中藥口服液體制劑工藝過程中質量標志物傳遞規律及關鍵環節優化策略

康朝霞，孫 娥*，姜夢華，楊 擋，汪 晶，黃一平*，李 超，朱法根，邵建國，封 亮，賈曉斌

（1.南京中醫藥大學附屬中西醫結合醫院，江蘇省中醫藥研究院，國家中醫藥管理局中藥口服釋藥系統重點研究室，江蘇 南京 210028； 2.濟川藥業集團有限公司，江蘇省兒科中藥與特色制劑重點實驗室，江蘇 泰興 225400； 3.中國藥科大學中藥學院，江蘇 南京 211198）

中藥口服液體制劑（如合劑、口服液、糖漿劑等）具有吸收快、生物利用度高、服用方便等特點，但其制劑工藝面臨有效成分損失的瓶頸問題。蒲地藍消炎口服液作為中成藥大品種之一，廣泛用于治療呼吸系統疾病［1-2］，但其前處理階段和制劑工藝也會損失成分，在生產過程中黃芩苷、菊苣酸從飲片到制劑的轉移率分別僅為34%、11%［3-4］。因此，本實驗以蒲地藍消炎口服液為例，考察有效成分含量在工藝過程中的變化，探尋其傳遞規律、損失的關鍵環節，并提出相應的增溶技術和優化策略，以期為提升其他中藥口服液體制劑的有效性、內在質量奠定基礎［5］。

1 材料

Waters 2695 型高效液相色譜儀（美國Waters公司）； MT5 型電子分析天平（百萬分之一，瑞士Mettler-Toledo 公司）； BT125D 型電子分析天平［賽多利斯科學儀器（北京）有限公司］； DFT-50型粉碎機（上海新諾儀器集團有限公司）； KH-300TDB 型超聲波清洗器（昆山禾創超聲儀器有限公司）； TD10002A 型電子分析天平（天津天馬衡基儀器有限公司）； DTL-21B 型電陶爐（合肥榮事達電子電器集團有限公司）； pH-10 型手持式PH計（上海力辰邦西儀器科技有限公司）； RE52CS-1型旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）； 80-2 型電動離心機（金壇醫療儀器有限公司）； HH-S4 型恒溫水浴鍋（江蘇金怡儀器科技有限公司）； TD5.5型臺式大容量高速離心機（上海盧湘儀離心機儀器有限公司）。

腺苷（批號110879-201703）、菊苣酸（批號111752-201703）、紫堇靈（批號111734-201602）、黃芩苷（批號110715-201821）、漢黃芩素（批號111514-201706）對照品均購自中國食品藥品檢定研究院。蒲公英、苦地丁、板藍根、黃芩（批號190112、190118、190201、190201）均由濟川藥業集團有限公司提供，經中國藥科大學王龍副教授鑒定為正品。甜菊糖苷（批號ASL613，上海源葉生物科技有限公司）； 氫氧化鈉（批號20180601，西隴科學股份有限公司）； 藥用乙醇 （ 批號200525130B，南京化學試劑股份有限公司）。甲醇為色譜純（美國Tedia 公司）； 水為娃哈哈純凈水。

2 方法

2.1 對照品溶液制備 精密稱取腺苷、菊苣酸、紫堇靈、黃芩苷、漢黃芩素對照品適量，50%甲醇溶解，制成貯備液（每1 mL 分別含腺苷0.94 mg、菊苣酸2.04 mg、紫堇靈0.50 mg、黃芩苷2.02 mg、漢黃芩素0.40 mg），分別精密吸取適量，置于5 mL 量瓶中，50%甲醇定容，制成每1 mL 分別含腺苷37.68 μg、菊苣酸407.80 μg、紫堇靈19.88 μg、黃芩苷1.21 mg、漢黃芩素7.90 μg 的溶液，即得。

2.2 色譜條件 參考文獻 ［6］報道，Agilent XBridge C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）； 流動相甲醇-0.1%磷酸，梯度洗脫（0～15 min，5% ～15%甲醇； 15 ～30 min，15% 甲醇； 30 ～35 min，15% ～25% 甲醇； 35 ～70 min，25% ～50% 甲醇；70～90 min，50% ～80%甲醇，90 ～100 min，80% ～5%甲醇）； 體積流量1 mL／min； 柱溫30 ℃； 檢測波長280 nm； 進樣量10 μL。色譜圖見圖1。

圖1 各成分HPLC 色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of various constituents

2.3 供試品溶液制備

2.3.1 飲片 蒲公英、苦地丁、板藍根、黃芩粉碎后過4 號篩，分別稱取1.0 g，置于錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱定質量，超聲提取30 min，靜置至室溫，50%甲醇補足減失的質量，過0.45 μm 微孔濾膜，即得（編號S0）。

2.3.2 3 味藥合提 取蒲公英500 g、板藍根188 g、苦地丁125 g，加水煎煮2 次，每次1 h，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度為1.13 ～1.15（60～70 ℃）的清膏，加乙醇使含醇量為75%，靜置48 h，濾過，濾液回收乙醇，加水至500 mL，放置48 h，濾過，濾液用10%NaOH 溶液調pH 值至6.5，得到流浸膏。按照相關制備工藝，收集3味藥提取液（S1）、3 味藥濃縮液（S2）、3 味藥醇沉上清液（S3）、3 味藥回收乙醇后流浸膏（S4），分別精密量取0.5 mL，置于10 mL 量瓶中，50%甲醇定容至刻度，0.45 μm 微孔濾膜過濾，即得。

2.3.3 黃芩單提 取黃芩188 g，投入沸水中煎煮2 次，每次先煎煮10 min，用10% NaOH 溶液調pH 值至6.5，再煎煮1 h，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度為1.08 ～1.11 （60 ～70 ℃），調pH 值至6.5，加乙醇使含醇量達50%，靜置24 h，濾過，濾液回收乙醇，加1 倍量水混勻，濾過，濾液在80 ℃下保溫，鹽酸調pH 值至1.5，保溫0.5 h，放置24 h，濾過，沉淀物用70% 乙醇洗至中性，得粗品，加500 mL 水，在80 ℃下保溫溶解，10%NaOH 溶液調pH 值至6.5，得到流浸膏。按照相關制備過程，收集黃芩提取液（S5）、黃芩濃縮液（S6）、黃芩醇沉并回收乙醇后流浸膏（S7）、黃芩加水稀釋后濾液（S8）、黃芩苷加水溶解（S9）、黃芩苷調pH 后濾液（S10），分別精密量取0.5 mL，置于10 mL 量瓶中，50% 甲醇定容至刻度，0.45 μm 微孔濾膜過濾，即得。

2.3.4 制劑階段 將“2.3.2” “2.3.3” 項下藥液合并，在2 ～8 ℃下冷藏靜置，濾過，離心，濾過，加入0.5% 甜菊糖苷，濾過，定容至1 000 mL，分裝、滅菌得到成品。按照相關制備過程，收集兩部分合并藥液 （S11）、冷藏靜置后濾液（S12）、離心后濾液（S13）、加甜菊糖苷后濾液（S14）、滅菌后成品 （S15），分別精密量取0.5 mL，置于10 mL 量瓶中，50% 甲醇定容至刻度，0.45 μm 微孔濾膜過濾，即得。

3 結果

3.1 質量標志物含量測定

3.1.1 線性關系考察 分別精密吸取貯備液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，置于1.0 mL 量瓶中，50%甲醇定容，濾過，在“2.2” 項色譜條件下進樣測定。以對照品質量濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y）進行回歸，結果見表1，可知各質量標志物在各自范圍內線性關系良好。

表1 各質量標志物線性關系Tab.1 Linear relationships of various quality markers

3.1.2 精密度試驗 取對照品溶液10 μL，在“2.2” 項色譜條件下進樣測定6 次，測得腺苷、菊苣酸、紫堇靈、黃芩苷、漢黃芩素峰面積RSD分別為0.89%、0.98%、0.78%、0.93%、0.96%，表明儀器精密度良好。

3.1.3 穩定性試驗 取供試品溶液（S14）適量，室溫下于0、4、8、12、24 h 在“2.2” 項色譜條件下進樣測定，測得腺苷、菊苣酸、紫堇靈、黃芩苷、漢黃芩素峰面積RSD 分別為1.5%、2.1%、0.82%、0.97%、2.6%，表明溶液在24 h 內穩定性良好。

3.1.4 重復性試驗 精密吸取供試品溶液（S14）1.0 mL，共6 份，置于10 mL 量瓶中，50%甲醇定容，搖勻，0.45 μm 微孔濾膜過濾，在“2.2” 項色譜條件下進樣測定，測得腺苷、菊苣酸、紫堇靈、黃芩苷、漢黃芩素含量RSD 分別為2.1%、1.7%、0.54%、0.43%、1.9%，表明該方法重復性良好。

3.1.5 加樣回收率試驗 精密吸取供試品溶液（S14）0.5 mL，共6 份，置于10 mL 量瓶中，精密加入對照品溶液適量，50%甲醇定容至刻度，搖勻，0.45 μm 微孔濾膜過濾，在“2.2” 項色譜條件下進樣測定，計算回收率。結果，腺苷、菊苣酸、紫堇靈、黃芩苷、漢黃芩素平均加樣回收率分別 為 103.9%、102.4%、96.07%、99.81%、101.6%，RSD 分別為 2.1%、0.93%、1.1%、1.6%、2.6%。

3.2 質量標志物傳遞規律研究

3.2.1 3 味藥合提 如表2、圖2 所示，提取液到流浸膏過程中腺苷轉移率分別為 66.11%、58.68%、44.56%、41.16%，損失率分別為7.42%、14.12%、3.40%； 紫堇靈轉移率分別為72.06%、47.97%、30.15%、27.81%，損失率分別為24.09%、17.82%、2.34%； 菊苣酸轉移率分別為79.01%、64.39%、47.18%、45.26%，損失率分別為14.62%、17.22%、1.91%，可知各成分主要在濃縮、醇沉環節損失，其中菊苣酸、腺苷損失率在醇沉環節較高，而紫堇靈損失率在熱處理濃縮環節較高。

表2 各質量標志物含量測定結果Tab.2 Results of content determination of various quality markers

3.2.2 黃芩單提 如表2、圖2 所示，黃芩從提取到黃芩苷調pH 后濾液環節黃芩苷轉移率分別為95.89%、79.65%、63.65%、60.13%、39.06%、36.38%，損失率分別為 16.23%、16.00%、3.53%、21.07%、2.68%； 漢黃芩素轉移率分別為83.11%、67.39%、53.86%、50.99%、37.16%、36.44%，損失率分別為15.72%、13.52%、2.88%、13.83%、0.72%，可知黃芩苷、漢黃芩素在濃縮熱處理環節、醇沉精制除雜環節，以及黃芩單提獨有的酸沉得到黃芩苷環節損失較大，并且黃芩苷在酸沉環節損失嚴重，損失率達21.07%。

3.2.3 制劑階段 如表2、圖2 所示，腺苷、紫堇靈、菊苣酸、黃芩苷、漢黃芩素轉移率分別從40.80% 下降到34.52%，27.57% 下降到24.03%，44.99% 下降到39.08%，36.32% 下降到31.01%，36.11%下降到33.83%，其中冷藏靜置環節損失較大，損失率分別為3.40%、1.86%、2.21%、2.22%、1.34%。

4 討論與結論

本實驗以蒲地藍消炎口服液為例，系統分析其生產工藝過程中有效成分轉移、損失規律，發現其損失主要集中在濃縮、醇沉環節，同時黃芩在酸沉環節也有較大損失，由于冷藏靜置是制劑階段損失相對較多的共性環節，故考慮通過篩選濃縮方式、優化精制除雜方法、pH 調節、包合技術等手段（圖3）來提高質量標志物轉移率，最終提升制劑有效性。

濃縮是持續加熱的過程，菊苣酸等熱不穩定成分可能會分解，故改變濃縮方式，優化濃縮過程中溫度、壓力等參數有助于保留上述成分。生產中常用的濃縮方式是常壓濃縮、減壓濃縮，前者適用于熱穩定成分，而后者適用于熱敏性或揮發性成分［7-8］。另外，反滲透濃縮、冷凍濃縮是新興濃縮方法，前者優化膜種類和結構，可促進中藥溶質與溶劑分離，而后者可通過調節冷凍溫度、時間來促進不同溶質冰晶析出，從而實現濃縮分離［9-11］。

醇沉是當前中藥口服液體制劑生產過程中主要的精制除雜方法，但部分活性成分會被除去而導致其轉移率下降。醇沉效率受到醇沉物質濃縮液密度、溫度、溶液pH、乙醇體積分數、醇沉時間、靜置溫度、加醇速度，攪拌速度、攪拌時間等因素影響，故優化醇沉工藝有助于減少成分損失［12］。

黃芩苷、漢黃芩素是黃芩主要成分，兩者損失集中在濃縮、醇沉、酸沉環節，其中酸沉是黃芩純化的重點，藥液濃度、酸沉pH、靜置溫度等參數均對其保留率有影響［13-17］。另外，黃芩經堿提、醇沉后再經酸沉得黃芩苷粗品，工藝復雜，耗時長，操作繁瑣，而由堿提改為直接水提時可減少酸沉工序靜置步驟，節約時間，提高生產效率。

冷藏靜置是去除雜質、保證澄明度而進一步提高中藥口服液體制劑穩定性的過程，冷藏靜置環節由于溫度降低，可能會影響有效成分溶解度，故需識別因低溫而導致溶解度降低的成分，并對其進行增溶，從而保證制劑的貨架期。另外，中藥口服液體制劑主要通過調節pH、原生多糖增溶技術（黃芩多糖）、增溶劑、表面活性劑、包合等技術增溶［18-19］。

中藥口服液體制劑成分復雜，同時存在多種極性化合物，不論是藥液精制除雜還是配液所用增溶方法，均需根據處方中成分理化性質和臨床需求來選擇合適的純化手段，以期提升中藥口服液體制劑轉移率。本實驗以蒲地藍消炎口服液為例，立足中藥口服液體制劑范疇，提出制劑工藝中共性環節有效性改善的研究策略，有助于其內在質量的提升。