柴黃口服液對雞傳染性支氣管炎的臨床效果

邱瑾麗 , 康靜靜 , 郭增輝 , 李紅嬌 , 王 喆

(1. 河南省抗球蟲藥物工程技術研究中心 , 河南 鄭州 450001 ; 2. 鄭州福源動物藥業有限公司 , 河南 鄭州 450001 ;3. 河南牧業經濟學院動物醫藥學院 , 河南 鄭州 450046)

近年來隨著養殖業的發展,雞呼吸道疾病發病率呈上升趨勢,尤以病原復雜、病程長和易反復為特點,嚴重影響養殖效益,其中由傳染性支氣管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)引起的急性高度接觸性雞傳染性支氣管炎(Infectious bronchitis, IB)在生產中較為常見,各年齡段的雞只均可感染(4周齡以內的雞發病嚴重),對其生產性能影響極大。柴黃口服液由柴胡和黃芩兩味藥材組成,最早出自《傷寒論》,收載于《中華人民共和國藥典(2015年版)》一部,功能為清熱解表,用于風熱感冒,證見發熱、周身不適、頭痛、目眩和咽喉腫痛。柴黃制劑在人醫臨床上應用廣泛,對小兒上呼吸道感染發熱和反復呼吸道感染療效顯著[1,2];獸醫臨床上主要用于預防高溫和高濕引起的家禽發熱、精神不振和食少[3]。國內有報道顯示,柴黃顆粒對人工感染雞IB有較好的防治效果[4],但柴黃口服液作為成藥直接應用于防治IB的研究相對較少。本試驗通過在臨床常規治療基礎上使用柴黃口服液,評價柴黃口服液對IB的治療效果,旨在為擴展其臨床應用范圍提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 藥品和主要試劑 柴黃口服液(500 mL/瓶,產品批號:202004001)和20%氟苯尼考粉(產品批號:202002002),均購自鄭州福源動物藥業有限公司。ExTaq?DNA聚合酶和反轉錄聚合酶,均購自TaKaRa Bio Inc.;核酸提取試劑盒,購自天根生化科技(北京)有限公司;甲醛,購自西隴科學有限公司;無水乙醇和二甲苯,均購自天津市致遠化學試劑有限公司;石蠟,購自德國徠卡公司;高碘酸,購自天津市科密歐化學試劑有限公司;堿性品紅,購自上海化學試劑總廠試劑三廠;偏重亞硫酸鈉,購自天津市永大化學試劑有限公司;蘇木精,購自鄭州派尼化學試劑廠;中性樹膠,購自上海華靈康復器械廠;鹽酸,購自煙臺市雙雙化工有限公司。

1.2 主要儀器 PCR儀ETC811,北京東勝創新生物科技有限公司產品;DYY-12電泳儀,北京六一生物科技有限公司產品;凝膠成像系統Gel Doc TMXR,美國伯樂Bio-Rad產品;輪轉式切片機RM2245,徠卡顯微系統(上海)有限公司產品;DHP-500型電熱恒溫培養箱,北京市永光明醫療儀器廠產品;CS-VI型攤片烤片機和冷凍臺,孝感市宏業醫用儀器有限公司產品;生物顯微鏡和數字化切片掃描系統,麥克奧迪實業有限公司產品。

1.3 供試動物 試驗選用河南省鄭州市港區養殖戶2個棚共6 000只黑鳳雞,2個棚雞舍飼養條件一致,均飼喂不含抗菌藥物的全價日糧,自由飲水,所有雞只均未接種過IB疫苗。12日齡部分雞只出現輕微呼吸道癥狀,15日齡大群表現出精神不振、甩鼻、咳嗽和張嘴呼吸,個別雞只鼻腔有黏性分泌物等癥狀。初步懷疑為雞IB,經逆轉錄聚合酶鏈反應(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測確定為雞IBV陽性。

1.4 動物分組和給藥 將上述陽性雞群雞只隨機分為2個組:試驗組按2.5 mL/L飲水量給予柴黃口服液,按1 g/L飲水量給予20%氟苯尼考粉;對照組,按1 g/L飲水量給予20%氟苯尼考粉,混飲,每天1次,連用5 d。

1.5 臨床癥狀觀察 每日觀察2個組雞只的采食、飲水和精神等表現,統計各組的死亡率和平均增重。部分療效考核標準參照參考文獻[5]。

1.6 試驗動物剖檢和取材 給藥前(14日齡)和給藥后(20日齡),分別隨機于各組選取10只雞,活體稱重后放血處死進行剖檢,并采集主要臟器用于臟器指數檢測和病理組織學觀察。

1.7 臟器指數檢測 依次完整取出雞只的肺臟、心臟、肝臟和脾臟,仔細將臟器周圍的脂肪和結締組織剔除干凈,并使用濾紙吸干臟器組織表面的血液后稱重,根據公式(1)計算各臟器指數。

臟器指數(%)=臟器鮮重(g)÷雞只活體重(g)×100%

(1)

1.8 組織病理學觀察 將采集的雞只的氣管、肺臟、心臟、肝臟、脾臟、腎臟和腸道組織置于10%福爾馬林溶液中固定,根據組織結構和病變位置,將固定完全的組織進行修整,之后沖水、脫水、透明,浸蠟4 h后包埋,切片、攤片和烤片后,進行蘇木素-伊紅(Hematoxylin eosin,H.E.)染色,樹膠封片后,進行數字切片掃描,觀察組織學病變特點并采集圖片。

1.9 數據分析 試驗結果以“平均值±標準差(Mean±SD)”方式表示,試驗數據用SPSS 22.0統計軟件進行分析,使用方差分析進行差異顯著性檢驗,P<0.05表示差異顯著,P<0.01表示差異極顯著。

2 結果

2.1 臨床癥狀觀察 給藥前,試驗組和對照組雞只均出現不同程度呼吸道疾病的臨床癥狀,主要表現為眼腫(圖1A)、呼吸困難、啰音、鼻腔有黏液性分泌物(圖1B)、張口呼吸、甩鼻和打噴嚏等。治療5 d后,試驗組和對照組雞只精神狀態均有不同程度好轉,呼吸道癥狀均有改善,且試驗組雞只的食欲明顯好于對照組。

圖1 用藥前雞只眼腫(A)和鼻腔黏性分泌物(B)Fig.1 Chickens with swollen eyes(A) and viscous secretions in nasal cavity(B) before administration

如表1所示,2個組雞只平均始重無顯著差異(P>0.05),連續給藥5 d后,與對照組相比,試驗組雞只死亡率降低1.7%,平均末重提高18.47%,平均增重提高37.36%,即平均末重和平均增重極顯著增加(P<0.01)。

表1 柴黃口服液對雞只生產性能的影響Table 1 Effect of Chaihuang oral liquid on production performance of chickens

2.2 剖檢變化 用藥前,雞只氣管有黏液性滲出物,氣囊壁增厚,表面有滲出物,導致氣囊壁渾濁(圖2A);腎臟腫大,因尿酸鹽沉積表現典型的“花斑腎”(圖2B);肝臟微腫。連續用藥5 d后,試驗組雞只氣管內黏液性滲出物減少,氣囊壁表面僅可見少量散在的白色滲出物(圖2C);腎臟仍然腫大,呈現“花斑腎”病理變化(圖2D)。

圖2 用藥前后雞只剖檢病理變化Fig.2 Post-mortem pathological changes in chickens before and after administration A、B:分別為雞只用藥前的氣囊壁和腎臟;C、D:分別為雞只連續用藥5 d后的氣囊壁和腎臟紅色箭頭:氣囊壁渾濁;藍色箭頭:“花斑腎”;黃色箭頭:氣囊壁滲出物減少A, B: The air sac wall and kidney of chickens before administration, respectively; C, D: The air sac wall and kidney of chickens after continuous administration for 5 daysRed arrows: Opacity of the air sac wall; Blue arrows: "Spotty kidney"; Yellow arrows: Decrease in exudate of the air sac wall

2.3 臟器指數的檢測 由表2可知,給藥前2個組雞只的各臟器指數均無顯著性差異(P>0.05);經5 d連續給藥后,與對照組相比,試驗組雞只的肺臟、肝臟和脾臟指數略有升高,但差異不顯著(P>0.05)。

表2 柴黃口服液對雞只臟器指數的影響Table 2 Effect of Chaihuang oral liquid on organ index of chickens (%,n=10)

2.4 組織病理學觀察 給藥前,2個組雞只心臟和肝臟組織結構未見明顯病變;氣管黏膜充血水腫;肺臟組織中支氣管管腔中黏膜上皮脫落且有大量滲出物;腸道組織結構不完整,血管充血;腎臟組織中均可見血管擴張充血,腎小管上皮細胞腫脹變形、壞死脫落。連續給藥5 d后,2個組雞只心臟和肝臟與剖檢所見基本一致,未見明顯病理變化,肝臟組織小葉結構未見明顯異常,心臟組織結構完整,心肌纖維排列整齊且致密,均未見明顯異常。試驗組雞只氣管管腔結構均完整(圖3A);對照組黏膜固有層內可見血管明顯擴張,紅細胞和淋巴細胞浸潤,黏膜下層結締組織間隙增寬,含有淡染水腫液(圖3B)。試驗組雞只肺臟組織中肺小葉結構完整、界限清晰,小葉間結締組織內血管擴張充血(圖3C);對照組部分小葉間結締組織內血管擴張充血,少部分三級支氣管黏膜上皮輕微脫落,初級支氣管中含有少量脫落的黏膜上皮細胞(圖3D)。試驗組雞只腸腔內無異常內容物,十二指腸組織結構完整清晰,黏膜上皮細胞排列整齊,固有層血管未見明顯擴張充血(圖3E);對照組部分黏膜上皮與固有層分離并脫落,固有層內血管擴張充血,部分區域可見紅細胞浸潤以及胞漿紅染的異嗜性粒細胞浸潤(圖3F)。2個組雞只腎臟部分小葉內腎小球萎縮,腎小管上皮細胞腫脹變性,胞漿內充滿顆粒狀物質或網狀空泡,部分腎小管上皮細胞發生壞死破裂,腎小管管腔內可見脫落的細胞和崩解的細胞碎片(圖3G、3H)。

圖3 給藥后雞只各器官病理組織學變化(H.E.染色)Fig.3 Histopathological changes in various organs of chickens after administration(H.E. staining)紅色箭頭:血管擴張,紅細胞和淋巴細胞浸潤;藍色箭頭:脫落的黏膜上皮細胞;黃色箭頭:胞漿紅染的異嗜性粒細胞浸潤;粉色箭頭:壞死破裂的腎小管上皮細胞;綠色箭頭:脫落的細胞和崩解的細胞碎片Red arrows: Vascular dilation, infiltration of red blood cells, and lymphocytes; Blue arrows: Shedding mucosal epithelial cells; Yellow arrows: Eosinophilic infiltration in cytoplasm; Pink arrows: Necrotic and ruptured renal tubular epithelial cells; Green arrows: Shedding cells and disintegrated cell fragments

3 討論

中獸醫認為雞IB屬氣血兩燔型風溫證。肉雞大多養殖于封閉雞舍中,極易受外邪入侵而致病,并在雞群內傳播[6]。感染IB后,熱毒內蘊,引起津液不化、痰涎阻塞,導致咳嗽氣喘、鼻腔有鼻液、氣管有啰音[7]。根據中醫辨證施治理論,本證應以清熱解表為主。柴胡-黃芩是臨床常用的經典藥對,柴胡可疏散退熱、疏肝解郁、清解表里,黃芩可清熱燥濕、瀉火解毒,二者合用清熱疏肝、和解少陽、外透內清。

近些年有關柴胡和黃芩藥對的研究很多,其中有柴胡黃芩有效組分、提取物、作用機理和藥效評價等方面的研究,但是對于柴黃口服液用于治療自然感染雞IB的研究極少。崔小七[8]研究顯示,柴黃顆粒對人工感染IB具有防治效果,可使發病率降低至50%,治愈率最高可達92%。文英先[9]研究顯示,柴黃顆粒對雞喉氣管炎的治療總有效率達98.33%。本試驗結果顯示,柴黃口服液對于雞IB具有很好的防治效果,同時柴黃口服液可以明顯降低雞只的死亡率,具有較好的抗病毒增效效果,這與黃錦標等[10]研究的使用柴胡黃芩中西醫結合治療流感的結果一致。

現代研究表明,黃芩和柴胡都具有明顯的抗病毒作用,柴胡的保肝效果較好,配伍使用可使藥對的抗病毒作用更加明顯,并且增加了保肝的療效。有文獻報道,柴胡和黃芩配伍對撲熱息痛所致的小鼠急性肝損傷有較好的保護作用[11]。柴胡和黃芩不同劑量比例配伍對大鼠急性酒精性肝損傷模型的多項指標均有影響[12]。本試驗中,2個組雞只的心臟和肝臟均未發生明顯病變,說明相較于呼吸系統,雞IBV對肝臟和心臟的損傷較小,而是否與柴胡和黃芩配伍的保肝作用有關,還需要進一步的試驗研究確認。

本試驗結果顯示,使用柴黃口服液和氟苯尼考粉聯用治療IB,不僅對雞只的氣管、肺臟和腸道的結構完整性具有保護作用,還可提高雞只的生產性能,提高雞只的平均增重,降低其死亡率,這與何雯娟等[13]的研究結果一致。中草藥提取物中含有多種天然營養物質和活性物質,這些物質中含有動物所需的氨基酸和維生素等,被動物機體吸收后可以補充受損機體所需,不僅有利于受損組織修復,還可提高機體整體免疫力,從而在治療原發疾病的同時達到改善禽類生產性能的目的。