復(fù)方黃芪通絡(luò)合劑治療糖尿病周圍神經(jīng)炎機(jī)制

［摘 要］ 為探討復(fù)方黃芪通絡(luò)合劑治療糖尿病周圍神經(jīng)炎（DPN）的關(guān)鍵有效成分和藥理作用機(jī)制，通過超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）進(jìn)行成分分析，采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對其治療糖尿病周圍神經(jīng)炎的主要信號通路進(jìn)行預(yù)測。實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證選用60只昆明小鼠進(jìn)行DPN造模，對小鼠的一般情況、血糖值、熱敏值進(jìn)行記錄，對小鼠坐骨神經(jīng)組織進(jìn)行HE染色，對PI3K、P-AKT、AKT進(jìn)行蛋白水平表達(dá)的檢測。復(fù)方黃芪通絡(luò)合劑經(jīng)UPLC-MS/MS分析，共鑒定出141個化合物。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析顯示，70個化合物為有效成分，并推測涉及的生物學(xué)過程主要為通過PI3K/AKT信號通路所引起的代謝調(diào)節(jié)；動物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果顯示，復(fù)方黃芪通絡(luò)合劑雖對小鼠坐骨神經(jīng)組織中的PI3K的表達(dá)水平無明顯作用，但給藥組中AKT的磷酸化水平顯著下降（p＜0.05）。復(fù)方黃芪通絡(luò)合劑治療糖尿病周圍神經(jīng)炎具有多組分、多靶點(diǎn)、多途徑的作用機(jī)制，為后期該方的深入開發(fā)應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

［關(guān)鍵詞］ 復(fù)方黃芪通絡(luò)合劑； 糖尿病周圍神經(jīng)炎； 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)

［中圖分類號］ R285" ［文獻(xiàn)標(biāo)識碼］ A

糖尿病周圍神經(jīng)病變（diabetic peripheral neuropathy， DPN）屬于糖尿病的常見慢性并發(fā)癥之一，大約60%的糖尿病隨著病程的延長，最終都會發(fā)展為DPN［1］。DPN的發(fā)生機(jī)制主要集中在以下兩個方面：1）氧化應(yīng)激及代謝紊亂，高血糖引起的氧化應(yīng)激在DPN的發(fā)生和發(fā)展中起著極其重要的作用，高血糖可引起細(xì)胞內(nèi)線粒體活性氧（reactive oxygen species， ROS）生成增加，導(dǎo)致DNA損傷，激活聚ADP核糖多聚酶2（Poly（ADP-ribose） polymerase2，PARP2）又在一定程度上抑制了糖酵解中關(guān)鍵酶3-磷酸甘油醛脫氫酶的活性，從而使該酶的上游代謝物積聚，糖酵解轉(zhuǎn)向糖代謝支路，激活其下游4條經(jīng)典途徑（多元醇通路、糖基化終產(chǎn)物（AGE）通路、蛋白激酶通路、己糖胺通路），引起細(xì)胞功能紊亂，導(dǎo)致了DPN的發(fā)生［2］。2）血管微循環(huán)障礙，在糖尿病早期，神經(jīng)纖維的毛細(xì)血管已經(jīng)存在損傷，血管壁增厚，微循環(huán)產(chǎn)生障礙，形成DPN［3］。

DPN是一種非常普遍的致殘性疾病，其治療費(fèi)用高昂［4］。中藥復(fù)方治療DPN注重整體調(diào)節(jié)，可有效延緩慢性并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展，不適癥狀改善明顯。中藥以湯劑為主，代表性中藥湯劑有補(bǔ)陽還五湯、當(dāng)歸四逆湯、黃芪桂枝五物湯等，輔以中藥熏洗、足浴、外敷、針灸等特色外治法［5］。本文復(fù)方黃芪通絡(luò)合劑源自醫(yī)院制劑雙黃通絡(luò)飲［6］，由黃芪、片姜黃、白術(shù)、牛膝、當(dāng)歸、川芎等11種中藥組成，在臨床上治療DPN具有良好的效果，但復(fù)方黃芪通絡(luò)合劑主要活性成分和作用機(jī)制尚不清楚。

本研究基于液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（UPLC-MS/MS）對復(fù)方黃芪通絡(luò)合劑的化學(xué)成分進(jìn)行分析，液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)可快速鑒定中藥復(fù)雜體系中的化學(xué)成分［7］。本研究結(jié)合高分辨質(zhì)譜獲取質(zhì)譜信息，通過與自建庫中成分比對，對鑒定的化學(xué)成分進(jìn)行藥材歸屬；根據(jù)成分信息，通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析其治療DPN的關(guān)鍵有效成分、作用靶點(diǎn)和主要代謝通路；通過動物實(shí)驗(yàn)建立DPN小鼠模型，對不同組之間血糖值、熱敏值進(jìn)行比較，對組織進(jìn)行HE染色觀察病理結(jié)構(gòu)，了解其治療DPN效果，并對PI3K、p-AKT/AKT進(jìn)行蛋白水平表達(dá)的檢測，對其關(guān)鍵靶點(diǎn)和代謝通路進(jìn)行驗(yàn)證。

1 材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

SPF級6～7周齡昆明小鼠60只，體質(zhì)量（30±5）g，購買于華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，許可證號SYXK（鄂）2020-0084。實(shí)驗(yàn)小鼠的飼養(yǎng)過程和其他實(shí)驗(yàn)操作過程均符合實(shí)驗(yàn)動物倫理學(xué)要求以及中華人民共和國《實(shí)驗(yàn)動物管理?xiàng)l例》。小鼠飼養(yǎng)條件：恒溫22±3℃，恒濕（55±5）%，專用飼料、滅菌用水、光照12 h晝夜循環(huán)。各組小鼠經(jīng)1周適應(yīng)性飼養(yǎng)后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 藥材及主要試劑

黃芪（批號210401）、片姜黃（批號201201）、當(dāng)歸（批號201101）、白術(shù)（批號201101）、川芎（批號210401）、雞血藤（批號201001）、赤芍（批號210401）、知母（批號210501）、桑枝（批號210301）、牛膝（批號201101）、桃仁（批號200601），飲片來源：購自湖北康強(qiáng)中藥飲片有限公司，均符合中國藥典2020版中藥飲片各項(xiàng)檢查要求?；A(chǔ)飼料購自沈陽茂華生物科技有限公司，自制高脂飼料（配比：基礎(chǔ)飼料60%，蔗糖13%，豬油24%，麥芽糊精3%）；鏈脲佐霉素（STZ）（批號S6089，上海麥克林生化科技有限公司）；抗體AKT（美國Proteintech抗體公司）；抗體P-AKT（美國Proteintech抗體公司）；抗體PI3K（美國Affinity抗體公司）；抗體beta-Actin（美國Affinity抗體公司）；抗體Goat Anti-Mouse IgG（H+L） HRP（美國Affinity抗體公司）；抗體Goat Anti-Rabbit IgG（H+L） HRP（美國Affinity抗體公司）。

1.3 主要儀器

超高效液相色譜儀（日本SHIMADZU公司，Nexera X2）；質(zhì)譜儀（美國Applied Biosystems公司，6500 QTRAP）；冷凍干燥機(jī)（寧波新芝有限公司，Scientz-100F）；超聲波清洗器（深圳潔康科技有限公司，PS-80A）；高速離心機(jī)（湖南平凡科技有限公司，TG16-Ⅱ型）；研磨儀（德國Retsch，MM400混合型）；血糖儀（杭州世佳電子有限公司，BG-101）；熱板儀（上海軟隆科技發(fā)展有限公司，BW-YLS-6B）；脫水機(jī)（武漢俊杰電子有限公司，JT-12J）；包埋機(jī)（武漢俊杰電子有限公司，JB-L5）；病理切片機(jī)（上海徠卡儀器有限公司，LEiCARM2016）；全自動數(shù)字切片掃描儀（匈牙利3DHISTECH公司，Pannoramic 250Flash Ⅱ）；電泳轉(zhuǎn)印系統(tǒng)（武漢Servicebio生物科技有限公司，PW-600）；高靈敏化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（SYNGENE，DRXV2/2324）

2 方法

2.1 基于UPLC-MS/MS的復(fù)方黃芪通絡(luò)合劑的化學(xué)成分分析

2.1.1 樣品處理

稱取黃芪30 g、赤芍15 g、片姜黃20 g、白術(shù)20 g、牛膝15 g、當(dāng)歸15 g、桃仁10 g、川芎15 g，雞血藤15 g、桑枝10 g、知母10 g，以8倍水，煎煮3次，每次2 h，合并3次煎煮液，進(jìn)行濃縮，濃縮至400 mL。取凍干粉1.0 g，利用研磨儀研磨（30 Hz，1.5 min）至粉末狀，溶解于1.2 mL 70 % 甲醇中，在4 ℃下13 000 r/min離心10 min，取上清液，經(jīng)0.22μm有機(jī)濾膜過濾，取濾液上機(jī)分析。

2.1.2 色譜質(zhì)譜采集條件及數(shù)據(jù)分析

色譜柱：Agilent SB-C18 1.8 μm，2.1 mm×100 mm。

流動相：A）0.1%甲酸水溶液；B）0.1%甲酸乙腈溶液。

柱溫，40°C； 進(jìn)樣量，2 μL。液相流動相條件：洗脫梯度，0.00 min B相比例為5%，9 min內(nèi)B相比例線性增加到95%，維持1 min；10～11.10 min，B相比例降為5%，并以B相5%平衡至14 min，流速為0.35 mL/min。 質(zhì)譜條件（ESI源參數(shù)）設(shè)定如下：溫度，550℃；噴霧電壓（正離子模式），5500 V；噴霧電壓（負(fù)離子模式），-4500 V；離子源氣體I（GSI），0.35 MPa；輔助氣體Ⅱ（GSⅡ），0.41 MPa；氣簾氣（CUR），0.17 MPa。用10μmol/LPPG溶液行儀器調(diào)諧，100 μmol/LPPG溶液進(jìn)行質(zhì)量校準(zhǔn)；掃描使用MRM模式，將碰撞氣體（氮?dú)猓┰O(shè)置為中等。數(shù)據(jù)采集和分析采用Analyst 1.6.3軟件處理質(zhì)譜數(shù)據(jù)。

2.2 基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的生物信息學(xué)分析

2.2.1 化合物靶點(diǎn)及疾病收集

根據(jù)篩選出的化合物信息，在化學(xué)數(shù)據(jù)庫Pubchem（https：∥pubchem.ncbi.nlm.nih. gov/）中查找化合物的SMILES符號，在SwissTargetPrediction（http：∥www. swisstargetprediction.ch/）平臺中收集化合物靶點(diǎn)。分別在GeneCards（https：∥www.genecards.org）、OMIM （https：∥mirror.omim.org）、PharmGkb （https：∥www.pharmgkb.org）、TTD（https：∥ttd.org）、DrugBank（https：∥go.drugbank.com）數(shù)據(jù)庫中，以“Diabetic Peripheral Neuropathy”為關(guān)鍵詞，搜索DPN相關(guān)的靶點(diǎn)，通過String數(shù)據(jù)庫（https：∥cn.string-db.org）及Cytosape軟件（插件：CytoNCA）對靶點(diǎn)進(jìn)行集中性分析和評估，以各項(xiàng)值中位數(shù)進(jìn)行靶點(diǎn)篩選。

2.2.2 GO和KEGG富集分析

以篩選出的復(fù)方黃芪通絡(luò)合劑有效成分的靶點(diǎn)與疾病的靶點(diǎn)進(jìn)行交集作圖，對篩選出來的交集靶點(diǎn)進(jìn)行GO（gene ontology）和KEGG（kyoto encyclopedia of genes and genomes）富集分析。其中過濾條件設(shè)置為p-value≤0.05，p-adjust≤0.05，q-value≤0.05，將GO結(jié)果的前10條與KEGG結(jié)果的前30條進(jìn)行展示。

2.3 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

2.3.1 動物分組、造模及給藥

將60只造模小鼠按體重隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行分組，分為正常組、陽性對照組、模型組、和高中低藥物組，每組10只。各組給予常規(guī)基礎(chǔ)飼料，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。造模方法根據(jù)參考文獻(xiàn)［9］，除正常組小鼠外，其余小鼠用STZ進(jìn)行造模，注射前12 h禁食，小鼠按100 mg/kg的STZ進(jìn)行腹腔注射。第一次注射后保持禁食6 h后恢復(fù)喂食，連續(xù)注射2 d。注射完成3 d后測隨機(jī)血糖，選擇隨機(jī)血糖≥16.7 mmol/L的小鼠，低于16.7 mmol/L的小鼠補(bǔ)注一次STZ。正常組繼續(xù)給予常規(guī)基礎(chǔ)飼料，模型組改喂高脂飼料，喂養(yǎng)至熱敏值出現(xiàn)顯著性差異，視為造模成功。

造模成功后，根據(jù)《中藥藥理研究方法學(xué)》按照臨床每kg體重的用量換算：

dB=dA×KBKA

其中：KA、KB為人與小鼠體型折算系數(shù)，KB/KA=1/9；dA是人的千克體重劑量，以70 kg 體重?fù)Q算，每日凍干粉劑量為50 g，折算為0.714 g/（kg·d）；dB是小鼠相當(dāng)于成人劑量的等效劑量，計(jì)算得6.42 g/（kg·d）。設(shè)置中劑量給藥組為成人劑量的等效劑量，高劑量給藥組為等效劑量的2倍，低劑量給藥組為等效劑量的0.5倍。即低劑量組給藥劑量為3.21g/（kg·d），中劑量組給藥劑量為6.42 g/（kg·d），高劑量組給藥劑量為12.78g/（kg·d），陽性組為二甲雙胍0.109 g/（kg·d）加硫辛酸0.1 g/（kg·d），連續(xù)給藥6周。

2.3.2 一般情況及熱敏反應(yīng)時間檢測

每周記錄各組小鼠的血糖值、熱痛覺敏感值。血糖值用血糖儀測定，熱敏值用熱板法和甩尾值測定。熱板法測定時先校準(zhǔn)熱板（50±5）℃，使正常小鼠在10 s內(nèi)發(fā)生縮足反射；然后，將糖尿病小鼠放至熱板，記錄其暴露于熱板產(chǎn)生舔足、縮足等反射的時間。甩尾法測定時，將約2 cm的鼠尾浸泡在（52±0.2）℃的水浴中，記錄小鼠晃動或移開尾巴的時間。

2.3.3 標(biāo)本取材及HE染色

各組小鼠于取材前禁食12 h后處死。取左右兩側(cè)坐骨神經(jīng)置于-80℃冰箱保存，部分組織放入自動脫水機(jī)脫水進(jìn)行石蠟包埋，將蠟塊置于-20℃的凍臺上，待其冷卻后，做橫切處理。切片先后用蘇木素染色和伊紅染液中染色，自然風(fēng)干后，中性樹膠封片，用全自動數(shù)字切片掃描儀掃描切片。

2.3.4 Western Blot檢測PI3K、p-AKT/AKT相對表達(dá)量

先將神經(jīng)組織剪切成小塊，組織加入0.5 mL裂解液，勻漿。使用BCA試劑盒測定總蛋白濃度。蛋白質(zhì)經(jīng)凝膠電泳分離，轉(zhuǎn)入PVDF膜。用5%脫脂牛奶封閉1 h，繼而與一抗PI3K、AKT、p-AKT和內(nèi)參β-actin在4℃孵育過夜。然后，在TBST溶液中洗滌膜，與相對應(yīng)的二抗在37℃孵育1 h，在TSBT溶液中洗滌。使用ECL試劑觀察膜上的免疫反應(yīng)區(qū)域，運(yùn)用成像系統(tǒng)和ImageJ軟件進(jìn)行分析。

3 結(jié)果與分析

3.1 UPLC-MS/MS成分分析

結(jié)合特有的化合物數(shù)據(jù)庫，對本復(fù)方的化合物進(jìn)行質(zhì)譜定性定量分析。通過篩選出每個物質(zhì)的特征離子及其信號強(qiáng)度（CPS），共檢測出141種化合物，并對其歸屬進(jìn)行了分類。其中：酚酸類44種，黃酮類31種，脂質(zhì)6種，甾體12種，有機(jī)酸5種，萜類17種，生物堿4種，鞣質(zhì)1種，醌類1種，木脂素和香豆素2種，其他類23種，其化合物總離子圖如圖1所示。

3.2 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的生物信息學(xué)分析結(jié)果

實(shí)驗(yàn)共收集到藥物靶點(diǎn)875個，疾病靶點(diǎn)5217個，交集靶點(diǎn)數(shù)為528個，復(fù)方黃芪通絡(luò)合劑相對應(yīng)的有效成分為70種。藥物與DPN的靶點(diǎn)數(shù)目交集如圖2所示。圖3結(jié)果顯示，較顯著的GO-BP過程是氧化應(yīng)激反應(yīng)過程，表明藥物對細(xì)胞內(nèi)活性氧的產(chǎn)生有一定的作用。在KEGG的分析結(jié)果（圖4）中，前20條通路大多數(shù)與人類疾病相關(guān)，其中與DPN疾病符合的為內(nèi)分泌和代謝性疾病中的AGEs-RAGES信號通路，表明糖基化途徑在復(fù)方黃芪通絡(luò)合劑治療DPN中發(fā)揮了重要作用。此外，信號通路還涉及一些信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，包括PI3K-AKT信號通路、TNF信號通路等。本文以AGEs-RAGES信號通路推測了黃芪通絡(luò)合劑治療DPN的可能機(jī)制，其中PI3K/AKT信號通路為其下游通路，后續(xù)實(shí)驗(yàn)對PI3K/AKT信號通路進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

3.3 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.3.1 小鼠一般情況及血糖值觀察

正常組小鼠在實(shí)驗(yàn)過程中活動狀態(tài)和精神狀態(tài)良好。具有DPN特征的模型組小鼠在實(shí)驗(yàn)過程毛色偏黃，出現(xiàn)多飲、多食、多尿、身體同側(cè)麻木等癥狀。與正常組相比，模型組血糖值升高，差異極顯著（p＜0.01）；高、中、低劑量組血糖隨著療程的增加呈不斷下降趨勢，在第6周治療結(jié)束時，均低于模型組，差異極顯著（p＜0.01）。

圖5a為各組小鼠0～6周血糖變化趨勢，圖5b為第6周末各組小鼠血糖值。與正常組比較，*plt;0.05， **plt;0.01；與模型組比較，#plt;0.05， ##plt;0.01。

3.3.2 小鼠熱敏值變化

給藥前與正常組比較，模型組和給藥組小鼠的熱板反應(yīng)時間明顯延長（p＜0.05）；給藥后與模型組比較，復(fù)方黃芪通絡(luò)合劑藥物組的熱板反應(yīng)時間縮短，結(jié)果如表1所示；模型組和給藥組小鼠的甩尾時間明顯延長（p＜0.01）。給藥后，與模型組相比較，高、中、低劑量給藥組甩尾時間均低于模型組（p＜0.01）。

3.3.3 病理組織切片結(jié)果

從小鼠坐骨神經(jīng)橫切圖來看，正常組小鼠神經(jīng)纖維排列整齊，結(jié)構(gòu)緊密，未見萎縮及明顯髓鞘溶解。藍(lán)色箭頭所標(biāo)為髓鞘位置。模型組神經(jīng)纖維明顯萎縮（紅色箭頭），雪旺細(xì)胞數(shù)量增多（黃色箭頭），神經(jīng)纖維密度下降，染色不均勻；給藥組較正常組神經(jīng)纖維密度稍減小，可見萎縮（紅色箭頭），細(xì)胞腫脹伴空泡化變性（黑色箭頭），髓鞘部分溶解丟失，但較模型組情況有所改善。

3.3.4 Western t blot 檢測PI3K、P-Akt/Akt相對表達(dá)量

檢測結(jié)果顯示，正常組、給藥組、模型組之間的PI3K蛋白表達(dá)量無顯著差異。與正常組比較，模型組P-AKT/AKT相對表達(dá)量升高，差異顯著（p＜0.05）。與模型組比較，復(fù)方黃芪通絡(luò)合劑各給藥組的P-AKT/AKT相對表達(dá)量均顯著下降（plt;0.05），但高劑量組與中劑量組之間無差異。圖8提示，給藥組對AKT磷酸化水平產(chǎn)生顯著調(diào)節(jié)作用。

4 結(jié)束語

復(fù)方黃芪通絡(luò)合劑為治療DPN的臨床驗(yàn)方，在治療DPN上取得了滿意的療效，且臨床安全性較好，但其有效成分和作用機(jī)制尚不清楚，阻礙了該方的進(jìn)一步開發(fā)利用。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是在系統(tǒng)生物學(xué)和多藥理學(xué)的基礎(chǔ)上提出的一種新的藥物設(shè)計(jì)和開發(fā)策略，且其“多組分、多靶點(diǎn)、多途徑”的模式與中醫(yī)學(xué)的“整體觀”相吻合［9-11］。傳統(tǒng)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析方法會出現(xiàn)高度同質(zhì)化的結(jié)果，實(shí)驗(yàn)選擇基于UPLC-MS/MS分析方法鑒定藥物復(fù)方中的成分，以檢測到的成分作為物質(zhì)研究基礎(chǔ)，加強(qiáng)了有效成分研究的合理性。從KEGG信號通路富集分析過程來看，復(fù)方黃芪通絡(luò)合劑主要通過AGE-RAGE信號途徑來改善DPN。長期高血糖會增加晚期糖基化終產(chǎn)物（AGEs）產(chǎn)生，AGEs與特異性受體RAGE結(jié)合，會改變基因表達(dá)和細(xì)胞內(nèi)信號，并增強(qiáng)促炎分子和自由基的釋放。AGEs形成后，就會激活許多其他重要的途徑（包括PI3k-AKT信號通路），涉及血管生成、血管形成、炎癥和各種過程，會誘導(dǎo)體細(xì)胞損傷，并最終導(dǎo)致各種組織類型和器官中的組織纖維化［12-14］。本實(shí)驗(yàn)側(cè)重于研究PI3k-AKT信號通路，通過高脂飲食聯(lián)合STZ誘導(dǎo)方法DPN模型，高脂飲食可導(dǎo)致游離脂肪酸在β細(xì)胞內(nèi)堆積，進(jìn)而造成神經(jīng)酰胺增加，誘導(dǎo)胰島β細(xì)胞凋亡，更好地形成DPN模型。結(jié)果提示復(fù)方黃芪通絡(luò)合劑組小鼠坐骨神經(jīng)組織中的AKT的磷酸化水平下降，表明復(fù)方黃芪通絡(luò)合劑可能具有抑制PI3K/AKT信號通路的作用。

本文研究表明，AGEs- RAGE信號通路是在復(fù)方黃芪通絡(luò)合劑治療DPN的過程中非常重要的一環(huán)，但是其下游機(jī)制十分復(fù)雜，仍未完全闡明。希望在今后的研究中，隨著對體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的完善及深入了解AGEs-RAGE信號通路的作用機(jī)制，能夠?qū)⒈局兴帍?fù)方治療DPN的機(jī)制闡述得更加清晰，使中藥能夠更好地造福于廣大患者。

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Discussion on the Mechanism of Compound Astragalus Tongluo

Decoction in the Treatment of Diabetic Peripheral Neuritis

TONG Yaqin， XIAO Wenhui， MU Yanzhu， ZHANG Yingqing

（School of Biological Engineering and Food， Hubei Univ. of Tech.， Wuhan 430068， China）

Abstract： This study aims to investigate the key active components and pharmacological mechanisms of the Compound Astragalus Tongluo decoction in treating diabetic peripheral neuritis. The ingredients of the Compound Astragalus Tongluo decoction were analyzed by the ultra-performance liquid chromatography-high-resolution mass spectrometry （UPLC-MS/MS）， its main signaling pathways for the treatment of diabetic peripheral neuritis were predicted by network pharmacology. In experimental verification， 60 KM mice were selected for DPN modeling， the general situation， blood glucose value， and heat sensitivity value were recorded， mouse sciatic nerve tissues were HE stained， and protein level expression of PI3K， P-AKT and AKT were detected. There were 141 compounds identified by UPLC-MS/MS analysis， which were divided into 11 categories， and most of them were phenolic acids; Network pharmacology research showed that 70 compounds were active components， and the biological processes involving were mainly metabolic regulated by PI3K/AKT signaling pathway. Animal verification experiments showed that there was no significant effect on the expression level of PI3K in the mouse sciatic nerve tissue; however，" the phosphorylation level of AKT was significantly decreased in the administered group （plt;0.05）. The Compound Astragalus Tongluo decoction for the treatment of diabetic peripheral neuritis via multi-components， multi-targets， and multi-pathways， and laid a foundation for the deeply development and application of this prescription.

Keywords： Compound Astragalus Tongluo decoction; diabetic peripheral neuritis; network pharmacology

［責(zé)任編校： 張 眾］

［收稿日期］ 2022-11-03

［第一作者］ 童雅琴（1998-），" 女，" 湖北宜昌人， 湖北工業(yè)大學(xué)碩士研究生， 研究方向?yàn)樗巹W(xué)。

［通信作者］ 張迎慶（1969-），" 女，" 湖北蘄春人， 理學(xué)博士，湖北工業(yè)大學(xué)教授， 研究方向?yàn)樘烊凰幬铩?/p>

［文章編號］ 1003-4684（2024）05-0065-06