TEM7在胃癌組織和癌旁組織表達及其與患者臨床病理特征的關系

何昊天 何憶月 樓燕紅

(義烏市中心醫(yī)院 1普通內(nèi)科,浙江 義烏 322000;2急診內(nèi)科)

胃癌是全球常見的惡性腫瘤之一,致死率位列第二〔1〕。胃癌是多因素、多步驟、多階段的發(fā)展過程,由遺傳因素、地理環(huán)境因素、飲食因素、幽門螺桿菌、精神因素等引起〔2〕。大部分胃癌患者早期無癥狀表現(xiàn),部分可有飽脹不適、消化不良、上腹痛等輕微不適,常因食欲減退及腫瘤消耗等導致體質(zhì)量下降,就診時很可能已發(fā)展至中晚期,所以許多胃癌患者預后生存較差。盡管在胃癌的檢測和治療方面已有了一些突破性進展,但其死亡率仍較高。因此,尋找有效的指標評估患者病情,并及時采取有效措施控制預后具有重要意義。腫瘤血管是腫瘤賴以生長和轉(zhuǎn)移的基礎,在腫瘤演進中具重要地位。腫瘤內(nèi)皮標志物(TEMs)與腫瘤特異性血管生成相關,與正常血管內(nèi)皮細胞比較,腫瘤血管內(nèi)皮細胞具有更強的血管生成能力及藥物抵抗作用,因此TEMs 可作為區(qū)分腫瘤細胞的重要輔助指標〔3〕。TEM7是TEMs之一,在多種腫瘤組織的血管內(nèi)皮中均可見特異性表達〔4〕。但國內(nèi)關于TEM7在胃癌組織表達的相關報道尚處于初步階段,本研究旨在探討TEM7表達及其與胃癌患者臨床病理特征及預后的關系。

1 材料與方法

1.1一般資料 選取義烏市中心醫(yī)院2017年1月至2021年1月行胃癌根治術的122例胃癌患者,收集患者胃癌組織和癌旁正常組織(距離腫瘤邊緣5 cm以上,且無腫瘤浸潤)。納入標準:①符合胃癌相關診斷標準〔5〕,并經(jīng)病理確診;②年齡38～80周歲;③術前未進行任何抗腫瘤治療;④醫(yī)生預計患者生存期>3個月。排除標準:①存在嚴重的心、腦、肝、腎功能障礙;②存在嚴重血液系統(tǒng)相關疾病;③存在其他惡性腫瘤;④既往存在胃部手術史。其中男69例,女53例;年齡43～76歲,平均(59.51±8.26)歲。

1.2TEM7表達采用免疫組化法檢測 所有操作嚴格按照試劑盒說明書進行:石蠟組織切片,常規(guī)脫蠟至水(依次經(jīng)二甲苯,100%乙醇,95%乙醇,90%乙醇,80%乙醇和70%乙醇處理5 min,各2次)。再用1.5%H2O2-CH3OH溶液37 ℃處理30 min,封閉,37 ℃孵育30 min。分別加一抗TEM7抗體4 ℃孵育過夜,使用5%兔血清而作為空白對照。加生物素標記的羊抗兔IgG,37 ℃孵育30 min,二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色(現(xiàn)用現(xiàn)配),鏡下控制顯色程度,自來水沖洗,蘇木素復染胞核,烤干,二甲苯透明后中性樹膠封片。結(jié)果判讀:隨機選取10個高倍鏡(×400)視野,觀察陽性細胞數(shù),取平均值,以陽性細胞百分比進行評分,依次為0分(<5%)、1分(5%～25%)、2分(26%～50%)、3分(51%～75%)、4分(>75%);按染色強度評分:顏色從淺到深依次為0分(未著色),1分(淺黃色),2分(棕黃色),3分(棕褐色)。兩類評分的乘積為免疫組織化學染色評分,≥3分為TEM7陽性表達〔6〕。

1.3隨訪 所有入組患者術后進行隨訪,每3個月以電話或門診復查的形式進行,截止時間為2022年6月,以患者死亡時間或隨訪截止時間為隨訪終點。

1.4觀察指標 根據(jù)本研究目的,設立醫(yī)院專職人員收集患者臨床資料,包括年齡、性別、癌變部位、腫瘤直徑、腫瘤分化程度、腫瘤浸潤胃壁深度、臨床分期、淋巴轉(zhuǎn)移情況、術后是否輔助治療。比較TEM7在胃癌組織和癌旁組織中的表達差異,分析其表達與臨床病理特征及預后的關系。

1.5統(tǒng)計學方法 應用SPSS22.0統(tǒng)計學軟件行t檢驗、χ2檢驗、Kaplan-Meier分析、Log-rank檢驗及Cox風險回歸分析。

2 結(jié) 果

2.1胃癌組織與癌旁正常組織中TEM7表達 胃癌組織中TEM7陽性表達率〔65.57%(80/122)〕高于癌旁正常組織〔36.07%(44/122)〕,差異有統(tǒng)計學意義(χ2=21.252,P<0.001)。

2.2TEM7表達與胃癌患者臨床病理特征的關系 TEM7陽性表達與腫瘤分化程度、腫瘤浸潤胃壁深度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(P<0.05),與年齡、性別、癌變部位、腫瘤直徑及術后輔助治療無關(P>0.05)。見表1。

表1 TEM7陽性表達與胃癌患者臨床病理特征的關系〔n(%)〕

2.3TEM7表達與胃癌患者生存預后的關系 對122例胃癌患者進行術后隨訪12～66個月,隨訪期間死亡患者62例,其中TEM7陽性表達患者48例,陰性表達患者14例。生存曲線顯示,TEM7陽性表達患者中位無進展生存時間為27(12～44)個月,短于TEM7陰性表達患者的49(13～49)個月,差異有統(tǒng)計學意義(Log-rankχ2=8.820,P=0.003);TEM7陽性表達患者總生存時間為33(12～50)個月,短于TEM7陰性表達患者的49(16～49)個月,差異有統(tǒng)計學意義(Log-rankχ2=5.506,P=0.019)。見圖1。

2.4Cox風險回歸模型評估胃癌患者總體生存預后的危險因素 以患者臨床病理特征及TEM7表達陽性為變量,構(gòu)建Cox風險回歸模型,結(jié)果顯示,腫瘤分化程度、腫瘤浸潤胃壁深度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TEM7表達陽性與總生存期和無進展生存期存在相關性(P<0.05)。TEM7陽性表達是影響胃癌患者總生存期和無進展生存期的獨立風險因素(HR=4.178、5.613,95%CI:1.654～10.836、1.668～17.143,均P<0.05)。見表2。

表2 影響胃癌患者生存預后危險因素的Cox 風險回歸分析

3 討 論

胃癌是上消化管的惡性疾病,常見于胃的賁門處、胃體處、幽門處等,預后相對較差,嚴重威脅人類健康。近年來隨著早期胃癌發(fā)病率的提高,手術方法的改進和綜合治療的應用,胃癌的治愈率有所提高,但由于我國人口特征原因,胃癌在我國的疾病負擔依舊較重〔7〕。胃癌由環(huán)境因素、一般性及特異性的遺傳變異累積共同引起,遺傳變異與疾病風險有關,但其發(fā)病機制至今尚未完全闡明。因此進一步探討與胃癌病情發(fā)展相關臨床病理特征及預后有關的蛋白分子,有效的分子標志物可以幫助醫(yī)生更早發(fā)現(xiàn)胃癌,提高患者診斷準確性,為治療和預后提供更多信息。持續(xù)的血管生成是腫瘤細胞重要特點之一,成為腫瘤惡性生長的關鍵環(huán)節(jié)之一,新生血管促進癌塊生長,還為癌細胞的血液轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移創(chuàng)造了條件〔8〕。腫瘤血管的特征是形態(tài)和功能異常,包括腫瘤特異性分子的表達,TEMs在人腫瘤內(nèi)皮中的表達是正常內(nèi)皮的20倍〔9,10〕。TEM7是TEM家族的重要成員,也是最有前景的腫瘤新生血管標志物之一,其在多種腫瘤內(nèi)皮細胞中呈現(xiàn)高表達〔11〕。本研究結(jié)果表明TEM7可能與胃癌患者病情發(fā)生、發(fā)展有關。研究〔12〕報道,TEM7在腫瘤組織中并非特異性表達于腫瘤血管內(nèi)皮細胞,還可見于腫瘤組織的癌細胞、血管平滑肌細胞中,甚至在正常組織中也有表達。Wang等〔13〕研究表明,TEM7表達在內(nèi)皮細胞毛細血管形態(tài)發(fā)生中至關重要。Carpenter等〔14〕研究報道,TEM7是膠質(zhì)瘤相關癌基因同源物1誘導血管生成的潛在重要介質(zhì)。綜上TEM7與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有一定關聯(lián),但可能不同的癌組織中有不同的表達情況,需分析不同臨床病理參數(shù)癌癥患者的TEM7表達情況。Geng等〔15〕研究報道,TEM7表達與胃癌患者腫瘤分化程度和臨床分期有關;Zhang等〔16〕研究報道,在胃癌患者中,TEM7表達升高,其水平與腫瘤分化程度、腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期相關。本研究亦發(fā)現(xiàn),TEM7陽性表達與胃癌患者腫瘤分化程度、腫瘤浸潤胃壁深度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關。本研究結(jié)合以上報道提示TEM7參與了胃癌的發(fā)生和發(fā)展,在胃癌治療中的重要意義,將為胃癌分子靶向治療提供新思路。本研究Kaplan-Meier生存曲線顯示,TEM7陽性表達患者無進展生存時間和總生存時間均低于TEM7陰性表達患者,Pietrzyk等〔17〕和Czekierdowski等〔18〕研究顯示,TEM7陽性表達患者預后生存率較低。本研究結(jié)果表明,下調(diào)TEM7表達可能會延長胃癌患者的術后生存時間,進一步提示TEM7作為胃癌分子靶向治療的可行性。

綜上,TEM7陽性表達與胃癌患者臨床病理特征和預后密切相關,可作為評估病情進展及預后的輔助指標,采用相應的分子靶向治療可能有助于提高胃癌患者的術后生存率。但TEM7在胃癌中的具體作用機制尚不清楚,還需進一步采用體外細胞試驗或動物試驗探索TEM7參與胃癌病情發(fā)生、發(fā)展的作用機制及作為胃癌治療靶點新方向的可能性。