超聲彈性成像評分法聯(lián)合Ki67診斷三陰性乳腺癌的臨床研究

吳佳慧,黃雪蘭

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院 物理診斷科,黑龍江 佳木斯150000)

我國女性乳腺癌發(fā)病率占女性惡性腫瘤的17.1%,位居第一位[1],其病理學(xué)特征決定臨床治療方向和預(yù)后[2]。三陰性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)約占所有乳腺癌的15%～20%,較其他亞型更容易發(fā)生轉(zhuǎn)移,預(yù)后更差[3-4]。超聲彈性成像技術(shù)是近年來廣泛使用的用來探測腫塊硬度鑒別良性惡性的新技術(shù),Ki67蛋白是一種半衰期短的非組蛋白核蛋白,目前是檢測腫瘤細胞增殖活性可靠的指標(biāo)之一。本研究通過研究TNBC的超聲彈性成像評分和Ki67的表達,分析超聲彈性評分、Ki67與TNBC臨床特征的相關(guān)性及聯(lián)合應(yīng)用的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年10月至2021年10月住院的150名乳腺癌患者作為研究對象,年齡23～67歲,平均年齡(45.67±5.95)歲。病灶大小7～37 mm,平均病灶大小為(15.23±2.74)mm。病理分型:浸潤性導(dǎo)管癌114例,導(dǎo)管內(nèi)癌15例,浸潤性小葉癌14例,其他7例;組織學(xué)分級:1級22例,2級81例,3級47例;腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移71例,未發(fā)生轉(zhuǎn)移79例;腫瘤直徑:≤2 cm 88例,2～5 cm 60例,>5 cm 2例。納入標(biāo)準(zhǔn):均經(jīng)病理學(xué)金標(biāo)準(zhǔn)確定為乳腺癌;術(shù)前完成超聲彈性成像檢查;一側(cè)乳腺單發(fā)病灶并全身檢查無遠處轉(zhuǎn)移病灶;女性。排除標(biāo)準(zhǔn):合并糖尿病、高血壓等全身系統(tǒng)性疾病或者有肝腎等大器官衰竭者;分子分型不明確者;術(shù)前進行放化療,靶向治療及內(nèi)分泌治療者;合并其他惡性腫瘤;處于妊娠期、哺乳期或者乳腺內(nèi)有假體以及病灶緊鄰部位有瘢痕者;病理標(biāo)本或資料不完整者。

分子分型標(biāo)準(zhǔn):根據(jù)《中國抗癌協(xié)會乳腺癌診治指南與規(guī)范(2021版)》[5]進行分子分型,具體分為4個類型:Luminal A 型[雌激素受體(estrogen receptor,ER)、孕激素受體(progestogen receptor,PR)陽性且PR高表達,人表皮生長因子受體-2(Human Epidermal GrowthFactor Receptor 2,HER2)陰性,Ki-67增殖指數(shù)低]、Luminal B 型(不滿足 Luminal A 型條件的Luminal 樣腫瘤)、ERBB2+型(HER2 陽性,ER、PR 陰性)、Basal-like型(ER、PR、HER2均是陰性)。其中Basal-like型患者65例納入TNBC組,其他類型患者納入非TNBC組。

1.2 研究方法

1.2.1超聲彈性成像 采用美國飛利浦產(chǎn)超聲診斷儀(飛利浦EPIQ 7),線陣探頭,頻率為8～13 MHZ。患者暴露雙側(cè)乳房及腋窩,仰臥位待檢查。先進行常規(guī)超聲檢查,觀察并記錄乳腺腫塊大體位置,形態(tài)、大小、邊緣、微鈣化、毛刺征、腋窩淋巴結(jié)等;再行彩色多普勒檢查,檢測病灶內(nèi)血流情況;按照Adler半定量分級法評估血供情況;行超聲彈性成像檢查,選擇病灶周圍及周圍正常組織為感興趣區(qū)(region of interest,ROI),確定ROI區(qū)后調(diào)整取樣框大小為病灶范圍的兩倍,用探頭垂直于患者體表進行加壓解壓操作,將壓力與壓放頻率的綜合指標(biāo)控制在3～4之間,獲得較穩(wěn)定的彈性圖像采用 5分法進行彈性評分。

血流分級標(biāo)準(zhǔn):病灶內(nèi)無血流信號為0級,1～2處點狀血流為Ⅰ級;可見1條主要血管,長度超過病灶半徑或見幾條小血管為Ⅱ級;可見4條以上血管或血管相互連通,交織成網(wǎng)狀為Ⅲ級。

評分標(biāo)準(zhǔn):患者病灶及周圍呈現(xiàn)均勻的綠色為1分;病灶區(qū)藍綠相間,以綠色為主為2分;病灶區(qū)藍綠相間,以藍色為主為3分;病灶區(qū)完全為藍色為4分;病灶區(qū)完全為藍色,并且病灶區(qū)周圍少許組織也為藍色為5分。病灶表現(xiàn)為紅綠藍三色相間的為0分,一般為囊性病灶。0～3分為良性病灶,4～5分為惡性病灶。

1.2.2Ki67表達檢測方法 采用免疫組織化學(xué)法檢測Ki67表達,檢測試劑盒購自德國羅氏公司。所用的抗體購自美國Santa公司;二氨基聯(lián)苯胺(diaminobenzidine,DAB)顯色液購自上海雅吉生物科技公司。所有乳腺癌組織切除后迅速放于福爾馬林溶液中浸泡,然后用常規(guī)石蠟包埋。石蠟切片脫蠟,室溫孵育蒸餾水沖洗、PBS沖洗。用山羊血清封閉后室溫孵育10 min。加兔抗Ki67抗體、37℃孵育2小時;PBS沖洗后滴加生物素標(biāo)記的山羊抗兔IgG工作液后室溫孵育;再進行PBS沖洗滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈親和素工作液,室溫孵育,PBS再次沖洗。DAB顯色。用自來水反復(fù)沖洗、復(fù)染、脫水、透明、封片。檢測乳腺癌組織中的Ki67表達情況。判斷標(biāo)準(zhǔn):Ki67陽性細胞為細胞核著色為棕黃色或棕褐色,陽性細胞采用半定量測定,陽性率=陽性細胞數(shù)/癌細胞數(shù)×100%。弱陽性(+)為≤14%,陽性(++)為14%～50%,強陽性(+++)為>50%。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS22.0進行數(shù)據(jù)分析,先對計量資料行正態(tài)分布和方差齊性檢驗。本組數(shù)據(jù)均符合正態(tài)分布,以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩組間比較行獨立樣本t檢驗。計數(shù)資料用率(%)表示,組間比較用χ2表示。采用ROC曲線分析各個指標(biāo)對TNBC的診斷學(xué)價值,并篩選出有診斷學(xué)價值者,采用多因素回歸法計算其聯(lián)合預(yù)測概率,分析指標(biāo)聯(lián)用的最佳敏感度和特異度,以P<0.05為有差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者臨床病理學(xué)特征比較

兩組患者年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、腫瘤大小、TNM分期、組織學(xué)分級、病理分類比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表1。

表1 兩組患者臨床病理學(xué)特征比較

2.2 兩組患者常規(guī)超聲及彈性成像的圖像特征

TNBC組邊界清晰、形態(tài)規(guī)則及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者比例大于非TNBC組,微鈣化比例小于非TNBC組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);TNBC組超聲彈性評分高于非TNBC組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。

表2 兩組患者超聲圖像特征比較[例(%)]

2.3 Ki67在兩組患者乳腺癌組織中的表達

TNBC組患者Ki67陰性、弱陽性、陽性、強陽性表達為7例、10例、25例、23例;非TNBC組患者Ki67陰性、弱陽性、陽性、強陽性表達為17例、36例、22例、10例,兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表3。

表3 兩組患者Ki67表達情況表

2.4 超聲彈性成像聯(lián)合Ki67的鑒別診斷效能

將邊界清晰(清晰=1,不清晰=0)、形態(tài)規(guī)則(形態(tài)=1,無形態(tài)=0)、微鈣化(是=1,否=0)、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(是=1,否=0)、超聲彈性評分及Ki67表達分級作為自變量,是否發(fā)生TNBC(是=1,否=0)作為因變量,分析TNBC的因素,結(jié)果顯示腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、超聲彈性評分和Ki67表達分級為發(fā)生TNBC的獨立危險因素(Exp(B)>1.0,P<0.05)。詳見表4。ROC分析結(jié)果顯示,3項獨立危險因素中,對TNBC存在診斷學(xué)價值的主要是超聲彈性評分和Ki67,兩者聯(lián)合診斷TNBC的最佳敏感度和特異度分別為0.835和0.524,見圖1。

圖1 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、超聲彈性評分和Ki67表達診斷TNBC的ROC曲線分析

表4 TNBC的危險因素分析結(jié)果

3 討論

目前彈性成像評分法應(yīng)用于臨床診斷三陰性乳腺癌,具有無創(chuàng)便捷重復(fù)性強的特點[6]。機體內(nèi)組織的彈性和硬度與機體的病理狀態(tài)有關(guān),當(dāng)機體發(fā)生病變時,腫塊的彈性和硬度與正常組織區(qū)別較大,應(yīng)用彈性成像技術(shù)可以對組織的彈性進行分析。外力擠壓機體會發(fā)生變形,引起回聲信號移動幅度發(fā)生變化,通過彩色圖像中顏色的不同變化反映出來。彈性系數(shù)不同,引起的位移幅度不一樣,顏色也不一樣。彈性成像評分法分為五個等級,1～3分多為良性,4～5分多為惡性,有助于臨床更加準(zhǔn)確的診斷患者腫塊性質(zhì)。同時觀察患者彩色圖像血流情況也可以輔助診斷病變程度,病變程度越高,血流越豐富,惡性腫瘤內(nèi)有大量新生的毛細血管會增加血液循環(huán)速度。然而,超聲彈性評分的精確度受操作醫(yī)師個人主觀情況影響較大,依靠一種方式來鑒別TNBC容易出現(xiàn)假陽性或假陰性,因此需要綜合運用其他不受主觀影響的指標(biāo)來配合診斷,以提高準(zhǔn)確度。本研究中,TNBC組邊界清晰、形態(tài)規(guī)則及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者比例大于非TNBC組,彈性評分4-5分的比例也大于非TNBC組,微鈣化比例小于非TNBC組,說明TNBC與非TNBC在超聲檢查時有明顯差異,可作為診斷鑒別的一項依據(jù)。

乳腺癌發(fā)生必定會引起炎性因子改變和基因表達異常,進一步促進癌細胞增殖[7-9]。Ki67是反映癌細胞表達和增殖的惡性程度的指標(biāo),具有較高靈敏度,可準(zhǔn)確反映增殖狀態(tài)[10]。癌細胞增殖使腫瘤組織不斷向周圍組織擴散侵襲,并且會導(dǎo)致腫瘤組織硬度增加[11]。白玲嬌[12]等研究發(fā)現(xiàn)乳腺組織中 Ki67抗原表達與超聲彈性成像評分有關(guān),也側(cè)面證實了可以將兩種診斷方法配合應(yīng)用。Ki67表達越高,腫瘤惡化程度越高,病情越兇險。本研究中,TNBC組陽性表達率為89.23%,大于非TNBC組的70.59%,與陳莉杰[13]闡述的Ki67表達越高生存率越低的研究相符。本研究對TNBC和非TNBC患者的分析結(jié)果顯示,腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、超聲彈性評分和Ki67表達分級為發(fā)生TNBC的獨立危險因素,其中超聲彈性評分和Ki67具有明顯診斷學(xué)價值,兩者診斷TNBC的最佳敏感度和特異度分別為0.776和0.705。

綜上所述,超聲彈性成像評分聯(lián)合Ki67能夠較為準(zhǔn)確的對TNBC進行診斷,可以用其作為評價三陰性乳腺癌的發(fā)生發(fā)展的重要參考指標(biāo)。