HNF1β在輸卵管妊娠黏膜中的表達及意義

王宇，李改改，張茜，張紅兵，和娟

1山西迪安醫學檢驗中心，太原 030032；2山西白求恩醫院病理科，太原 030023

輸卵管是最常見的宮腔以外妊娠部位，通常發生于輸卵管壺腹部。輸卵管妊娠導致的急腹癥是女性最常見的病癥之一，嚴重威脅女性的身體健康及生命安全[1-2]。關于輸卵管妊娠的相關研究主要集中于臨床保守治療方面的探索，但其發生機制目前仍未可知[3]。本研究組在臨床病理診斷工作中發現，在輸卵管子宮內膜異位癥患者中，異位的子宮內膜腺體HNF1β 呈陽性表達，而其旁的正常輸卵管上皮缺失表達。受這一現象啟示，我們猜想：輸卵管妊娠時，輸卵管上皮是否會模擬異位的子宮內膜出現HNF1β 表達？HNF1β 是否參與了輸卵管妊娠的分子機制？本研究將通過免疫組織化學的方法，分別檢測正常子宮內膜、輸卵管上皮及輸卵管妊娠組織中HNF1β 的蛋白表達情況，初步探討HNF1β 在輸卵管妊娠過程中的分子機制。

1 材料與方法

1.1 病例資料 收集2021 年6 月至2022 年5 月山西迪安醫學檢驗中心病理診斷為輸卵管妊娠的標本34例，同時收集同期育齡期女性正常輸卵管組織20 例及增殖期子宮內膜組織14 例作為對照。所有病例均經2 位主治醫師以上病理醫師確診。本研究符合倫理原則。

1.2 方法

1.2.1 病理制片及光鏡觀察 所有標本均經4%中性甲醛固定6～8 h，規范取材，組織經梯度酒精脫水、二甲苯透明、浸蠟、石蠟包埋，3 μm 厚切片，行HE染色。光鏡觀察。

1.2.2 免疫組織化學染色 試劑HNF1β（克隆號OTIR2E9）購自北京中杉生物有限公司。免疫組化染色采用美國羅氏公司全自動多功能組織病理檢測系統（Bench Mark XT）制片。

1.3 免疫組織化學染色結果判定標準 參照文獻判讀標準[4]，HNF1β 陽性表達著色部位為細胞核，為棕黃色至棕褐色斑塊狀。染色結果由陽性細胞著色強度及百分率分別進行評分。細胞核著色強度評定：無著色為0 分，淡棕色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分；陽性細胞百分率由兩位病理副主任級別以上醫師分別計算并取平均值，高倍鏡下（400×）隨機取5 個不同視野，計數細胞總數及陽性細胞數，陽性細胞百分率評定：無陽性細胞為0 分，陽性細胞數≤10%為1 分，11%～50%為2 分，51%～75%為3 分，＞75%為4 分。將兩項得分結果相乘：＞3 分為陽性（+）。

1.4 統計學方法 應用SPSS 21.0 統計軟件進行統計分析，計數資料采用χ2檢驗，以P＜0.05 作為差異有統計學意義的標準。

2 結果

免疫組織化學染色結果顯示，HNF1β 陽性表達部位為細胞核，在正常增殖期子宮內膜腺上皮中呈強陽性表達；在正常輸卵管上皮中陰性；在輸卵管妊娠組織中，HNF1β 出現異常表達。見圖1。與正常輸卵管上皮相比，輸卵管妊娠中HNF1β 異常表達有統計學差異（P＜0.01），見表1；而與正常增殖期子宮內膜相比，HNF1β 的表達情況無統計學差異（P＞0.05），見表2。

表1 HNF1β在各組別間的表達 [例（%）]

表2 HNF1β在各組別間的表達 [例（%）]

圖1 免疫組織化學染色結果

3 討論

輸卵管妊娠是最常見的臨床急腹癥之一，嚴重影響女性的健康與生命安全。有關輸卵管妊娠的相關研究目前主要集中于保守治療方面，尤其是甲氨蝶呤的臨床應用[5-7]。而關于輸卵管妊娠的分子機制方面的研究甚少，且更新緩慢。本研究組查閱Pubmed 官方網站，有關輸卵管妊娠機制方面的文獻僅63 篇，近5 年的文獻僅有10 篇。因此，輸卵管妊娠的機制研究成為臨床亟待推進的問題。Refaat 等[8]的研究結果顯示，維生素D（vitamin D，VD）相關分子及Ca2+傳感受體（CaSP）在輸卵管妊娠中出現異常表達，除VD 結合蛋白外，其他作用于VD 的相關蛋白酶的水平均出現下降。Wang 等[9]研究顯示，腎上腺髓質素（adrenomedullin，ADM）在正常輸卵管中為高表達狀態，從而顯著抑制巨噬細胞產生促炎因子IL-6及IL-8。在輸卵管妊娠時，ADM 出現異常的缺失表達，將明顯減弱對巨噬細胞的抑制作用，導致促炎因子IL-6、IL-8 水平升高，引發輸卵管炎癥反應，提示ADM 的缺失表達可能在輸卵管妊娠過程中起重要的分子調節作用。Grudzinski 等[10]針對輸卵管妊娠的研究結果顯示，抗白細胞蛋白酶Elafin 在輸卵管妊娠中出現低表達，可能與輸卵管炎及輸卵管妊娠的發生機制有相關性。而另一項有關Elafin 的研究結果顯示[11]，與正常輸卵管組織相比，輸卵管妊娠組織中Elafin 蛋白水平及RNA 水平均出現明顯上調。因此，有關輸卵管妊娠的分子機制仍是臨床亟待解決的科學問題。

肝細胞核因子-1β（hepatocyte nuclear factor-1β，HNF1β）基因位于17q12，是參與肝、腎、胰腺和苗勒氏管等多種組織發育的關鍵轉錄因子，又名轉錄因子2。該基因的雜合突變可導致青少年起病的成人型糖尿?。╩aturity-onset diabetes of the young，MODY）。HNF1β 基因在女性生殖器官畸形中的作用最早在1 個MODY 家族中被研究[12]。

臨床病理工作中，HNF1β 在卵巢癌的診斷中起重要的輔助診斷作用，尤其是卵巢透明細胞癌和其他伴有透明細胞改變的卵巢癌的鑒別。有研究發現，HNF1β 在子宮內膜異位癥上皮中表達。本研究組發現，發生于輸卵管的子宮內膜異位癥上皮表達HNF1β，定位于細胞核，而正常的輸卵管上皮不表達HNF1β，這一現象啟發我們：輸卵管妊娠時，輸卵管上皮是否會模擬子宮內膜上皮，出現HNF1β 的表達？HNF1β 是否參與了輸卵管妊娠的發生？

本研究通過免疫組織化學的方法對輸卵管妊娠組織進行了HNF1β 蛋白水平檢測，結果顯示，正常輸卵管黏膜不表達HNF1β 蛋白，而輸卵管妊娠時，輸卵管上皮卻呈現HNF1β 蛋白的核表達。本研究同時檢測了人正常子宮內膜腺體中HNF1β 的表達情況，結果顯示，HNF1β 在人正常子宮內膜腺體中表現為核表達。因此，輸卵管妊娠時，輸卵管黏膜中HNF1β 蛋白出現了與正常子宮內膜腺體相似的表達模式，這一研究結果提示，輸卵管妊娠時，輸卵管上皮模擬子宮內膜腺體，出現HNF1β 蛋白的異常表達。HNF1β 在輸卵管上皮中的異常表達，可能是誘導受精卵著床，引發輸卵管妊娠的分子事件。本研究結果為下一步針對輸卵管妊娠的分子機制研究提供了理論基礎。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。