鳥氨酸脫羧酶抗酶2 在結直腸癌中的表達及臨床意義

朱 俊，曹 維

（1 如皋博愛醫院消化內科，江蘇 226500；2 南通大學附屬醫院消化內科）

結直腸癌（colorectal cancer，CRC）是目前全球發病率及死亡率較高的惡性腫瘤[1]，國內發病率呈逐年升高趨勢[2]，約20%CRC 患者在發現時已有轉移，預后較差[3]，早發現、早診斷、早治療可顯著提高患者生存率。已證實鳥氨酸脫羧酶抗酶（ornithine decarboxylase antizyme，OAZ）作為腫瘤抑制因子抑制腫瘤的發生及發展進程[4-5]，是腫瘤治療的潛在靶點。OAZ通過多胺過度積累誘導的核糖體移碼機制對多胺的生物合成起負調控作用，減緩腫瘤細胞的增殖和轉化速度[6]。已知的OAZ 基因家族主要包括OAZ1、OAZ2、OAZ3 和機制不明的OAZ4。OAZ1 在體內外均可抑制鳥氨酸脫羧酶（ornithine decarboxylase，ODC）活性[7]，對許多腫瘤具有抑制作用。OAZ2 與OAZ1 作用相似，但有研究表明其僅在體內抑制ODC 活性[8]。OAZ2 通過調節多胺代謝，在胃癌[9]、神經母細胞瘤[10]中起腫瘤抑制作用，在一定程度上可以增強甚至替代OAZ1 的腫瘤抑制作用[11]。本研究選取2018 年1月—2022 年12 月如皋博愛醫院普外科經手術切除病理證實的80 例結直腸癌組織及其配對癌旁組織，采用實時定量逆轉錄聚合酶鏈式反應（RT-qPCR）檢測OAZ2 mRNA 表達，分析OAZ2 表達與結直腸癌臨床和病理參數的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 手術切除的80 例結直腸癌組織及其配對癌旁組織，均經病理證實為腺癌，組織標本置液氮罐凍存待測。80 例患者中男性36 例，女性44例；年齡≤65 歲44 例，＞65 歲36 例；分化程度：高分化46 例，中低分化34 例；浸潤深度：T1～T2 期57例，T3～T4 期23 例；淋巴結轉移30 例。

1.2 OAZ2 mRNA 檢測方法 采用TRIzol 試劑盒（Sigma-Aldrich，美國）從組織中提取總RNA，取每個樣品2 μg RNA，使用FastStart Universal SYBR Green Master（Roche，美國）和LightCycler 480 PCR系統（Roche，美國）進行RT-qPCR。以cDNA 為模板，反應體系：10 μL PCR 混合物，0.5 μL 正向和反向引物，2μL cDNA 模板和反應所需的水，最終反應體積為20 μL。PCR 反應步驟：95 ℃變性30 s，然后94 ℃15 s，56 ℃30 s，72 ℃20 s，共45 個循環。引物采用Primer 5.0 軟件設計，由Invitrogen（上海）公司合成，引物序列見表1。

表1 引物序列

1.3 統計學處理 應用SPSS 22.0 統計學軟件進行數據處理分析。計數資料以頻數和率表示，組間差異性比較采用χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 OAZ2 mRNA 在結直腸癌中的表達 結直腸癌組織中OAZ2 mRNA 表達水平低于配對的癌旁組織，差異有統計學意義（P＜0.05）。見圖1。

圖1 結直腸癌及其癌旁組織OAZ2 mRNA 表達

2.2 OAZ2 mRNA 表達與結直腸癌患者臨床病理特征的關系 按照80 例結直腸癌組織OAZ2 mRNA表達量中位數，分為高表達和低表達各40 例。結果顯示，OAZ2 mRNA 表達與腫瘤分化程度及淋巴結轉移有關，中、低分化結直腸癌組織中OAZ2 mRNA表達低于高分化結直腸癌組織，有淋巴結轉移結直腸癌組織中OAZ2 mRNA 表達低于無淋巴結轉移結直腸癌組織，差異均有統計學意義（P＜0.05），OAZ2 mRNA 表達與患者性別、年齡、腫瘤浸潤深度無關（P＞0.05）。見表2。

表2 OAZ2 mRNA 表達與結直腸癌患者臨床病理參數關系 n（%）

3 討論

多胺在DNA 復制、RNA 轉錄翻譯、血管生成等過程中發揮重要作用。過量多胺堆積會造成細胞異型增生和惡性增殖，導致腫瘤的發生發展。ODC 是多胺生物合成過程中的限速酶，協助外源性鳥氨酸轉化為機體生長代謝所需的多胺（腐胺、精胺和亞精胺），內源性ODC 抑制劑的失效造成ODC 水平異常升高，多胺過度累積，從而導致細胞惡性增殖[12]。ODC 作為促癌基因在乳腺癌、結直腸癌等許多癌癥中高表達。

OAZ 是ODC 內源性抑制酶，通過抑制ODC 的活性而抑制多胺代謝，進而抑制腫瘤細胞增殖、促進腫瘤細胞凋亡，是重要的腫瘤抑制因子[13]。OAZ2 在胃癌和神經母細胞瘤中通過調節多胺代謝抑制腫瘤生長，也可通過抑制轉錄因子NFκB 影響細胞周期[14]。OAZ2 還可能修復因miR-34a 水平降低導致的結直腸癌患者化療藥物耐藥性，推測OAZ2 在結直腸癌的發生發展中可能發揮重要作用。本文研究結果顯示，結直腸癌組織中OAZ2 mRNA 表達水平低于配對的癌旁組織，差異有統計學意義（P＜0.05）。中、低分化及淋巴結轉移結直腸癌組織中OAZ2 mRNA 表達低于高分化、無淋巴結轉移結直腸癌組織，差異均有統計學意義（P＜0.05）。提示OAZ2 可能參與結直腸癌的發生發展，有望作為潛在的腫瘤治療新靶點。