續斷化學成分及藥理作用研究進展

黃蒙蒙,周廣濤,張霞,曹桂云,王全軍,林永強,孟兆青

(1.山東宏濟堂制藥集團股份有限公司,山東 濟南 250100;2.山東肺康中醫藥科技有限責任公司,山東 濟南 250100;3.山東省食品藥品檢驗研究院,山東 濟南 250101)

續斷為川續斷科植物川續斷(DipsacusasperWall.ex Henry)的干燥根,其來源在中國古代各時期雖有變化,但自明清時期至近現代再到《中國藥典》均以川續斷為唯一正品來源。明代《本草綱目》載:“續斷、屬折、接骨,皆以功效名也”,“接骨以功而名,別名接骨木”,在明代的《滇南本草》中,更是首次將川續斷科植物川續斷引入[1]。《中國藥典》2020年版(一部)收載其來源為“于秋季采挖,除去根頭和須根,用微火烘至半干,堆置‘發汗’至內部變綠色時,再烘干”[2]。關于續斷的研究,10年前主要集中在化學成分和質量差異方面[3-7],近10年國內外亦有關于續斷的綜述報道,但存在報道不全,內容不夠前沿等問題[8-11]。前通過整理總結近10年來對續斷化學成分和藥理作用的文獻報道,以期有助于對其更深入研究。

1 化學成分研究進展

續斷中主要含有三萜皂苷類、環烯醚萜類、木脂素類、揮發油類、生物堿類和多糖等成分,三萜皂苷類以及環烯醚萜類也是其含量最高的成分。近年來,隨著對續斷研究的不斷深入,發現其中還含有苯丙素類、有機酸類、蛋白質類等成分。

1.1 三萜皂苷類三萜皂苷類不僅是續斷中含量最高的成分更是其主要活性成分。目前已報道發現的約有20余種,且均為齊墩果烷型五環三萜皂苷,在3位和(或) 28位糖基取代[12]。其中以川續斷皂苷VI含量最高。《中國藥典》2015年版(一部)中續斷含量測定項下,便以川續斷皂苷VI作為指標成分進行定量控制[1]。現代常用的發汗、酒制和鹽制炮制加工方法均可達到增效目的。白玫等[13]對酒續斷最佳炮制工藝研究發現,川續斷浸出物和川續斷皂苷Ⅵ含量最高時的炮制工藝為加酒量10%,溫度150 ℃,炒制6 min。劉艷等[14]對續斷的發汗炮制進行評分比較,發現將續斷烘至半干時發汗,其川續斷總皂苷和川續斷皂苷Ⅵ含量最高。

1.2 環烯醚萜類張芬等[15]通過HPLC法測定發現,馬錢苷、馬錢苷酸和當藥苷為續斷中3種高質量分數的環烯醚萜類成分。此外,孫欣光等[16]運用大孔樹脂、反相硅膠及制備高效液相等色譜技術進行分離純化,發現了7個環烯醚萜類成分,分別為馬錢苷、獐牙菜苷、續斷苷H、續斷苷F、續斷苷E、6′-O-β-D-apiofuranosyl-sweroside、triplostoside A。

1.3 揮發油類揮發油也是續斷的主要成分之一。關于續斷中揮發油的提取研究,較早的有吳知行等[17]采用索氏提取法,以乙醚連續回流6 h,回收乙醚,再將提取物用水蒸氣蒸餾法提取,共鑒定得到41種化合物。近年來,李濤等[18]采用超聲輔助提取川續斷揮發油。并通過GC-MS進行揮發油化學成分分析,共檢測出53種成分,鑒定出51種。

1.4 木脂素類有關續斷中木質素類成分的報道較少。孫欣光等[16]運用大孔樹脂、反相硅膠及制備高效液相等色譜技術對續斷藥材進行分離純化,共分離得到6個木質素類化合物,分別為(7R,8S,7′R,8′S)-5-methoxyprinsepiol-4-O-β-D-glucopyranoside、(7R,8S,7′R,8′S)-prinsepiol4-β-D-glucopyranoside、acanthoside D、(7R,8S,7′R,8′S)-fraxiresinol-4′-O-β-D-glucopyranoside、(7R,8S,7′R,8′S)-8-hydroxypinoresinol-4′-O-β-D-glucopyranoside、(7R,8S,7′R,8′S)-8-hydroxypin-oresinol-4-O-β-D-glucopyranoside。

1.5 生物堿類張丹等[19]對比了不同炮制方法對續斷中總生物堿的影響,發現鹽制續斷中總生物堿含量最高,生品次之,而清炒和酒制法得到的續斷其生物堿較低。目前已報道鑒定出的續斷生物堿主要有venoterpine、cantleyine和gentianine[20]。

1.6 多糖類多糖也是續斷中含量較多的成分之一。張丹等[21]采用超聲波輔助提取法提取續斷多糖,并對工藝進行了優化,最終確定最佳提取工藝為料液比1∶20(g∶mL),提取時間60 min,提取4次,測得續斷多糖的平均提取率為7.472%。商龍臣等[22]采用微波輔助水浴浸提方法提取續斷多糖,并對提取工藝進行優化,最終確定最佳提取條件為微波功率800 W處理6 min、料液比1∶100(g∶mL)、水浴浸提時間80 min。

1.7 其他隨著近年來對續斷研究的不斷深入,發現其中還含有苯丙素類、有機酸類、蛋白質類等。楊瑩等[23]研究續斷“發汗”前后水煎液HPLC指紋圖譜,發現續斷中有綠原酸、異綠原酸C、咖啡酸等成分,說明續斷中含有苯丙素類、有機酸類成分。晉海軍等[24]采用Tris-HCl法提取不同產地川續斷根蛋白,用SDS-PAGE凝膠電泳技術對比不同產地續斷根蛋白條帶差異,為在蛋白質層面闡釋因產地差異造成續斷質量差異提供基礎資料。

2 藥理作用

續斷在臨床中應用較廣泛,目前主要用于治療筋傷骨折、跌撲損傷、風濕痹痛、肝腎不足、腰膝酸軟、崩漏、胎漏等病癥。近年來,也有文獻報道續斷有誘導HeLa細胞凋亡作用,為續斷在臨床應用方面研究提供了基礎。

2.1 對骨組織的續斷用于治療骨折、骨質疏松早有報道。近年來,研究者對其作用機制又有深入研究。楊瑩等[23]研究分析續斷HPLC指紋圖譜與細胞增殖分化藥效的譜效關系發現,川續斷皂苷VI、川續斷皂苷IV同分異構體系列、馬錢苷、綠原酸、川續斷皂苷X、異綠原酸C、咖啡酸可能是續斷影響細胞增殖分化作用的主要物質基礎。劉開飛[25]通過建立體外RANKL誘導破骨細胞的培養體系和體內膠原誘導型關節炎的動物模型,發現川續斷皂苷Ⅵ通過抑制NF-κB中P65的核轉位和AKT通路以及MAPK中JNK和p38的磷酸化,繼而影響下游C-Fos、NFATcl的活化進而抑制體外RANKL誘導的破骨細胞形成及其骨吸收活性,緩解體內膠原誘導型關節炎小鼠的骨破壞。楊瑩等[26]通過將人成骨樣MG-63細胞、幼鼠成骨細胞分別與續斷水煎液和大鼠含藥血清共同培養,發現續斷水煎液和含藥血清均能明顯促進MG-63細胞、幼鼠成骨細胞的增殖,且提高成骨細胞ALP活性。高歌等[27]研究續斷治療骨質疏松作用機制,發現續斷可能主要通過AKT1、MAPK1、MAPK3影響PI3K-AKT信號通路治療骨質疏松。

2.2 對生殖系統的作用續斷在臨床中也常被用于不孕不育、安胎、治療先兆性流產和習慣性流產的治療,其所含生物堿是主要的活性成分。龔小健等[28]分別以受孕22 d的大鼠為實驗對象,分別給藥300 μg·mL-1和600 μg·mL-1的生物堿,發現隨著劑量的增加,起效增快,效果也相應增強,有一定的量效關系。王權勝等[29]研究續斷種子方對無精子癥模型小鼠睪丸精子發生發育及c-kit蛋白表達的影響的作用機制,發現該方可有效促進睪丸生精上皮的精子發生發育,增加精子數量。

2.3 對神經系統的作用洪汝[30]研究續斷提取物對血管性癡呆大鼠模型的影響,發現其可明顯改善血管性癡呆大鼠認知學習記憶障礙;作用機理可能是通過調節bcl-2、bax蛋白表達和提高體內清除代謝過程中所產生的自由基能力,從而對海馬神經元起到一定的保護作用。未小明[31]研究續斷對血管性癡呆模型大鼠血流動力學的影響,發現續斷水煎液可改善VD模型大鼠的學習記憶能力。

2.4 對免疫系統的作用李顏桃等[32]研究川續斷水煎液對小鼠血清中免疫球蛋白和細胞因子的影響,發現川續斷水煎劑可升高小鼠血清中免疫球蛋白水平,在降低Th2類細胞因子的水平的同時還可增強血清中Th1類細胞因子水平。李賢讓[33]研究續斷總皂苷治療骨關節炎的作用機制發現其可抑制炎性細胞因子和凋亡相關蛋白表達,進而達到對骨關節炎的治療作用。

2.5 抗腫瘤目前,關于續斷抗腫瘤作用的報道較少。謝瑾玉等[34]對續斷水提液誘導HeLa細胞凋亡作用機制進行研究,發現續斷水提液能通過損傷線粒體的方式,導致HeLa細胞凋亡,為臨床應用續斷治療腫瘤提供研究基礎。

3 總結

續斷在我國具有悠久的藥用史,雖然歷史上均以續斷為其正名,但也存在基源復雜,品種混亂的情況。據考證,其來源從最早的漢朝時期的豆科植物、唇形科植物,到南北長時期的寄生科植物桑寄生、忍冬科植物接骨木和買麻藤科植物買麻藤,再到唐宋時期的唇形科植物糙蘇、忍冬科植物接骨木、大薊、大葉糙蘇、短柄影芝麻及野芝麻;至明清時期其主要來源則變為燈芯草科植物石龍芻和川續斷科植物川續斷,近現代時期還有日本續斷這一來源,《中國藥典》將川續斷科植物川續斷作為其唯一正品來源。

續斷作為臨床常用中藥,對其研究已較全面。但真正深入研究的大多是其含量較高的三萜皂苷類,如川續斷皂苷Ⅵ,目前,大量的研究也表明,其是續斷發揮各種藥理藥效的主要有效成分。但雖然其療效確切,但續斷中的化學成分較復雜,對于其他成分的研究還有待深入。通過總結近10年來對續斷的研究文獻,發現對續斷中的生物堿類、有機酸類、苯丙素類和蛋白質類研究報道較少,這些成分雖含量較低但亦有較高研究價值。此外,在藥理作用方面,大多數研究均集中在續斷對骨組織的作用而對其改善心腦血管血液流通作用及抗腫瘤作用等方面研究報道較少,值得進一步深入探索。