精液標本液化后不同時間檢測對精液參數的影響觀察

【摘要】目的 探討精液標本液化后不同時間檢測對精液參數的影響，為臨床提供參考。方法 選取2021年1月至12月于瓊海市中醫院行精液檢查的1 000例男性作為研究對象進行回顧性分析，采集所有入組對象精液標本后分別于液化后15、30、60、90 min時對精子級別、精子密度（PMSC）、精子運動參數[鞭打頻率（BCF）、側擺幅度（ALH）、擺動性（WOB）、軌跡速度（VCL）、前向性（STR）、平均移動角度（MAD）、直線性（LIN）、直線運動速度（VSL）及平均路徑速度（VAP）]、精子活力、精子活動率、精子濃度及圓細胞濃度進行分析。結果 15 min時a、b級（Grade a、Grade b）精子占比顯著高于30 min，a、b、c級、a+b級、a+b+c級（Grade a、Grade b、Grade c、Grade a+Grade b、Grade a+Grade b+Grade c）精子占比顯著高于60、90 min時；30 min時Grade c精子占比顯著高于60 min時，Grade a、Grade c、Grade a+Grade b、Grade a+Grade b+Grade c精子占比顯著高于90 min時；60 min時Grade c精子占比顯著高于90 min時（Plt;0.05）。各時間點PMSC、BCF、MAD及LIN比較，差異無統計學意義（Pgt;0.05），15 min時STR顯著高于其他時間點，15 min時WOB、VCL、VSL及VAP顯著高于90 min，30 min時ALH、WOB、VCL顯著高于90 min（Plt;0.05）。15 min時精子活力、精子活動率顯著高于其他時間點，30 min時精子活力、精子活動率顯著高于60、90 min時，60 min時精子活力、精子活動率顯著高于90 min時（Plt;0.05）；各時間點精子濃度、圓細胞濃度比較，差異無統計學意義（Pgt;0.05）。結論 精液標本液化后應于15 min或30 min內進行檢測，此時間段檢測對檢測結果影響較小，若在精液標本液化后60 min后進行檢測，其檢測結果差異較大。

【關鍵詞】精液標本；液化；檢測時間；精液參數

【中圖分類號】R697 【文獻標識碼】A 【文章編號】2096-2665.2023.11.0125.03

DOI：10.3969/j.issn.2096-2665.2023.11.042

精液指雄性動物或男性人類在射精時，從尿道中射排出體外的液體，而精液檢查是計劃生育研究和不孕癥診治過程中的一項重要檢查，通過精液檢查，可以了解男性的生育能力[1-2]。正常情況下，檢查生殖能力的主要檢查指標有精子的活動率及活動力，精子的活動率采用百分數表示，而活動力則是指尾部有運動的精子[3]。目前，可通過對精液參數檢測客觀了解精子的活動率、活動力及密度等參數，但由于標本完整性、黏稠度及精液是否完全液化等因素導致檢查結果具有較大的差異性[4]。相關研究顯示，精液標本通常在液化后立即或射精后1 h內進行檢測[5-6]。目前對于精液標本液化后放置不同時間對精液參數的影響報道較少。本研究分別在精液留取后不同時間段對精液標本進行檢測分析，比較不同時間點精液參數的差異，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2021年1月至12月于瓊海市中醫院行精液檢查的1 000例男性的臨床資料，年齡20～45歲，平均年齡（31.72±4.86）歲。本研究經瓊海市中醫院醫學倫理委員會批準。納入標準：①年齡≥20歲；②體檢健康者；③臨床資料完整。排除標準：①檢查前禁欲gt;7 d；②精液標本未在15 min內送檢；③患有無精子癥者。

1.2 檢測方法 所有入組對象均按照相關實驗規定進行檢測[7]。檢測前禁欲2～7 d，采用體外射精或手淫法留取精液并置于干燥無菌的容器中，送檢時間應控制在30 min內。將裝有精液的容器置于37 ℃的孵箱，待液化完成后，分別留取液化15、30、60、90 min時的標本。將不同時段的標本充分搖勻后，取5 μL精液于紅寶石精子計數板上，然后采用計算機輔助的精液分析系統（北京偉力新世紀科技發展有限公司，型號：WLJY-9000）對精子級別、精子密度（PMSC）、精子運動參數[鞭打頻率（BCF）、側擺幅度（ALH）、擺動性（WOB）、軌跡速度（VCL）、前向性（STR）、平均移動角度（MAD）、直線性（LIN）、直線運動速度（VSL）及平均路徑速度（VAP）]、精子活力、精子活動率、精子濃度、圓細胞濃度進行分析，每次分析取6個視野，精子總數gt;200條，獲取結果后取平均值。

1.3 觀察指標 ①比較不同時間點各級精子百分率。分級[8]：a級（Grade a）指快速向前運動的精子；b級（Grade b）指向前運動，但運動較慢的精子；c級（Grade c）指雖然在運動，但不是朝著前方運動，而是隨機向各個方向運動的精子；d級（Grade d）指不運動的精子。②比較不同時間點PMSC及精子運動參數。③比較不同時間點精子活力、精子活動率、精子濃度及圓細胞濃度。

1.4 統計學分析 采用SPSS 22.0統計學軟件處理數據。計量資料以（x）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗；多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗。以Plt;0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同時間點各級精子百分率比較 15 min時Grade a、Grade b精子占比顯著高于30 min，Grade a、Grade b、Grade c、Grade a+Grade b、Grade a+Grade b+Grade c精子占比顯著高于60、90 min時；30 min時Grade c精子占比顯著高于60 min時，Grade a、Grade c、Grade a+Grade b、Grade a+Grade b+Grade c精子占比顯著高于90 min時；60 min時Grade c精子占比顯著高于90 min時，差異有統計學意義（Plt;0.05），見表1。

2.2 不同時間點PMSC及精子運動參數比較 各時間點PMSC、BCF、MAD及LIN比較，差異無統計學意義（Pgt;0.05），15 min時STR顯著高于30、60、90 min時，15 min時WOB、VCL、VSL及VAP顯著高于90 min，30 min時ALH、WOB及VCL顯著高于90 min，差異有統計學意義（Plt;0.05），見表2。

2.3 不同時間點精子活力、精子活動率、精子濃度及圓細胞濃度比較 15 min時精子活力、精子活動率顯著高于其他時間點，30 min時精子活力、精子活動率顯著高于60、90 min時，60 min時精子活力、精子活動率顯著高于90 min時，差異有統計學意義（Plt;0.05）；各時間點精子濃度、圓細胞濃度比較，差異無統計學意義（Pgt;0.05），見表3。

3 討論

精液參數是男性生育能力重要的檢查之一，CASA- CMP系統則是分析精液的活動率、活動力及活力的一種檢測方式，其具有較高的準確性。精液剛排出體外時呈凝膠狀態，經過一段時間會變成液體狀態，這一過程稱為液化。液化時間就是指新排出的精液由凝膠轉變為自由流動狀態所需的時間。室溫下，正常精液標本在60 min內完全液化，如果精液射出30 min后仍不液化，則屬于不正常[9]。精液采集和分析精子樣本的時間間隔是影響分析結果的重要因素，也是檢驗前質量控制的重要環節，為確保臨床分析結果的準確性，應嚴格控制和規范精子樣本采集和分析的時間間隔。另外，由于臨床中精液分析缺乏標準性，因此同一實驗室不同人員和不同實驗室分析結果出現差異，從而導致精液分析結果的不準確性。

精液標本隨放置的時間延長，精子分級的百分率均有所下降。本研究顯示，與15 min時比較，30、60、90 min時Grade a、Grade b精子百分率顯著下降，而Grade c精子百分率在15 min和30 min時比較，差異無統計學意義，在60 min時下降，且90 min時下降更為明顯。相關研究顯示，隨標本放置的時間越長，Grade a、Grade b精子百分率均顯著下降[10]。本研究與上述研究結果相符。精子的VCL、VSL及VAP都是以精子頭部為基準，其作為衡量精子頭部在單位時間內的相對距離或運動的參考，反映了精子的運動能力，即側擺的幅度和方向，因此可以認為，延長精子在體外停留的時間，不僅會降低精子的運動能力，還會影響其運動方式[11]。本研究還對不同時間點PMSC及精子運動參數進行分析，發現隨放置時間的延長，精子的運動參數中STR逐漸降低，精液放置越久BCF有所增加，但不同時間點PMSC、MAD、LIN、STR、BCF比較，差異無統計學意義，WOB在90 min時呈上升趨勢，ALH、VCL、VSL及VAP在90 min時呈下降趨勢，且與15 min時比較具有統計學意義。可能是由于本研究觀察時間較短，精子PMSC、BCF、MAD及LIN無明顯改變。

精液標本液化后，其放置時間越長，精子的活力和精子的活動率就會顯著下降[12]。本研究分別對液化后的第15、30、60、90 min時的精子活力、精子活動率、精子濃度、圓細胞濃度進行分析，結果發現，各時間點的精子活力和精子活動率比較，差異有統計學意義，但各時間點的精子濃度和圓細胞濃度比較，差異無統計學意義。這說明時間越久精子力和精子活動率顯著降低。本研究還發現，精子活動力呈無規律性下降，主要是由于精液標本保存時間越長，精液會出現較高的酸性度，其會改變精液中絲氨酸蛋白酶的活性，在一定程度上阻礙精子的活動力，導致精子活動力和活動率下降。

綜上所述，精液標本液化后應于15 min或30 min內進行檢測，此時間段檢測對檢測結果影響較小，若在精液標本液化后60 min后進行檢測，其檢測結果差異較大。

參考文獻

劉金炳，陳智毅.不育癥患者精索靜脈曲張程度超聲分級與精液質量和性激素的相關性研究[J].中國生育健康雜志， 2021， 32（5）： 474-476.

唐文豪，鄧琛耀，高江曼，等.季節因素對北京地區捐精志愿者精液質量的影響[J].北京大學學報（醫學版）， 2022， 54（4）： 658-662.

庾偉堅，路瑞靜，江凡，等.孕前保健男性年齡與精子DNA碎片、精液常規參數的相關性分析[J].檢驗醫學與臨床， 2021， 18（1）： 30-33， 37.

賈燁菻，李福平.禁欲時間對少精子癥和弱精子癥精液參數的影響[J].中華生殖與避孕雜志， 2022， 42（7）： 696-702.

竇曉敏，吳國選，孟俊英，等. 精液標本液化后放置時間對檢測結果的影響[J/CD]. 臨床檢驗雜志（電子版）， 2020， 9（2）： 82.

湯潔，張寧，丁曉萍，等. 標本采集時間對精液全自動分析各參數的影響[J]. 中國優生與遺傳雜志， 2003， 11（4）： 97-98.

陸金春，黃宇烽，呂年青.《世界衛生組織人類精液分析實驗室技術手冊》與我國男科實驗室現狀[J].中華男科學雜志， 2010， 16（10）： 867-871.

中國醫師協會男科學分會無精子癥診療專家共識編寫委員會.無精子癥規范化診療專家共識精要[J].中華醫學雜志， 2018， 98（46）： 3732-3736.

周世英，何書明，陳寧.雙石通淋膠囊聯合坦索羅辛治療ⅢB型前列腺炎伴精液不液化的臨床觀察[J].中國性科學， 2021， 30（8）： 28-31.

王榮.精漿細胞因子的檢測及其對精子質量的影響機制研究進展[J].中國男科學雜志， 2022， 36（2）： 103-107， 111.

常椿欣，吳正沐，王彥林.精子DNA碎片指數與精液常規參數及精子運動參數的相關性分析[J].中國計劃生育學雜志， 2022， 30（1）： 102-105， 111.

高文怡，張東，李采霞，等.男性年齡、液化時間與精子活力的相關性分析[J].醫學研究雜志， 2022， 51（1）： 50-54.