周組織的miR-92b、miR-320a表達水平 腫瘤組織miR-92b表達水平為(2.23±0.42),高于癌周組織表達水平(1.27±0.17),差異有統計學意義(t=19.648,P=0.000);腫瘤組織miR-320a表達水平為(0.82±0.31),低于癌周組織表達水平(1.84±0.92),比較差異有統計學意義(t=9.743,P=0.000)。

2.2 不同miR-92b、miR-320a表達水平預后比較 以腫瘤組織中miR-92b、miR-320a表達水平P25值為分界分為低表達(22例)、高表達(64例)。miR-92b低表達患者術后3年累積生存率、平均生存時間分別為71.72%、(32.38±1.49)個月高于高表達患者的52.41%、(29.20±1.13)個月,差異有統計學意義(χ2=7.147、t=10.462,P=0.008、0.000),見圖1。miR-320a低表達患者術后3年累積生存率、平均生存時間分別為39.64%、(26.04±2.26)個月,低于高表達患者的63.30%、(31.40±0.93)個月,差異有統計學意義(χ2=5.267、t=15.629,P=0.022、0.000),見圖2。

圖1 不同miR-92b表達水平對NSCLC患者預后影響的生存曲線

圖2 不同miR-320a表達水平對NSCLC患者預后影響的生存曲線

2.3 不同miR-92b、miR-320a表達水平與臨床病理比較 不同miR-92b、miR-320a表達水平患者性別、年齡、吸煙、組織學類型比較差異無統計學意義(P>0.05);不同miR-92b、miR-320a表達水平患者腫瘤分期、淋巴結轉移比較差異有統計學意義(P<0.05),見表1。

表1 不同miR-92b、miR-320a表達水平與臨床病理比較(%)

2.4 NSCLC患者預后影響因素分析 腫瘤分期、淋巴結轉移、miR-92b、miR-320a表達水平為影響NSCLC患者預后獨

立影響因素(P<0.05),其中腫瘤分期、淋巴結轉移、miR-92b表達水平為獨立危險因素,miR-320a為獨立保護因素,見表2。

表2 NSCLC患者預后影響因素分析

3 討論

NSCLC是以發病率高、死亡率高等為特點呼吸系統惡性腫瘤,占總肺癌患者的80%以上,是我國主要疾病負擔之一,患者就診時多為中晚期,預后通常較差,目前臨床對其生存率預測的指標均存在一定局限性,因此探索多方面預測指標十分必要。隨基因組學研究深入,發現惡性腫瘤發生、發展與癌基因的關聯,而對mi-RNA作為癌癥和其他病理學中重要調節劑的發現,大大擴大了肺癌管理的可能性[4]。miR-92b屬于miR-106a-363基因簇成員,劉飛等[5]研究顯示食管癌細胞中的miR-92b能通過調控組蛋白甲基轉移酶zeste同源物增強子2基因表達水平抑制腫瘤細胞的增殖和侵襲及遷移能力,而王曉庚等[6]研究發現,miR-92b在淋巴結轉移的口腔癌患者中異常高表達且表達水平與腫瘤分期密切相關。在本研究中,腫瘤組織的miR-92b表達水平均高于癌周組織(P<0.05),說明腫瘤組織中miR-92b呈現異常高表達,經比較發現不同miR-92b表達水平的NSCLC患者腫瘤分期分布及淋巴結轉移情況有所差異,高表達患者通常腫瘤進展更快,TNM分期多集中于Ⅱ～Ⅲ期且多數伴隨淋巴結轉移。此外高表達患者術后3年累積生存率、平均生存時間分別為52.41%、(29.20±1.13)個月,預后明顯較低表達患者的71.72%、(32.38±1.49)個月差,COX比例風險模型分析顯示,miR-92b表達水平為NSCLC預后不良的獨立危險因素(P<0.05),提醒miR-92b表達參與NSCLC疾病進展,早期檢測其表達水平有助于預測預后,進行針對性疾病管理。

miR-320a是miRNA中一員,在多種惡性腫瘤中異常表達,研究顯示其能通過調節PI3K/AKT、Wnt、STAT3等信號通路發揮腫瘤發展調節作用。呂曉婷等[7]研究發現miR-320a能通過阻滯肝癌細胞增殖周期發揮抑癌作用。本研究中,腫瘤組織的miR-320a水平低于癌周組織(P<0.05),且miR-320a低表達NSCLC患者疾病更嚴重,多伴隨淋巴結轉移,有更低的生存率,低表達患者術后3年累積生存率僅為39.64%,而平均生存時間為(26.04±2.26)個月,經COX比例風險模型分析顯示,miR-320a表達水平為NSCLC預后不良的獨立保護因素(P<0.05),推測miR-320a參與NSCLC腫瘤增殖、轉移抑制過程,對患者診斷、治療有指導作用。

綜上所述,miR-92b在NSCLC患者中異常高表達,miR-320a異常低表達,二者與患者腫瘤分期、淋巴結轉移相關聯,均有作為預后預測指標的潛力。