HLA-DRB1,DQB1多態性聯合CA-199檢驗大腸癌對血清AST,ALT水平變化的影響

朱秀梅,魏 鋒,2*

(1.吉林大學校醫院,吉林 長春130012;2.吉林大學第一醫院,吉林 長春130021)

大腸癌屬于惡性腫瘤,在臨床較為常見,現階段仍未明確其發病原因,主要發病部位在直腸、結腸及盲腸,會嚴重威脅患者生命安全,且呈老齡化的發病趨勢[1]。給予大腸癌早期診斷并實行針對性治療,可保證患者生命安全,有效提升患者生存質量[2]。HLA系統有介于功能的共顯性及多基因座的等位基因,參與和介導機體的外來抗原靶細胞破壞、免疫應答與調控及抗原識別與提呈等過程,還關聯腫瘤消長及疾病易感性[3]。糖類抗原19-9(Carbohydrate antigen 19-9,CA-199)在進行大腸癌診斷及臨床治療方面發揮著重要作用,但單項檢查的陽性率較低,需探析更加完善的檢測方法[4]。天門冬氨酸氨基轉移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基轉移酶(amine aminotransferase,ALT)是給予疾病診斷的重要指標[5]。因此,本次研究選取100例大腸癌患者作為觀察對象,分析HLA-DRB1,DQB1多態性聯合CA-199檢驗對血清AST,ALT水平變化的影響,現匯報如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

回顧性分析我院2020年6月-2022年6月收治的100例大腸癌患者作為研究組,其中男性57例,女性47例,年齡34～69歲,平均(52.35±2.48)歲,體重57～76 kg,平均(66.24±2.14)kg;另選同期收治的100名健康體檢者作為對照組,其中男性58例,女性42例,年齡35-68歲,平均(52.61±2.53)歲,體重57～75 kg,平均(65.83±2.25)kg。運用統計學方法對比兩組患者一般資料,因素存在可比性,但均無統計學意義(P>0.05)。

上述納入對象均符合以下納入標準:(1)所有患者經病理檢查均符合直腸癌診斷標準[6];(2)年齡≥18歲;(3)具備清晰認知及良好理解能力者;(4)患者與家屬自愿參與本次調查研究;(5)此研究經醫院倫理委員會批準。排除標準:(1)合并全身感染性疾病及自身免疫系統疾病者[7];(2)合并心、肝、腎等嚴重臟器病變者;(3)合并嚴重精神疾病者;(4)不具備完整臨床資料者;(5)孕婦或哺乳期;(6)中途因各種原因退出比賽者。

1.2 方法

HLA基因測定:以用聚合酶鏈反應-序列特異性引物(Polymerase chain reaction sequence specific primer,PCR-SSP)方法進行HLA基因檢測。選用試劑:DNA快速提取試劑盒,北京普信瑞生物技術有限公司生產的PCR-SSP反應板,美國Promega公司提供的Taq酶、蛋白酶K。PCR產物檢測試劑:北京海強生物技術公司生產的2%瓊脂糖,溴化乙錠(EB)。選用儀器:PCR擴增儀、ECP3000電泳儀、小型高速離心機及旋渦混合器。

于兩組患者入院空腹24 h內抽取6 mL靜脈血,快速離心取上清液,采用上海斯歐醫療器械有限公司生產的全自動化學發光免疫分析儀及其配套試劑進行CA199水平檢測。

血清AST、ALT水平變化情況:按照說明書使用ACE自動生化儀、RANDOX試劑對兩組患者血清AST、ALT水平進行檢測。

1.3 觀察指標

①選用玻璃奶試劑盒純化PCR-SSP增加產物,選用ABI Prism 310檢測HLA關聯基因。②采用全自動化學發光免疫分析儀及其配套試劑進行CA199水平檢測。③血清AST、ALT水平變化情況:使用ACE自動生化儀、RANDOX試劑對兩組患者血清AST、ALT水平進行檢測。

1.4 統計學處理

2 結果

2.1 兩組HLA-DRB1等位基因分布情況比較

研究組較對照組明顯增高HLA-DRB1*0901等位基因分布頻率(P<0.05),見表1。

表1 兩組患者HLA-DRB1等位基因分布情況比較

2.2 兩組HLA-DQB1等位基因分布情況比較

研究組較對照組明顯降低HLA-DQB1*080X等位基因分布頻率(P<0.05),見表2。

表2 兩組患者HLA-DQB1等位基因分布情況比較

2.3 兩組CA19-9水平比較

研究組較對照組明顯升高CA19-9水平,組間差異明顯(P<0.05),見表3。

表3 兩組患者CA19-9水平比較

2.4 兩組血清AST、ALT水平變化情況比較

研究組較對照組明顯降低血清AST、ALT水平,組間差異明顯(P<0.05),見表4。

表4 兩組患者血清AST、ALT水平變化情況比較

3 討論

大腸癌屬于一類惡性腫瘤,發病率位居第三位,僅比肺癌及胃癌發生率低,早期癥狀不明顯,在確診后已發展至中晚期,情況嚴重下還可能發生轉移,導致最佳治療時機延誤[8-9]。伴隨我國逐年升高大腸癌發病率,需盡早診斷疾病,探尋安全、便捷及可靠的檢測方法,盡早發現疾病,確保患者治愈率[10]。現階段,大腸癌遺傳易感性關聯HLA等位基因的報道較少。相關研究[11]表明,HLA-DRB1、DQB1等位基因未關聯高加索人大腸癌。新陳代謝過度活躍會在體細胞癌變過程中導致改變細胞表明糖蛋白,伴有升高腫瘤細胞表面糖類抗原,CA19-9為常見腫瘤標志物,該腫瘤標志物對單一腫瘤特異性不足,會伴有多種腫瘤標志物異常表達[12-13]。相關研究[14]表明,大腸癌中CA19-9是一種糖蛋白混合物,屬于較高的腫瘤標志物表達,存在著較高的分子量,由正常人胰腺、胃、子宮內膜、結腸、膽管細胞及唾液腺上皮合成,在血清中的存在形式為黏蛋白,可經肝臟代謝低表達于組織中。CA19-9可聯合其他檢測方法,提升臨床診斷敏感性,用于早期診斷[15-16]。血清AST、ALT水平是給予大腸癌疾病診斷的關鍵指標,可將肝臟疾病的具體表現反映出,ALT是于機體組織細胞中存在,特別是居中于腎臟、心肌及腦組織中,AST是于心肌組織中存在,特別位于骨骼肌、腎臟及肝臟等組織中,AST、ALT均屬于非特異性細胞內功能酶,保持高水平狀態時代表機體損傷肝細胞[17-18]。

本研究結果顯示,研究組較對照組增高HLA-DRB1*0901等位基因分布頻率,降低HLA-DQB1*080X等位基因分布頻率(P<0.05),可見,HLA-DRB1*0901正關聯大腸癌,HLA-DQB1*080X負關聯大腸癌。HLA-DRB1、DQB1等位基因分別吻合基因庫相應等位基因第2外顯子堿基順序[19-20]。本研究選用的介入陽性內參照的PCR/SSP,可預防以往無質控時給予HLA等位基因純合子的檢測不準確性,RCR產物不需酶切,可電泳判定結果,保證便捷操作。本研究結果顯示,研究組較對照組明顯升高CA19-9水平,降低血清AST、ALT水平(P<0.05)。可見,大腸癌患者血清CA-199表達高于健康體檢者,血清AST、ALT表達低于健康體檢者,可用于早期篩查直腸癌,且篩查方法便捷,無創,可在大腸癌篩查中獲得廣泛應用。

綜上所述,HLA-DRB1*0901正關聯大腸癌,HLA-DQB1*080X負關聯大腸癌,聯合CA-199檢驗的診斷價值較高,可準確判斷血清AST、ALT水平,具有臨床推廣意義。