依折麥布阿托伐他汀鈣片體外溶出度測定

［摘 要］ 以高效液相色譜法檢測依折麥布阿托伐他汀鈣片體外溶出度。對比自制片與市售片的體外相似因子f2，自制片與市售片分別通過高效液相色譜法測定不同介質中的溶出曲線，用相似因子f2測評兩片溶出的相似程度。 依折麥布在1.20～17.97 μg/mL范圍內濃度與峰面積的線性關系良好（r=1.0000），阿托伐他汀鈣在4.47 ～66.98 μg/mL范圍內濃度與峰面積的線性關系良好（r=1.0000），依折麥布與阿托伐他汀鈣的平均回收率分別為99.65%和99.63%。自制品與市售品在各溶出介質中的f2因子均符合標準。通過高效液相色譜法創建的依折麥布與阿托伐他汀鈣溶出度測定方法穩定可行。

［關鍵詞］ 依折麥布； 阿托伐他汀鈣； 溶出度； f2相似因子

［中圖分類號］ R94" ［文獻標識碼］ A

依折麥布是全球唯一個抑制膽固醇吸收的化學藥物，其藥理是在體內轉化為依折麥布葡萄糖苷酸，抑制腸道系統中的甾醇載體轉運蛋白，以抑制腸道內吸收食物中的膽固醇，從食物吸收方面降低膽固醇對身體的影響。阿托伐他汀則是作用于肝臟中合成膽固醇的限制酶，限制該酶的生理活性，減少膽固醇的體內合成［1］。聯合依折麥布與阿托伐他汀一起用藥是基于兩種不同的抑制膽固醇的途徑，以達到藥物的協同作用［2］。對比單獨使用依折麥布或阿托伐他汀，聯合用藥能減少兩種藥物的劑量，避免不良反應［3］。

依折麥布阿托伐他汀鈣片（商品名：Liptruzet）由美國Merck Sharp＆Dohme Corp開發，并獲得美國 FDA 批準上市。本文以Liptruzet為參比制劑，并用自制的依折麥布阿托伐他汀鈣片與參比制劑對比溶出曲線相似性，建立了高效液相色譜法測定體外溶出度。

1 儀器與材料

RC12AD 溶出試驗儀，天津天大天發科技有限公司；U3000高效液相色譜儀，賽默飛世爾科技公司；TDP-5旋轉壓片機，長沙中亞制藥設備有限公司；BGW-E高效包衣機，上海天峰制藥設備有限公司。

依折麥布阿托伐他汀鈣片（自制，規格：依折麥布，10 mg；阿托伐他汀鈣，10 mg），依折麥布阿托伐他汀鈣片（美國Merck Sharp＆Do hme Corp公司，規格：依折麥布，10 mg；阿托伐他汀鈣，10 mg），依折麥布原料藥（武漢長聯來福制藥股份有限公司），阿托伐他汀鈣原料藥（湖南迪諾制藥有限公司），乳糖（上海華茂藥業有限公司），MCC（安徽山河藥用輔料股份有限公司），SDS（湖南爾康制藥股份有限公司），PVP K30（德國BASF公司），CCNa（美國FMC公司），HPC（美國Ashland公司），NaHCO3（河北華晨藥業有限公司），硬脂酸鎂（安徽山河藥用輔料股份有限公司），薄膜包衣粉（上?？房蛋录夹g有限公司）。

2 方法與結果

2.1 藥量溶出

2.1.1 溶出藥量測定

采用高效液相色譜法測定［4］。色譜柱：填充劑為C18的高效液相色譜柱。紫外檢測波長為244 nm;系統流速為1.0 mL/min；柱溫為35℃；進樣量為30 μL。流動相：V（乙腈）∶V（四氫呋喃）∶V（0.05 mol/L檸檬酸溶液（氨水調pH至4.0））=27∶20∶53。洗脫方式為等度洗脫。分別取30 μL依折麥布對照品溶液、30 μL阿托伐他汀鈣對照品溶液、30 μL供試品溶液注入色譜系統，記錄峰面積，按外標法分別計算依折麥布的濃度含量和阿托伐他汀鈣在各片中的濃度含量。

2.1.2 標準曲線的制備與方法線性關系的評價

用適量甲醇溶解11 mg依折麥布原料藥后，轉置100 mL容量瓶中并用甲醇定容至刻度線，混合均勻，作為存儲液a；另加適量混合溶劑（V（乙腈）∶V（水）=1∶1）溶解12 mg阿托伐他汀鈣原料藥后，轉置25 mL容量瓶中并用混合溶劑定容至刻度線，混合均勻，作為存儲液b。分別量取0.1、0.2、0.5、0.8、1.0、1.5 mL的存儲液a和存儲液b，各加入到10 mL容量瓶中，加入pH6.8磷酸鹽緩沖液（內含0.2%吐溫80）至刻度線，混合均勻，得到不同濃度的線性溶液。用高效液相色譜法，以外標法測定各線性溶液的含量。以峰面積為縱坐標，質量濃度（μg/mL）為橫坐標，分別繪制依折麥布和阿托伐他汀鈣標準曲線并計算回歸方程。結果表明：依折麥布在1.20～17.97 μg/mL的濃度范圍內，濃度與峰面積呈現優秀的線性關系（線性曲線為y=67272.910x+2567.265，相關系數R2=1.000）；阿托伐他汀鈣在4.47 ～66.98μg/mL的濃度范圍內，濃度與峰面積呈現優秀的線性關系（線性曲線為y=73251.910x+27390.717，相關系數R2=1.000）。

2.1.3 精密度試驗

取本品適量，研磨成細粉，取細粉適量，加入pH6.8磷酸鹽緩沖液（內含0.2%吐溫80）溶解并定容，混合均勻，溶液經過0.45 μm濾膜過濾得到供試品溶液。以上述方法配制6份供試品溶液。用上述同種溶液分別配制依折麥布對照品溶液和阿托伐他汀鈣對照品溶液；取上述溶液各30 μL依次按本品溶出度項下測定法測定，記錄峰面積，按照外標法以峰面積分別計算依折麥布和阿托伐他汀鈣的含量。依折麥布的含量RSD值為0.26%，阿托伐他汀鈣的含量RSD值為0.32%，表明依折麥布與阿托伐他汀鈣的RSD 值均不超過1%，方法的精密度符合要求。

2.1.4 回收率試驗

用適量甲醇溶解11 mg依折麥布原料藥后，轉置100 mL容量瓶中并用甲醇定容至刻度線，混合均勻，作為存儲液a；另加適量混合溶劑（V（乙腈）∶V（水）=1∶1）溶解12 mg阿托伐他汀鈣原料藥后，轉置25 mL容量瓶中，并用混合溶劑定容至刻度線，混合均勻，作為存儲液b；分別同時精密量取存儲液a和存儲液b各0.5、0.8、1.0 mL（處方量的50%、80%、100%）加入10 mL容量瓶中，同時加入空白輔料6 mL并用pH6.8磷酸鹽緩沖液（內含0.2%吐溫80）定容，混合均勻，作為供試品溶液。分別取上述供試品30 μL、依折麥布對照品溶液30 μL和阿托伐他汀鈣對照品溶液30 μL加入到高效液相系統中，記錄峰面積，按外標法計算目標物質的回收率。結果（表1，表2）表明，本方法準確度可行。

2.1.5 穩定性試驗

取依折麥布對照品溶液和阿托伐他汀鈣對照品溶液，放置于37℃條件下，分別于0、3、6、9、12、15、24 h各取樣30 μL加入到高效液相系統中，按測定方法記錄峰面積，算出依折麥布和阿托伐他汀鈣濃度含量。結果表明：本品溶液在24 h內兩種主成分含量幾乎沒有變化，依折麥布含量平均值為99.69%，RSD為0.23%；阿托伐他汀鈣含量平均值為99.85%，RSD為0.29%。該溶液在24 h內室溫條件下穩定。

2.2 制備依折麥布阿托伐他汀鈣片

將依折麥布原料藥與輔料分別過篩，經過預混、制粒、干燥、整粒、加入潤滑劑得到總混顆粒I；將阿托伐他汀鈣原料藥與輔料分別過篩，經過預混、制粒、干燥、整粒、加入潤滑劑得到總混顆粒II；采用雙層旋轉壓片機進行壓片，首先壓制阿托伐他汀鈣層（第一層），再壓制依折麥布層（第二層），得到雙層片。經過包衣得到依折麥布阿托伐他汀鈣雙層片。

2.3 溶出度測定方法

依折麥布阿托伐他汀鈣溶出度的測定參照藥典溶出測量第二法，取本品1片（依折麥布10 mg；阿托伐他汀鈣40 mg），溶出介質分別為磷酸緩沖液（內含0.2%吐溫80，pH值為6.8）、水（內含0.2%吐溫80）、醋酸緩沖液（內含0.2%吐溫80，pH值為4.5）、0.1 mol/L鹽酸溶液（內含0.2%吐溫80，pH值為1.0），以900 mL為總體積，以75 r/min為檢測轉數，分別于5 、10、15、20、30、45、60 min取溶液5 mL，并及時補充溶出介質至總量不變，經0.45 μm濾膜濾過后，取濾液30 μL進行測定。

2.4 依折麥布阿托伐他汀鈣片的溶出曲線

2.4.1 依折麥布在不同溶出介質中的溶出曲線

溶出介質分別為磷酸緩沖液（內含0.2%吐溫80，pH值為6.8）、水（內含0.2%吐溫80）、醋酸緩沖液（內含0.2%吐溫80，pH值為4.5）、0.1 mol/L鹽酸溶液（內含0.2%吐溫80，pH值為1.0），以高效液相法測定各取樣點的溶出度，并用軟件制作出溶出曲線（圖1）。

2.4.2 阿托伐他汀鈣在不同溶出介質中的溶出曲線

溶出介質分別為磷酸緩沖液（內含0.2%吐溫80，pH值為6.8）、水（內含0.2%吐溫80）、醋酸緩沖液（內含0.2%吐溫80，pH值為4.5）、0.1 mol/L鹽酸溶液（內含0.2%吐溫80，pH值為1.0），以高效液相法測定各取樣點的溶出度并用軟件制作出溶出曲線（圖2）。

2.4.3 依折麥布阿托伐他汀鈣片的溶出曲線相似性評價

參照FDA的f2相似因子法評價藥物溶出曲線相似性并參考其他文獻報道［5］。該方法具體計算方法：

f2=50×lg［100/ 1+∑ni=1（Tii-Ri）2n］

其中：n為取樣次數，Ti為自制片在各取樣點的平均溶出度，Ri為參比片在各取樣點的平均溶出度。

不同介質中依折麥布及阿托伐他汀鈣相似因子見表3。

結果表明兩者的f2相似因子均超過50，說明兩者的溶出行為具有高度的相似性。

3 結論

采用高效色譜法測定依折麥布和阿托伐他汀鈣的溶出度，濃度與峰面積線性關系、溶出度的精密度、依折麥布和阿托伐他汀鈣的回收率、方法穩定性。測定結果表明，該高效液相色譜法結果準確，方法可靠；f2的結果表明，對比市售片，自制片的溶出行為均高度相似，兩者的體外釋放基本一致。

［ 參 考 文 獻 ］

［1］ 劉龍華.阿托伐他汀聯合依折麥布治療高脂血癥療效觀察［J］.右江醫學， 2013， 41（04）：534-535.

［2］ 肖廣滎.氟伐他汀與依折麥布聯合調脂臨床療效觀察［J］.中國臨床保健雜志， 2011， 14（01）：81-82.

［3］ 陳怡粵.依折麥布降低血漿低密度脂蛋白膽固醇的療效分析［J］.華夏醫學， 2009， 22（03）：424-426.

［4］ 沈加永.阿托伐他汀鈣片劑制劑及質量控制［D］.鄭州： 河南大學， 2013.

［5］ 魏忠莉.氯吡格雷硫酸鹽阿司匹林復合片體外溶出度測定［J］.中國藥劑學雜志， 2019，17（03）：50-57.

In Vitro Dissolution Determination of Ezetimibe

Atorvastatin Calcium Tablets

RAO Meng， LI Dan， ZHANG Yuxuan， YE Lu， CHEN Xue， YE Fan， GUO Xiaoxia， SU Jiangtao

（School of Bioengineering and Food， Hubei Univ. of Tech.， Wuhan 430068， China）

Abstract： To investigate the in-vitro-dissolution of ezetimibe atorvastatin calcium tablets by high performance liquid chromatography， and compare similarity factor f2 between self-produced tablets and commercially available tablets， the dissolution curves of the self-produced and commercially available tablets were determined by high performance liquid chromatography in various media， and the similarity factor f2 was used to assess the similarity of the dissolution of the two tablets. The linear relationship between ezemibe concentration and peak area was good in the range of 1.20～17.97 μg·ml-1 （r=1.0000）， and the linear relationship between atorvastatin calcium concentration and peak area was good in the range of 4.47 ～66.98μg·ml-1 （r=1.0000）. The mean recoveries of ezetimibe and atorvastatin calcium were 99.65% and 99.63%. The f2 factors of two products in each dissolution medium met the criteria." The method for the determination of ezetimibe and atorvastatin calcium solubility created by high performance liquid chromatography is stable and feasible.

Keywords： ezetimibe; atorvastatin calcium; solubility; f2 similarity factor

［責任編校： 張 眾］

［收稿日期］ 2023-01-10

［基金項目］ 湖北工業大學“111”引智基地開放基金（XBTK-2021009）

［第一作者］ 饒 萌（1987）， 男，湖北武漢人，湖北工業大學碩士研究生， 研究方向為微生物與生化藥學。

［通信作者］ 蘇江濤（1978）， 男，湖北宜昌人，湖北工業大學教授， 研究方向為藥品開發與評價。