鄭州地區表觀健康人群sdLDL-C生物參考區間的建立與驗證*

劉鳳珍,郭鳳霞,毋小玉,魏曉霞,崔發財

河南省人民醫院檢驗科,河南鄭州 450003

冠心病(CHD)是世界范圍內引起人類死亡的主要原因,而動脈粥樣硬化是導致CHD發生的主要危險因素[1]。小而密低密度脂蛋白膽固醇(sdLDL-C)屬于低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)亞型,它與低密度脂蛋白(LDL)受體親和力低且不易被降解代謝,在循環系統中停留時間長且易被氧化,因此更易滲入動脈血管壁堆積并介導泡沫細胞的形成[2],參與動脈粥樣硬化過程。多項研究結果表明,體內高sdLDL-C水平與CHD的發病風險密切相關,且sdLDL-C檢測的敏感性高于傳統的LDL-C檢測[3-4]。sdLDL-C檢測方法眾多,不同試劑廠家提供的參考區間存在差異,參考區間的不適用將會對患者的診斷和治療造成影響。截至目前,國家衛生健康委員會已陸續更新、發布了10個部分的《臨床常用生化檢驗項目參考區間》行業標準,但sdLDL-C參考區間尚未包含在內。為此,本研究擬采用過氧化物酶法檢測鄭州地區表觀健康人群血清sdLDL-C活性值,并初步建立和驗證適合本地區的參考區間。

1.1一般資料 隨機選取2019年6月至2022年6月在本院特需中心體檢健康的785例成年人為研究對象1,用于建立血清sdLDL-C活性值參考區間,其中男性18～<30歲70例,30～<40歲74例,40～<50歲64例,50～<60歲84例,≥60歲77例;女性18～<30歲87例,30～<40歲94例,40～<50歲97例,50～<60歲78例,≥60歲60例。將其按照性別和年齡(18～<30歲、30～<40歲、40～<50歲、50～<60歲和≥60歲)進行分組。另選取2022年8月在本院特需中心體檢健康的100例成年人為研究對象2,用于驗證新建立的血清sdLDL-C活性值參考區間。納入標準:健康人群分布覆蓋鄭州市六區六縣且居住1年以上,血壓正常,體質量指數(BMI)18.5～<23.9 kg/cm2,血常規、尿常規、血脂和血糖均正常,胸部X線片或胸部CT、心電圖及B超檢查均正常。排除標準:有吸煙史、飲酒史、糖尿病史、家族遺傳病史和慢性病史,既往或目前患心腦血管疾病、腎臟疾病、內分泌系統疾病、消化系統疾病、代謝和營養性疾病、風濕性疾病。本研究經本院醫學倫理委員會審批通過[審批號:(2020)倫審第76號]。

1.2儀器與試劑 血清sdLDL-C活性值檢測試劑盒及配套校準品和質控品均購自寧波美康生物科技股份有限公司,檢測儀器為ABBOTT ARCHITECT c16000全自動生化分析儀。

1.3方法

1.3.1標本采集及檢測 采集所有研究對象空腹8 h外周靜脈血3 mL于含分離膠無抗凝劑的真空采血管中,2 h內離心(2 980×g,5 min)并分離血清,保存于-80 ℃超低溫冰箱。樣本檢測前應確保檢測系統處于在控狀態,采用過氧化物酶法檢測健康體檢者血清sdLDL-C活性值。

1.3.2參考區間的建立和驗證 根據美國臨床實驗室標準化協會(NCCLS)C28-A2文件《醫學實驗室參考區間的定義、建立和確認》[5]進行參考區間的建立,收集研究對象1血清sdLDL-C活性值數據,采用狄克遜(Dixon)檢驗法剔除離群值,對有效數據進行正態性檢驗并計算95%CI。根據WS/T 402-2012文件《臨床實驗室檢驗項目參考區間的制定》[6]進行參考區間驗證,檢測研究對象2血清sdLDL-C活性值,以新建參考區間內樣本數與總樣本數比值為比率值(R),R≥0.90判定參考區間驗證合格。

2 結 果

2.1正態性檢驗 K-S法檢驗結果顯示,鄭州地區表觀健康人群血清sdLDL-C活性值服從正態分布(P>0.05),進一步按照性別和年齡進行分組后,各組血清sdLDL-C活性值也均服從正態分布(P>0.05)。

2.2血清sdLDL-C活性值的性別及年齡組間比較 男性表觀健康人群血清sdLDL-C活性值顯著高于女性(P<0.01),提示需按照性別設置參考區間。單因素方差分析結果顯示,女性各年齡組間血清sdLDL-C活性值比較,差異無統計學意義(P>0.05)。男性各年齡組間血清sdLDL-C活性值比較,差異有統計學意義(P<0.05)。男性18～<50歲各年齡組間sdLDL-C活性值比較,差異無統計學意義(P>0.05),但顯著高于≥50歲各年齡組sdLDL-C活性值(P<0.05),提示男性需按照18～<50歲和≥50歲設置參考區間。見表1。

表1 不同年齡的表觀健康成年人血清sdLDL-C活性值比較

2.4血清sdLDL-C活性值參考區間的驗證 100例健康人群中,有98例的血清sdLDL-C活性值在新建立參考區間內,有2例超出參考區間,R=0.98>0.90,參考區間驗證合格。

3 討 論

LDL-C是臨床用于預防CHD高風險人群發病的首選干預指標[7],然而近年研究報道,部分CHD患者發病前LDL-C水平未見異常,另有部分CHD高風險人群通過飲食或藥物治療降低體內LDL-C水平后,CHD事件發生風險仍未降低[8-9]。因此,單純的LDL-C檢測并不能完全反映CHD患者真實的血脂水平。sdLDL-C屬于LDL-C亞型,多項研究顯示sdLDL-C水平與CHD發病風險密切相關[10-12],其作為預測和評估CHD發病風險的指標比LDL-C更敏感,已被美國國家膽固醇教育計劃成人治療組列入新發現的主要心血管疾病危險因素之一。目前,越來越多的實驗室已經開展了sdLDL-C檢測,過氧化物酶法具有操作簡便、檢測時間短、易于大批量樣本檢測等優點,已成為常用的檢測方法,然而基于該方法的各試劑廠家提供的sdLDL-C參考區間存在差異,且廠家建立參考區間時納入的研究對象受地域限制,不具有代表性。為了更好地發揮sdLDL-C的臨床應用價值,建立適合本地區的 sdLDL-C參考區間尤為重要。

本研究結果顯示,血清sdLDL-C活性值在鄭州地區表觀健康人群中呈正態分布,男性整體高于女性,女性不同年齡段間血清sdLDL-C活性值差異無統計學意義(P>0.05),男性18～<50歲的3個年齡組間sdLDL-C活性值差異無統計學意義(P>0.05),但顯著高于≥50歲各年齡組sdLDL-C活性值,提示男性需按照18～<50歲和≥50歲分段設置參考區間。根據數據分析結果,本研究初步建立了鄭州地區表觀健康人群血清sdLDL-C活性值參考區間,并參考WS/T 402-2012文件進行了參考區間的驗證。我國目前已建立sdLDL-C活性值參考區間的地區有成都[13]、蘭州[14]和呼和浩特[15],其研究結果均表明sdLDL-C活性值在人群中的分布具有性別差異,男性整體均值高于女性,這與本研究結果一致。然而sdLDL-C活性值在表觀健康人群中的分布狀態以及在各年齡段間的差異性表現與上述地區存在差異,這可能與地域、氣候環境及生活習慣等因素有關,也可能與納入研究的樣本量有關,后續筆者將進一步擴大樣本量進行驗證,同時本研究結果也有待得到本地區其他醫療機構的驗證。

綜上所述,本研究初步建立和驗證了鄭州地區表觀健康人群血清sdLDL-C活性值參考區間,有助于篩查心腦血管疾病高風險人群,便于臨床采取有效的干預手段來降低心腦血管疾病的發生率和病死率。