CIPAC理化測定方法最新修訂情況比較

王文卓，黃 偉，姜宜飛，劉 瑩，石凱威，吳進(jìn)龍

(農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所，北京 100125)

CIPAC方法在國際農(nóng)藥產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)申請、國際貿(mào)易仲裁中都有著十分重要的地位，也是我國農(nóng)藥產(chǎn)品化學(xué)方法標(biāo)準(zhǔn)制定的重要參考。一直以來CIPAC方法都具有較強(qiáng)的先進(jìn)性，隨著農(nóng)藥產(chǎn)品的更新?lián)Q代以及分析技術(shù)的日益提升，CIPAC方法也在保持不斷更新。本文總結(jié)梳理了國內(nèi)農(nóng)藥質(zhì)量管理常用的CIPAC理化測定方法，同時(shí)詳細(xì)比較了近5年來6項(xiàng)CIPAC理化測定方法的修訂情況，為讀者進(jìn)一步了解CIPAC理化測定方法的最新動(dòng)態(tài)，及時(shí)跟進(jìn)相關(guān)方法的修訂變化提供了參考。

1 CIPAC方法簡介

國際農(nóng)藥分析協(xié)作委員會(Collaborative International Pesticides Analytical Council，CIPAC)是一個(gè)國際性、非營利性、非政府組織，主要負(fù)責(zé)組織制定農(nóng)藥中成分(有效成分、相關(guān)雜質(zhì)、限制性組分、溶劑等)分析、物理化學(xué)參數(shù)測定等相關(guān)方法，旨在推動(dòng)與農(nóng)藥有關(guān)的檢測方法在實(shí)驗(yàn)室間的評估，促進(jìn)相關(guān)檢測方法在國際間協(xié)調(diào)一致。CIPAC方法在國際上具有很高的權(quán)威性，其制定的農(nóng)藥原藥和制劑分析方法也是支持FAO/WHO農(nóng)藥國際標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用的指定分析方法。

CIPAC方法的名稱通常由英文字母代碼和數(shù)字編碼兩部分組成，其中數(shù)字編碼一般是CIPAC編碼體系為農(nóng)藥有效成分或相關(guān)方法分配的特有編號，是每個(gè)CIPAC方法特有的“身份證”。字母代碼則代指不同類別的CIPAC方法，主要包括以下5大類：(1)針對農(nóng)藥原藥及其制劑的分析方法(M，Method)；(2)農(nóng)藥分析(包括定量滴定分析)方法中所需的各種試劑、指示劑和溶劑的制備、標(biāo)定方法及用途(RE，Reagents，Indicators and Solvents);(3)CIPAC方法中需要的各種測定技術(shù)，即理化測定方法(MT，Miscellaneous Techniques)；(4)從農(nóng)藥原藥提純獲得適當(dāng)純度化學(xué)品的方法(PP，Pure Pesticide)；(5)農(nóng)藥原藥和制劑的紅外光譜和紫外分光光度測定。M、MT和RE方法在CIPAC方法中最常見，且目前應(yīng)用最為廣泛。

CIPAC方法匯集于CIPAC手冊中，從1980年1A卷發(fā)布開始，CIPAC手冊已累計(jì)發(fā)布15卷，其中包含了400多個(gè)農(nóng)藥有效成分、雜質(zhì)的分析方法和200余項(xiàng)通用理化參數(shù)測定方法。截止至2021年，CIPAC手冊已更新發(fā)布至P卷，預(yù)計(jì)2024年將出版最新卷。

2 CIPAC理化測定(MT)方法介紹

CIPAC MT方法包含了農(nóng)藥原藥及制劑理化項(xiàng)目參數(shù)及質(zhì)量控制項(xiàng)目指標(biāo)測定所需的各類方法。CIPAC編碼體系依據(jù)MT方法發(fā)布的先后順序依次對方法進(jìn)行編號，當(dāng)方法有修訂時(shí)，方法名稱保留原來的數(shù)字編號，并在其后按照1、2、3…的順序進(jìn)行版本更新，如MT 46和MT 46.4。

目前MT方法已更新至MT 200，本文對常用的MT方法進(jìn)行了歸納整理，(表1)。

表1 農(nóng)藥原藥和制劑的理化項(xiàng)目測定方法名單

3 CIPAC MT方法修訂情況比較

近五年來，經(jīng)制修訂的CIPAC MT方法共有9項(xiàng)。其中水分(MT 30.6)、顆粒劑流動(dòng)性(MT 172.2)、懸浮率(MT 184.1)、加速儲存穩(wěn)定性(MT 46.4)、耐磨性(MT 178.3)、噴射劑的噴出速率、噴霧劑的噴出速率以及懸浮劑的自發(fā)分散性(MT 160.1)的測定方法作為CIPAC正式方法被接受。濕篩試驗(yàn)(MT 185.1)測定方法在2023年德國召開的第67屆CIPAC會議上被批準(zhǔn)為CIPAC臨時(shí)方法。下文詳細(xì)地比較了水分、加速儲存穩(wěn)定性、顆粒劑流動(dòng)性、懸浮率、濕篩試驗(yàn)以及耐磨性測定方法修訂前后的主要變化。

3.1 農(nóng)藥水分測定方法 2019年，使用無吡啶試劑的卡爾·費(fèi)休法MT 30.6被接受為CIPAC正式方法替代MT 30.5。相比于MT 30.5，MT 30.6的修訂變化主要有二。一是在卡爾·費(fèi)休容量法的基礎(chǔ)上新增了卡爾·費(fèi)休庫倫法，卡爾·費(fèi)休容量法適合測定含水量>0.1%的樣品，而卡爾·費(fèi)休庫倫法對水分更為敏感，適合測定含水量在0.001%～1%的樣品。特別是對于含水量<0.5%的樣品，更建議采用庫倫法。二是對卡爾·費(fèi)休容量法中樣品的稱樣量進(jìn)行了修訂，修訂后滴定相同水分含量所需的樣品量和消耗的試劑體積都有所減少 (表2)。

表2 卡爾·費(fèi)休容量法樣品稱樣量與含水量對應(yīng)關(guān)系

3.2 顆粒制劑流動(dòng)性試驗(yàn) 流動(dòng)性試驗(yàn)主要用于評價(jià)農(nóng)藥顆粒制劑在儲存后是否存在結(jié)塊、難以分散的情況。2019年，MT 172.2作為CIPAC正式方法被接受，測定結(jié)果與MT 172.1具有等同性。與MT 172.1相比，MT 172.2在試驗(yàn)操作部分更加詳細(xì)地描述了樣品熱儲后未經(jīng)跌落、跌落5次或跌落20次后流動(dòng)性的評價(jià)過程(圖1)，同時(shí)新增了流動(dòng)性的計(jì)算公式以及結(jié)果的報(bào)告形式。

圖1 顆粒制劑流動(dòng)性的評價(jià)過程及報(bào)告形式

此外，MT 172.2在方法文本上也有相應(yīng)的修改，包括新增了試驗(yàn)裝置圖和熱儲條件(同加速儲存穩(wěn)定性試驗(yàn))，更新了試驗(yàn)篩的參考依據(jù)，刪除了孔徑為4.75 mm的試驗(yàn)篩以及對橡膠墊硬度的要求。

目前我國在農(nóng)藥登記產(chǎn)品化學(xué)資料要求中未對顆粒制劑的流動(dòng)性進(jìn)行要求，且未制定測定產(chǎn)品流動(dòng)性的方法標(biāo)準(zhǔn)。

3.3 懸浮率試驗(yàn) 2019年，懸浮率測定方法MT 184.1被接受為CIPAC正式方法。與MT184相比，MT184.1主要有以下幾方面的變化：

3.3.1 對樣品懸浮液的制備方式進(jìn)行了修訂 MT 184中，固體樣品的懸浮液配制分為預(yù)制漿(with creaming)和非預(yù)制漿(without creaming)兩種方式，MT184.1在內(nèi)容上對2種制備方式進(jìn)行了修訂統(tǒng)一，將非預(yù)制漿的詳細(xì)操作過程放入了注釋，具體修訂的細(xì)節(jié)(表3)。

表3 樣品懸浮液的制備方式比較

此外需要注意的是，MT184對于液體樣品未要求量筒中需提前加入標(biāo)準(zhǔn)硬水，MT184.1則規(guī)定需在量筒中預(yù)先加入約100～200 mL的標(biāo)準(zhǔn)硬水，或直接在裝有標(biāo)準(zhǔn)硬水的量筒中稱取樣品。

3.3.2 MT 184.1對方法的適用濃度范圍進(jìn)行了修改 懸浮率的測定應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品推薦使用的實(shí)際濃度進(jìn)行，若有多個(gè)推薦使用濃度，則建議在方法適用濃度范圍內(nèi)測定最高和最低推薦使用濃度下的懸浮率。MT184規(guī)定，若實(shí)際最低使用濃度<0.2%，則為按0.2%進(jìn)行測定。MT184.1將方法的適用濃度范圍修改為0.1%～10%，對于推薦使用濃度<0.1%的產(chǎn)品，按照0.1%配制樣品溶液；考慮到過量樣品沉降后會對實(shí)際定容體積產(chǎn)生影響，因此實(shí)際使用濃度>10%的按照10%配制。

3.3.3 MT184.1與MT 184相比一個(gè)較大的變化是引入了再懸浮(Re-suspensibility)的概念及測定方法 在測定懸浮率時(shí)，樣品用標(biāo)準(zhǔn)硬水配制好后，在量筒中經(jīng)上下顛倒30次、靜置30 min后可直接移走9/10體積的懸浮液，并測定剩余1/10體積液體中有效成分的含量。而修訂的MT184.1考慮到在田間實(shí)際操作過程中，配制的有些藥液放置一段時(shí)間后經(jīng)輕微攪動(dòng)十分易于再分散，因此對于懸浮率低于60%或者高于105%的產(chǎn)品，則需要在測定懸浮率的基礎(chǔ)上測定再懸浮率，即樣品溶液靜置30 min后重新顛倒30次，隨后再按照懸浮率測定步驟進(jìn)行。目前，我國《農(nóng)藥懸浮率測定方法》(GB 14825-2006)中尚未對再懸浮率做出要求與規(guī)定。

3.3.4 為了更便于操作，MT184.1對方法溫度的要求從30±2°C修改為室溫(25±5°C)。

此外，MT184.1在方法的一些細(xì)節(jié)上也做出了修改，具體(表4)。

表4 MT 184.1修訂匯總表

3.4 加速儲存穩(wěn)定性試驗(yàn) 2020年，MT 46.4被接受為CIPAC正式方法，取代了加速儲存穩(wěn)定性試驗(yàn)方法MT 46的所有現(xiàn)有版本。作為所有制劑加速儲存穩(wěn)定性試驗(yàn)的統(tǒng)一方法，與舊版本相比，MT 46.4中加速儲存條件保持不變，主要對不同劑型的加速貯存程序進(jìn)行了協(xié)調(diào)。其中，液體、粉狀、顆粒狀制劑可轉(zhuǎn)移至具有密封性的玻璃瓶中儲存或直接采用包裝袋儲存；長效防蚊帳(LN)和長效儲存袋(LB)可根據(jù)相關(guān)規(guī)范或分析方法要求取所需尺寸和數(shù)量的樣品置于玻璃瓶中儲存，或直接采用包裝袋整袋儲存；基質(zhì)釋放型劑型(MR)為避免存儲過程中有效成分的遷移，需將每個(gè)樣品單獨(dú)用鋁箔紙包裹后在密封袋中儲存，也可直接采用包裝袋儲存。

3.5 耐磨性試驗(yàn) 在舊版本中，MT 178和MT178.2分別規(guī)定了顆粒劑和水分散粒劑的耐磨性測定方法，最新修訂的MT178.3將二者進(jìn)行了合并統(tǒng)一，合并后的方法適用范圍更為廣泛，可用于測定多種顆粒制劑在正常運(yùn)輸、儲存和處理過程中的磨損情況。

在測定顆粒劑、片劑、可溶片劑及水分散片劑等制劑的耐磨性時(shí)，為增加振篩過程中的摩擦度需加入等量的玻璃珠。MT178.3詳細(xì)的描述了不同粒徑的玻璃珠與樣品的分離方式，具體過程(圖2)：(a)玻璃珠粒徑大于樣品時(shí)，首先采用粗目篩篩出未磨損的樣品及磨損脫落的顆粒，隨后再用125 μm的篩子振篩；(b)樣品粒徑大于玻璃珠時(shí)，首先用粗目篩篩離未磨損樣品，之后玻璃珠及磨損脫落的顆粒再通過較小的篩網(wǎng)進(jìn)行篩分，最后將未磨損的樣品及磨損脫落的顆粒合并于125 μm的篩子上，進(jìn)行振篩；(c)若樣品與玻璃珠難以分離，則使用鑷子直接將玻璃珠夾出，之后再利用125 μm的篩子篩去振篩后脫落的顆粒。對于水分散粒劑、乳粒劑、可溶粒劑而言，測定過程中則無需加入玻璃珠。

圖2 振篩前樣品與玻璃珠分離的試驗(yàn)過程：(a)玻璃珠粒徑大于樣品；(b)樣品粒徑大于玻璃珠；(c)玻璃珠與樣品難以分離。

MT178.3對振篩后樣品稱重的步驟也進(jìn)行了簡化，MT 178和MT 178.2在計(jì)算產(chǎn)品的脫落率時(shí)需將125 μm篩上未磨損的樣品轉(zhuǎn)移到表面皿上再進(jìn)行稱重。MT178.3則是分別稱重篩子、篩子與未磨損樣品的總重，通過計(jì)算二者的差值獲得未磨損樣品的重量。

此外，新修訂的MT 178.3還新增了對報(bào)告的要求，包括：(1)耐磨性報(bào)告結(jié)果需精確到0.1%；(2)若片劑在包裝中已破損則需在報(bào)告中進(jìn)行說明。

3.6 濕篩試驗(yàn) MT185.1對MT182(利用循環(huán)水的濕篩法)和MT185進(jìn)行了修訂合并。MT185.1與MT182和MT185相比，需要特別注意以下幾點(diǎn)變化：(1)沖洗濕篩上殘余物的水流速度發(fā)生變化。水流速度由原來的4～5 L/min修改至1～5 L/min，同時(shí)規(guī)定，在沖洗過程中若無可見殘留物則可停止試驗(yàn)。(2)試驗(yàn)溫度發(fā)生變化。MT185和MT182中規(guī)定用于沖洗樣品溶液的自來水溫度需控制在5～15℃，最新修訂的MT185.1取消了對水溫的單獨(dú)規(guī)定，要求所有操作在室溫下進(jìn)行即可(20～30℃)。此外，濕篩后殘余物的烘干溫度也由原來方法中規(guī)定的60～70℃改為70℃，僅在注釋中說明為避免樣品的分解可適當(dāng)?shù)慕档蜏囟取?3)MT185.1中增加了濕篩殘余物的計(jì)算公式和報(bào)告要求，其中殘余物稱量的精度要求由原來的0.01 g修改為0.001 g；報(bào)告中殘留在濕篩上的殘余物需精確至0.1%，若無可見的殘余物，結(jié)果記為<0.1%即可，無需稱重。

4 總結(jié)

通過對上述理化測定方法比較可以看到，CIPAC方法的修訂涉及到文本描述、方法操作、結(jié)果報(bào)告等多個(gè)方面，具有以下幾大特點(diǎn)：一是較強(qiáng)的科學(xué)性，新修訂的方法更加考慮實(shí)際操作的情況，在不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的前提下刪除了某些不必要的要求，例如在多個(gè)方法中刪去了對試驗(yàn)溫度的特定要求。二是較好的規(guī)范性，對于過去同一指標(biāo)不同制劑多個(gè)方法的情況，經(jīng)過最新的修訂協(xié)調(diào)統(tǒng)一為單一方法，既擴(kuò)大了方法的使用范圍，也提升了方法應(yīng)用的便捷性。三是較高的先進(jìn)性，隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步及分析水平的提升，舊的分析方法精度低、操作繁瑣，難以滿足當(dāng)前分析試驗(yàn)的要求。CIPAC方法在修訂時(shí)引入新技術(shù)、補(bǔ)充新設(shè)備，更新了對方法操作及報(bào)告的要求，有效地提升了方法應(yīng)用的實(shí)用性。分析工作者在引用CIPAC方法時(shí)要特別注意方法的更新情況，了解方法修訂的內(nèi)容與細(xì)節(jié)，盡可能采用最新發(fā)布的方法；若采用了舊版本的方法，還需注意采用不同版本方法測定的結(jié)果是否具有等同性。