飼料中添加抗菌肽對肉牛免疫機能的影響

張婕，王法才

山東省蒙陰縣畜牧發展促進中心，山東臨沂 276200

由于抗生素具有強效的抗菌作用，在我國畜禽養殖中被廣泛應用[1]。但抗生素的大量使用甚至是濫用，也給畜禽養殖帶來了較多危害[2]，如細菌耐藥性、毒副作用、畜禽機體免疫功能被抑制以及抗生素在畜禽體內的殘留，到食物鏈的傳送與蓄積，進而對畜禽機體和人體造成安全威脅等[3]。因此，尋找不易產生耐藥性、無藥物殘留的抗生素替代物至關重要。抗菌肽作為一種具有廣譜抗菌活性的小肽，不僅能夠維持微生態均衡、殺滅有害菌，還可以誘導畜禽黏膜免疫功能，進而提升畜禽機體的自身免疫能力[4]。此外，王巖[5]報道了抗菌肽不易產生耐藥性、無殘留、可替代抗生素應用于畜禽和水產品中，提升畜禽的抗病能力和生長性能等。因此，本研究以西門塔爾牛作為研究對象，研究抗菌肽對肉牛機體的體液免疫和細胞免疫功能的影響，旨在為抗菌肽在獸醫臨床上的使用劑量和使用方法提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料和設備

1）試驗動物。選擇80 頭6 月齡、身體健康、體重相近、體況膘情良好的西門塔爾牛進行試驗，在試驗前1周對西門塔爾牛進行適應性飼養。基礎日糧配方參照2022 年9 月15 日阿魯科爾沁牛業協會發布的《西門塔爾牛全程飼養管理技術規程》（T/ALKEQNY0003—2022）中的要求進行配制，飼料中不添加任何抗菌藥物。

2）試驗藥品。抗菌肽購自連云港廣源生物科技有限公司。

3）主要儀器設備。SF-TGL-16M 型臺式高速離心機購自上海菲恰爾分析儀器有限公司，BCD-209BCR 型美菱冰箱購自長虹美菱股份有限公司，ST-360 型酶標儀購自上海科華生物工程股份有限公司。

4）主要試劑。免疫球蛋白G（IgG）測試盒、免疫球蛋白A（IgA）測試盒、免疫球蛋白M（IgM）測試盒、白介素-6（IL-6）測試盒、白介素-10（IL-10）測試盒和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）測試盒，均購自南京建成生物工程研究所。

1.2 試驗方法

1）試驗前西門塔爾牛的臨床檢查。臨床檢查主要包括：一般檢查，如體溫、心率和呼吸等；整體狀態：如體格、精神、姿勢和行為等。

2）試驗動物分組與試驗設計。采用隨機數字表法將經過1 周適應性飼養的80 頭西門塔爾牛均分成4 個組，每組20 頭，分別為對照組、抗菌肽低劑量組、抗菌肽中劑量組、抗菌肽高劑量組。其中，對照組只飼喂基礎日糧；試驗組在每日基礎日糧的基礎上分別添加2、4、6 g 抗菌肽（抗菌肽低劑量組、抗菌肽中劑量組、抗菌肽高劑量組），正式試驗周期為60 d。

3）待檢樣品的采集與制備。試驗第60天，在西門塔爾牛晨飼前，采集試驗各組西門塔爾牛的血液10～15 mL置于4 ℃冰箱中過夜固縮后，使用離心機在3 000 r/min的條件下離心5 min，收集血清，備用。

4）西門塔爾牛血清中細胞因子指標檢測。應用南京建成生物工程研究所生產的白介素-6（IL-6）測試盒、白介素-10（IL-10）測試盒和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）測試盒檢測西門塔爾牛血清中IL-6、IL-10和TNF-α的含量。

5）西門塔爾牛血清中免疫球蛋白指標檢測。應用南京建成生物工程研究所生產的免疫球蛋白G（IgG）測試盒、免疫球蛋白A（IgA）測試盒和免疫球蛋白M（IgM）測試盒檢測西門塔爾牛血清中IgG、IgA和IgM的含量。

1.3 數據處理

本試驗數據采用SPSS 17.0 軟件進行方差分析，數據結果以“平均值±標準差”表示。

2 結果與分析

2.1 西門塔爾牛血清中細胞因子指標檢測結果

由表1 可知，隨著抗菌肽在飼料中添加量的增加，西門塔爾牛血清中IL-10 的含量逐漸升高，IL-6和TNF-α 的含量逐漸降低。與對照組相比，抗菌肽低劑量組、中劑量組和高劑量組西門塔爾牛血清中IL-10 含量分別顯著提高30.33%、51.36%、60.85%，IL-6、TNF-α含量顯著低于對照組。

表1 西門塔爾牛血清中細胞因子指標檢測結果（n=20）ng/L

2.2 西門塔爾牛血清中免疫球蛋白指標檢測結果

由表2 可知，隨著抗菌肽在飼料中添加量的增加，西門塔爾牛血清中IgG、IgA 和IgM 含量逐漸升高。與對照組相比，抗菌肽中劑量組、高劑量組西門塔爾牛血清中IgG 含量分別顯著提高45.03%、51.27%；抗菌肽低劑量組、中劑量組和高劑量組西門塔爾牛血清中IgA 含量分別顯著提高15.94%、36.23%、43.48%。各組血清中IgM 含量無顯著差異。

表2 西門塔爾牛血清中免疫球蛋白指標檢測結果（n=20）g/L

3 討論

畜禽血清中IgG、IgA和IgM可有效反映畜禽血清中免疫球蛋白的整體水平和體液免疫水平[6]。IgG 在血清中的含量最高，其不僅能夠作為畜禽血液和細胞外液中的主要功能性抗體來調節畜禽機體的免疫應答，而且還可以作為再次免疫應答的主要抗體[7]。IgA 主要存在于畜禽的胃腸道和支氣管分泌液、初乳、唾液和淚液中，參與畜禽機體黏膜局部免疫[8]。IgM 作為分子質量最大的免疫球蛋白，其不僅是畜禽生長發育過程中最早合成和分泌的抗體，而且也是抗原刺激誘導的體液免疫應答中最早出現的抗體[9]。本試驗結果顯示，抗菌肽能夠提升肉牛血清中IgG、IgA 和IgM 含量，其中肉牛血清中IgG 和IgA 含量變化顯著。IL-6 是1 種由T 細胞和成纖維細胞分泌的細胞因子，它可以刺激另一種細胞——B 細胞前體成為產生抗體的細胞。同時，它還能夠促進原始骨髓源細胞的成長和分化，增強自然殺傷細胞的裂解能力[10]。IL-10 是1 種具有強大抗炎特性的多效細胞因子，其不僅能夠抑制前炎癥細胞因子產生，而且還可以抑制T 細胞合成IL-2等細胞因子，可促進B 細胞分化增殖[11]。TNF-α 為免疫細胞產生的多功能細胞因子，在細胞凋亡和存活以及免疫和炎癥中發揮關鍵作用[10]。本試驗結果顯示，抗菌肽能夠提升肉牛血清中IL-10 的含量，降低肉牛血清中IL-6 和TNF-α 的含量，抗菌肽能夠有效提高肉牛機體的體液免疫和細胞免疫功能。