慢性乙型肝炎患者肝組織中ICAM-1、NF-κB表達與肝臟炎癥活動度及纖維化程度的相關性分析*

李 濤,李日林,謝宗恕,楊秀珍,佘東明,劉志娟,袁淑芳△

(1.桂林醫學院,廣西桂林 541004;2.廣西醫科大學,南寧 530021;3.柳州市人民醫院感染科,廣西柳州 545006)

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是引起慢性乙型肝炎、肝功能衰竭、肝硬化和肝癌的主要病因[1]。由于病毒變異、細胞分子、免疫功能障礙等多種因素的參與,導致慢性乙型肝炎久治不愈[2]。細胞間黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)是免疫球蛋白超家族的一員,通過與相應配體特異性結合而參與人體內免疫應答[3]。核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)是一個普遍存在的核轉錄因子,在免疫反應、炎癥反應、細胞凋亡和腫瘤發生等多種生理、病理過程中發揮重要作用[4]。研究顯示NF-κB是調控ICAM-1表達的主要信號轉導通路,ICAM-1可以通過調控病毒復制的過程影響病毒增殖[5]。本研究檢測慢性乙型肝炎患者肝組織中ICAM-1、NF-κB的表達,分析其與肝組織炎癥活動度及肝纖維化的關系,以期為臨床肝病診治提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇 2019年10月至 2021年10月柳州市人民醫院66例慢性乙型肝炎患者的肝活檢標本,均符合《慢性乙型肝炎防治指南(2019)》制定的相關診斷標準[6]。其中男36例,女30例,平均年齡(37.6±10.8)歲,輕度、中度、重度慢性肝炎及肝硬化患者分別為22例、15例、14例、15例。選取10例非肝病死亡患者的正常肝組織作為對照,血清乙肝表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎抗體(anti-HCV)、HBV脫氧核糖核苷酸(HBV DNA)、HCV RNA均為陰性。

1.2 方法

原位雜交法檢測肝組織中NF-κB蛋白表達,操作方法按照檢測試劑盒說明書進行。免疫組織化學檢測肝組織中ICAM-1蛋白表達:石蠟切片經常規脫蠟、水化,過氧化物酶封閉、孵育,加入ICAM-1抗體(工作濃度1∶100),加入用生物素標記的第二抗體和鏈霉菌過氧化物酶溶液,室溫孵育,DAB顯色,蘇木素復染,中性樹膠封片[7]。試劑采用小鼠抗人ICAM-1單克隆抗體(美國Zymed公司)和NF-κB原位雜交試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司)。

1.3 結果判斷

ICAM-1蛋白陽性結果為細胞質和/或細胞膜內呈棕黃色顆粒,NF-κB蛋白陽性結果在細胞核或細胞質中可見棕黃色顆粒。抗原染色強度標準:無細胞染色為陰性(-),<10%肝細胞著色為弱陽性(+),10%～50%肝細胞著色為陽性(++),>50%肝細胞著色為強陽性(+++)[7]。

1.4 統計學處理

采用SPSS16.0軟件進行統計學分析。計數資料以例數或百分比表示,比較采用χ2檢驗。相關性采用Spearman相關分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 ICAM-1和NF-κB蛋白在不同肝組織中的表達特征

慢性乙型肝炎患者肝組織ICAM-1、NF-κB蛋白陽性表達率均高于正常肝組織(χ2=26.40,P<0.01;χ2=24.29,P<0.01),見表1、圖1。

A:ICAM-1蛋白在正常肝組織中的表達(400×);B:ICAM-1蛋白在慢性乙型肝炎肝組織中的表達(400×);C:NF-κB蛋白在正常肝組織中的表達(400×);D:NF-κB蛋白在慢性乙型肝炎肝組織中的表達(400×)。

表1 慢性乙型肝炎和正常肝組織中ICAM-1、NF-κB蛋白表達比較[n(%)]

2.2 ICAM-1、NF-κB蛋白表達與炎癥活動度及纖維化程度的關系

慢性乙型肝炎患者肝組織中ICAM-1、NF-κB蛋白表達與肝臟炎癥活動度和纖維化程度呈正相關(r=0.493、0.496,P<0.01;r=0.580、0.519,P<0.01),見表2、3。

表3 ICAM-1、NF-κB蛋白表達與纖維化程度的關系(n)

2.3 ICAM-1和NF-κB蛋白表達的關系

慢性乙型肝炎患者肝組織中ICAM-1與NF-κB蛋白表達呈正相關(r=0.560,P<0.01),見表4。

表4 ICAM-1 與NF-κB蛋白表達的關系(n)

3 討 論

目前病毒性肝炎的損傷機制還未明確[8]。有研究證實,病毒性肝炎患者體內肝內浸潤的主要細胞是T淋巴細胞,而不同種類的T細胞在肝內分布情況有所不同[9]。當肝臟發生炎癥時,肝細胞、膽管上皮細胞和活化的T淋巴細胞可產生大量的ICAM-1,進而參與內皮細胞和肝竇內皮細胞的黏附,完成跨膜遷移、黏附并損傷肝細胞、促進機體內炎癥反應等病理過程,因此慢性乙型肝炎肝硬化患者體內ICAM-1表達會急劇升高[10-11]。王秀芳[12]的研究也表明,ICAM-1表達的高低在一定程度上是對免疫活性及相應的炎癥過程的一種反映。一般情況下ICAM-1在正常肝細胞無相應表達或僅在肝竇內皮細胞、Kupffer細胞有相應低表達,而當機體及肝組織發生炎癥的情況下,ICAM-1的表達明顯升高,且隨著肝細胞炎癥程度的增加,ICAM-1表達升高的也越明顯。

國內外已有研究指出,NF-κB作為NF-κB信號轉導通路的關鍵環節,在病毒性肝炎的發生、發展過程中起重要作用,許多細胞因子對肝臟疾病的影響及許多藥物治療肝病的作用機制都是通過調節NF-κB信號轉導通路而實現[13-15]。NF-κB是一種多源性轉錄因子,參與調節肝臟炎癥損傷、各種細胞的再生、凋亡和增殖[16]。NF-κB的本質是由5個亞基組成的一種蛋白質,靜息時以非活性的NF-κB-IκB復合體的形式存在于細胞質中,當細胞受到內毒素、病毒蛋白等細胞外信號刺激時,復合物又分解成活性的NF-κB進入細胞核調節基因轉錄過程,以此參與體內的炎癥反應、免疫反應等病理生理[17]。人體內調控ICAM-1的因子很多,ICAM-1基因的啟動子含有NF-κB等核轉錄因子結合的位點[18]。有研究證實,蛋白酶抑制劑可以阻斷NF-κB的活性,抑制內皮細胞ICAM-1的表達,從而減輕炎癥引起的肝損傷[19]。而SHI等[20]在研究上調LINC01093以預防酒精性肝炎后發現,在酒精性肝炎小鼠體內LINC01093和凋亡因子Bcl-2表達較正常小鼠降低,而ICAM-1、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和NF-κB p65的表達升高,說明長非編碼RNA參與酒精性肝炎的發生、發展的主要機制就是酒精性肝炎者LINC01093表達降低導致對ICAM-1介導的NF-κB信號轉導通路的抑制作用減低,而上調LINC01093表達則可以預防酒精性肝炎。

本研究發現,ICAM-1、NF-κB陽性表達肝細胞集中分布的現象主要在炎癥壞死區,而在匯管區周圍、肝竇內皮和血管內皮更明顯。本研究還顯示,ICAM-1、NF-κB蛋白表達隨著病情嚴重程度增加而升高,即升高程度與肝臟病變程度呈正比(P<0.05),與文獻報道一致[18-19],說明肝細胞內ICAM-1、NF-κB表達參與慢性肝炎病理損傷過程,提示檢測ICAM-1、NF-κB表達可作為反映肝臟炎癥活動度和纖維化程度的指標。

綜上所述,ICAM-1和NF-κB在慢性乙型肝炎的發病機制中發揮重要作用,其機制尚有待進一步闡明。檢測ICAM-1和NF-κB表達有助于了解慢性乙型肝炎患者的發病機制,進一步評估疾病的嚴重程度,對判斷患者的預后有一定價值。