淮安市嬰幼兒食品腸桿菌檢測及耐藥性研究

杭 婧，宋呈文，金 華

（1.淮安市食品藥品檢驗所，江蘇 淮安 223300；2.淮陰工學院生命科學與食品工程學院，江蘇 淮安 223300）

腸桿菌科細菌是一大群形態、生化反應結果互相接近的革蘭氏陰性桿菌。這類細菌多數有周身鞭毛、有動力，生化反應中能夠發酵葡萄糖，能夠還原硝酸鹽，氧化酶試驗陰性（鄰單胞菌屬除外），觸媒試驗陽性（痢疾志賀菌除外），需要氧氣生長，部分在厭氧環境下仍可生長良好，對周圍環境營養要求普遍偏低，在普通營養平板上生長良好，在自然界中多種場所均可以生存。絕大部分腸桿菌科細菌寄居在活體生物的腸道內，也可存在于水、土壤或腐敗的物質上，多數為條件致病菌，少數為致病菌。與人類感染有關的細菌有腸桿菌屬、克雷伯菌屬、克羅諾桿菌屬、沙門菌屬和志賀菌屬等[1]。嬰幼兒一般指0～36 個月齡的孩子[2]，身體機能尚未發育完善，對外界及疾病抵抗力弱。所以檢測嬰幼兒食品中的腸桿菌具有重要意義。本文在市場隨機購買74 批嬰幼兒食品樣品，對其中檢出的腸桿菌科細菌進行生化鑒定并進行耐藥性分析，以了解淮安市嬰幼兒食品衛生情況和菌群的耐藥情況，為淮安市市場嬰幼兒食品監管提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 樣品

在淮安市市售嬰幼兒食品中隨機購買樣品，抽樣地點主要在超市、大型連鎖母嬰用品店、個體戶母嬰店等，共采集74 批嬰幼兒食品樣品。樣品類型主要包括嬰幼兒奶粉、嬰幼兒餅干、溶豆、嬰幼兒肉松、營養米粉、營養米乳、嬰幼兒小面條等。產品品牌包括中國、法國、韓國、日本等，上述購買的試驗樣品均為包裝食品且均在保質期內。

1.2 培養基與試劑

緩沖蛋白胨水BPW（批號：1115875）、胰蛋白胨大豆培養基（批號：1114302）、阪崎腸桿菌顯色平板（批號：CRM006B）、大腸菌群大腸桿菌顯色培養基平板（批號：M0216Y）、氯化鈉（AR，批號：20210926）、血瓊脂平板（批號：M1864Y），均購于廣東環凱公司；革蘭氏陰性細菌鑒定板（批號：2242024）、革蘭氏陰性細菌鑒定/藥敏板（批號：448505）、藥敏接種培養液（批號：2174615）、接種培養液（批號：2203381）、藥敏指示劑（批號：2178523），均購于美國BD 公司。

1.3 儀器設備

潔凈工作臺（BCM-1600A，蘇州安泰空氣技術有限公司）；電熱恒溫鼓風干燥箱（101-3，上海躍進有限公司）；SPX-350 型生化培養箱；高壓蒸汽滅菌鍋（MLS-3781L-PC 型，松下）；均質器（BagMixer 400CC，法國interscience）；全自動微生物鑒定藥敏分析儀（PhoenixTM M50，美國BD）；生物顯微鏡（OLYMPUS，日本Olympus）；生物安全柜（BSC-1304IIA2，蘇州安泰空氣技術有限公司）；電子天平（PL6001，梅特勒公司）。

1.4 實驗方法

1.4.1 腸桿菌的分離和鑒定

因腸桿菌科無統一的方法檢測標準，故參照《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗》（GB 4789.4—2016）[3]進行腸桿菌鑒定試驗。在生物安全柜內無菌操作，稱取試驗樣品至緩沖蛋白胨水稀釋培養液中，經36 ℃培養24 h 后劃線于阪崎腸桿菌顯色平板、大腸菌群大腸桿菌培養基顯色平板分離單菌落，菌落經純化后用接種環挑取單菌落至細菌鑒定培養液，用比濁儀把菌懸液濃度調整至0.5 麥氏單位菌液濃度后倒入陰性鑒定板條，蓋上板條塞，及時放入細菌鑒定儀進行鑒定，最終鑒定可信值在90%以上為可信結果。

1.4.2 腸桿菌藥物耐藥試驗

采用美國臨床實驗室標準化協會的微量肉湯稀釋法對本文檢出的腸桿菌進行耐藥試驗，主要檢測樣品中檢出的腸桿菌對19 種藥物的最小抑菌濃度，依據臨床和實驗室抗菌藥物敏感性測試標準CLSIM100-S30-2020[4]進行結果判讀。

2 結果與分析

2.1 腸桿菌定性檢測情況

74 批嬰幼兒食品中腸桿菌科菌種檢出4 批次，檢出率為5.4%。淮安市嬰幼兒食品中檢出腸桿菌的樣品信息以及淮安市嬰幼兒食品中腸桿菌生化反應結果分別見表1 和表2。

表1 淮安市嬰幼兒食品中檢出腸桿菌的樣品信息表

表2 淮安市嬰幼兒食品中腸桿菌生化反應表

2.2 腸桿菌耐藥試驗檢測結果

阿米卡星、慶大霉素、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢吡肟、氨曲南、哌拉西林、哌拉西林-他佐巴坦鈉、黏菌素、氯霉素、復方新諾明、環丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、四環素敏感率100%，對頭孢唑林、氨芐青霉素、氨芐青霉素-舒巴坦、阿莫西林克拉維酸鹽敏感率分別為50.0%、75.0%、50.0%、75.0%。淮安市嬰幼兒食品腸桿菌最小抑菌濃度檢測結果見表3。

表3 淮安市嬰幼兒食品腸桿菌最小抑菌濃度檢測結果表

3 結論與討論

本文檢出3 株菌種均屬于腸桿菌科，阪崎腸桿菌原屬于腸桿菌屬，后來單獨分離出來為克羅諾桿菌屬。肺炎克雷伯桿菌和陰溝腸桿菌是人體腸道中的正常菌群，屬于條件致病菌，在身體機能下降時可發生某種疾病。阪崎腸桿菌（克羅諾桿菌屬）是嬰幼兒疾病的重要病原菌之一，可引起嬰幼兒腦部炎癥、腸炎、神經系統病變等。此菌一旦入侵嬰幼兒腦部和腸段，致死率可高達50%[5-6]。

目前最新的《食品安全國家標準 預包裝食品中致病菌限量》（GB 29921—2021）只對0～6 月齡嬰兒配方食品和特殊醫學用途嬰兒配方食品明確要求檢測阪崎腸桿菌。本文檢出攜帶腸桿菌的樣品均是適合6 月齡以上嬰幼兒食用，且主要集中在嬰幼兒谷物食品以及嬰幼兒小面條食品兩大類。所以除了對6 月齡以下的嬰幼兒食品有具體標準限度值外，對6 月齡以上的稍大嬰兒及幼兒食品也應該引起相關部門的重視。

本文從19 種藥物的耐藥情況結果可以看出淮安市嬰幼兒食品中腸桿菌的耐藥情況確實存在。4 株檢出的腸桿菌中有3 株存在耐藥或中介的情況，甚至其中有一株陰溝腸桿菌是多重耐藥菌株，同時對4 種藥物耐藥。腸桿菌科耐藥機制主要是由于細菌產生染色體或質粒介導的β-內酰胺酶所引起的[7]。國外對于腸桿菌科細菌耐藥的嚴重性也有相關報道[8]。

本次所有檢出腸桿菌的樣品均為國內廠家和品牌，其中還有人們日常生活中耳熟能詳的所謂的“優質母嬰品牌”，由此可見“優質品牌”也并非為“優質品質”。這需要消費者在購買嬰幼兒食品時更正此類消費觀念，更需要市場加強監管。