血清miR-21、YKL-40在2型糖尿病腎病患者中的表達及其意義

吳 倩 南華大學附屬第二醫院全科醫學科,湖南省衡陽市 421000

糖尿病(Diabetes mellitus,DM)是嚴重威脅人類生命健康的常見慢性疾病,研究發現,患者以血糖代謝紊亂為主要臨床表現,是遺傳因素與環境因素相互作用的結果[1]。糖尿病腎病(Diabetic nephropathy,DN)是糖尿病最為常見的并發癥之一,同時也是糖尿病患者死亡的主要原因之一,相關調查研究顯示,2型糖尿病患者中糖尿病腎病發生率約為34.7%[2]。由于糖尿病腎病病情呈漸進式緩慢發展,起病隱匿,不易被早期診斷。因此,尋求新的生物學標記物,早期診斷糖尿病腎病,對患者的治療及預后具有積極的意義[3]。本研究探討分析血清miR-21、YKL-40在2型糖尿病腎病患者中的表達及其意義,現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2020年3月—2022年12月我院收治的2型糖尿病患者151例,根據患者是否合并DN將患者分為兩組,其中單純2型糖尿病患者65例作為DM組,合并DN患者86例作為DN組。此外,選擇同期在我院健康體檢的健康受試者50例作為對照組。

1.2 選擇標準 (1)納入標準:①2型糖尿病患者均符合世界衛生組織(WHO)擬定的2型糖尿病相關診斷標準;②DN診斷標準參照美國糖尿病協會DN相關診斷標準;③2型糖尿病患者病程均≥5年。(2)排除標準:①合并高血壓患者;②合并急、慢性感染患者;③存在腎病綜合征病史患者;④存在肝病病史患者;⑤由透析或腎移植病史;⑥2周內使用過抗凝藥物或激素藥物患者。

1.3 觀察指標 記錄患者一般臨床資料及生化指標,包括患者性別、年齡、體質量指數(BMI)、2型糖尿病病程、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)。采用全自動生化分析儀檢測患者空腹血糖(FPG)、尿肌酐(Cr)、尿微量白蛋白(mALb),并計算ACr,ACr=尿mALb/尿Cr。采用高效液相色譜法檢測患者血紅蛋白(HbA1c)以及血紅蛋白(Hb)。留取三組受試者24h尿液,測定尿蛋白排泄率(UAER)。并計算腎小球濾過率(eGFR),eGFR=141×(sCr/k)α×0.993年齡×1.018(女性)×1.159(非裔美國人),男性k=0.9,α=-0.411,女性k=0.7,α=-0.329。

1.4 血清miR-21檢測 抽取三組受試者清晨空腹靜脈血5ml,常規離心后分離血清,采用總RNA提取試劑盒提取血清中總RNA。然后使用逆轉錄試劑盒將其逆轉錄為cDNA,以cDNA為模版采用miRcure miRNA熒光定量檢測試劑盒進行qPCR擴增,總反應體系為20μl。引物由上海生工生物工程有限公司合成,引物序列:miR-21:上游引物5’-CCTTCACTTTCAGGGTCGAG-3’,下游引物:5’-CAGTTTGGGACCCCTTTACA-3’;β-actin上游引物5’-CCCATCTATGAGGGTTACGC-3’,下游引物5’-TTTAATFTCACGCACGATTTC-3’。以β-actin作為內參基因,反應條件:95℃ 10min,95℃ 15s、60℃ 60s,進行45個循環。采用2-ΔΔCt法計算miR-21相對表達量。

1.5 血清YKL-40水平檢測 抽取三組受試者清晨空腹靜脈血5ml,常規離心后分離血清,采用ELISA法測定各組受試者血清YKL-40水平,試劑盒購于美國Quidel公司,操作嚴格參照試劑盒使用說明書進行。

1.6 統計學方法 采用統計學軟件SPSS25.0分析數據,三組間計量資料比較采用方差分析,組間兩兩比較采用t檢驗,三組間計數資料比較采用秩和檢驗,組間兩兩比較采用 檢驗;相關性分析采用Pearson相關性分析;采用ROC曲線分析血清miR-21、YKL-40對DN診斷價值,以P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 三組臨床資料比較 三組受試者性別、年齡、BMI、SBP、DBP比較差異無統計學意義(P>0.05),而三組受試者FBG、ALB、Hb比較差異具有統計學意義(P<0.05),DM組與DN組患者病程、HbA1c、eGFR以及UAER比較差異具有統計學意義(P<0.05),見表1。

表1 三組受試者臨床資料比較

2.2 三組受試者血清miR-21、YKL-40水平比較 三組受試者血清miR-21、YKL-40水平比較差異具有統計學意義(P<0.05),其中DM組、DN組患者血清miR-21、YKL-40水顯著高于對照組(P<0.05),而DN組患者血清miR-21、YKL-40水平顯著高于DM組(P<0.05),見表2。

表2 三組受試者血清miR-21、YKL-40水平比較

2.3 血清miR-21、YKL-40與DN患者臨床指標相關性 相關性分析結果顯示,DN患者血清miR-21、YKL-40與患者病程無關(P>0.05),而與患者FBG、HbA1c、UAER呈顯著正相關關系(P<0.05),與患者ALB、Hb、eGFR呈顯著負相關關系(P<0.05),見表3。

表3 血清miR-21、YKL-40與DN患者臨床指標相關性

2.4 ROC曲線分析血清miR-21、YKL-40對DN的診斷價值 分析血清miR-21、YKL-40對DN的診斷價值,結果顯示,ROC曲線下面積分別為0.918、0.851,見表4、圖1。

圖1 血清miR-21、YKL-40對DN的診斷價值的ROC曲線

表4 ROC曲線相關參數

3 討論

糖尿病腎病作為2型糖尿病患者常見的并發癥之一,具有發病隱匿、發病緩慢、機體代謝紊亂等特點。對于早期糖尿病腎病患者,若未采取及時有效的治療措施,患者極容易發展成終末期腎病,導致臨床治療難度的增加。目前,關于糖尿病腎病的發病機制尚未明確,臨床治療僅通過控制患者血糖、血壓以及血脂水平,從而達到減緩患者病情進展的目的,但是仍無法從根本上遏制病情的發展[4-5]。因此,糖尿病腎病患者的早期診斷和治療對于改善臨床預后具有的重要意義。

miRNA是生物體內長度為18～24個核苷酸的單鏈非編碼RNA,其廣泛參與了機體內的多種病理生理學過程[6]。目前越來越多的研究已經證實,多種疾病發生、發展過程中,均有miRNA的參與及調控,因此miRNA已經成為多種疾病診斷和治療的潛在標志物[7]。miR-21是較早發現的一類在人體組織和細胞中廣泛存在的miRNA,其位于17q23.2染色體區域上,相關報道顯示,miR-21與多種腎臟疾病有關[8]。YKL-40屬于哺乳動物甲殼酶樣蛋白家族成員之一,但是YKL-40本身不具備酶活性[9]。機體內多種細胞均可分泌YKL-40,其主要參與激活先天免疫系統以及組織重塑過程,被認為與機體血管內皮功能異常有關[10]。為了進一步提高糖尿病腎病患者的早期診斷,本研究探討分析了血清miR-21、YKL-40在2型糖尿病腎病患者中的表達及其意義。

本文結果顯示,DM組、DN組患者血清miR-21、YKL-40水顯著高于對照組,而DN組患者血清miR-21、YKL-40水平顯著高于DM組;DN患者血清miR-21、YKL-40水平與FBG、HbA1c、UAER呈顯著正相關關系,與ALB、Hb、eGFR呈顯著負相關關系。與研究報道結果相似[11],提示在糖尿病腎病患者血清miR-21以及YKL-40水平顯著升高,且糖尿病血清miR-21以及YKL-40水平表達與糖尿病腎病患者疾病進展密切相關,血清miR-21以及YKL-40可能參與到了糖尿病腎病疾病發生發展過程。此外,分析血清miR-21、YKL-40對DN的診斷價值,結果顯示,ROC曲線下面積分別為0.918、0.851。表明血清miR-21、YKL-40對糖尿病患者是否并發糖尿病腎病具有良好的診斷價值。

綜上所述,糖尿病腎病患者血清miR-21、YKL-40表達異常升高,且血清miR-21、YKL-40表達與患者糖尿病腎病疾病進展密切相關,對糖尿病腎病具有良好的臨床診斷價值,可能成為糖尿病腎病臨床診斷和治療的潛在生物學標志物,值得臨床進一步深入研究分析。