CD4+/CD8+聯合缺氧誘導因子-1α檢測對結直腸癌患者術后復發的評估價值

裴建灰，朱樂恒，朱曉龍

平煤神馬醫療集團總醫院普外科，河南平頂山 467000

世界衛生組織（World Health Organization，WHO）報道，結直腸癌是發病率僅次于肺癌的全球第二大惡性腫瘤，好發于40 歲以上中老年人群[1]，其發病機制尚不明確，目前多認為與環境、飲食習慣及遺傳等因素有關[2]。手術是目前針對結直腸癌最為有效的治療手段，能夠有效延長患者的生存時間，提高其生活質量[3]。然而研究發現，結直腸癌患者術后仍有較高的復發風險，對其預后產生不利影響。因此，尋求有效的臨床指標評估結直腸癌患者的術后復發情況，對改善患者預后尤為重要。CD4+和CD8+T 淋巴細胞是機體重要的免疫調節細胞，在腫瘤細胞的增殖和轉移過程中發揮積極的免疫調節作用[4]。缺氧誘導因子（hypoxia-inducible factor，HIF）-1α是一種具有轉錄活性的DNA 結合蛋白，與細胞增殖和凋亡具有緊密聯系[5]。相關研究報道，CD4+/CD8+和HIF-1α均是結直腸癌手術患者預后的重要影響因素[6-7]。本研究探討CD4+/CD8+聯合HIF-1α檢測對結直腸癌患者術后復發的評估價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年5 月至2021 年5 月于平煤神馬醫療集團總醫院行腹腔鏡手術治療的結直腸癌患者。納入標準：符合結直腸癌臨床診斷標準[8]，經病理檢查確診為結直腸癌；接受腹腔鏡手術且術前檢查及術后病理證實未發生淋巴結轉移及遠處轉移。排除標準：合并其他惡性腫瘤；合并心、肺等器官嚴重疾病；既往有腹部重大手術史。依據納入和排除標準，本研究納入124 結直腸癌患者，腫瘤類型：結腸癌55 例，直腸癌69 例；臨床分期：Ⅰ期60 例，Ⅱ期64 例；分化程度：低分化8 例，中分化73 例，高分化43 例。本研究經醫院倫理委員會審批通過，所有患者均知情同意。

1.2 檢測方法

術前采集所有患者空腹靜脈血2 ml，分別取100 μl 抗凝全血加入2 個試管中，2 個試管各加入CD4、CD8 抗體20 μ l，室溫避光孵育15 min，然后分別加入500 μl 細胞裂解液，振蕩混勻后室溫避光孵育10 min，采用免疫熒光標記技術檢測上層血清中CD4+、CD8+T 淋巴細胞水平，計算CD4+/CD8+。

術前采集所有患者空腹靜脈血2 ml，3000 r/min離心10 min 后取上層血清，采用酶聯免疫吸附試驗檢測血清HIF-1α水平。

1.3 觀察指標

比較不同臨床特征結直腸癌患者的CD4+/CD8+和HIF-1α水平。根據復發情況將患者分為未復發組（n=100）和復發組（n=24），比較兩組患者的CD4+、CD8+、HIF-1α水平及CD4+/CD8+，分析結直腸癌患者術后復發的影響因素。分析CD4+/CD8+、HIF-1α單獨及聯合檢測對結直腸癌患者術后復發的評估價值。

1.4 統計學分析

采用SPSS 23.0 軟件對數據進行統計分析，計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；符合正態分布的計量資料以均數±標準差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗；采用Logistic 回歸模型分析結直腸癌患者術后復發的影響因素；繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線，分析CD4+/CD8+、HIF-1α單獨及聯合檢測對結直腸癌患者術后復發的評估價值。以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同臨床特征結直腸癌患者CD4+/CD8+和HIF-1α水平的比較

Ⅱ期結直腸癌患者的CD4+/CD8+明顯低于Ⅰ期患者，HIF-1α水平明顯高于Ⅰ期患者，差異均有統計學意義（t=5.196、5.934，P＜0.01）。不同分化程度結直腸癌患者的CD4+/CD8+和HIF-1α水平比較，差異均有統計學意義（F=76.704、21.812，P＜0.01），CD4+/CD8+隨分化程度的升高而升高，HIF-1α水平隨分化程度的升高而降低。（表1）

表1 不同臨床特征結直腸癌患者的CD4+/CD8+和HIF-1α水平

2.2 復發組和未復發組患者CD4+、CD8+、HIF-1α水平及CD4+/CD8+的比較

復發組患者的CD4+水平及CD4+/CD8+均低于未復發組，CD8+、HIF-1α水平均高于未復發組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表2）

表2 復發組和未復發組患者CD4+、CD8+、HIF-1α水平及CD4+/CD8+的比較（±s）

表2 復發組和未復發組患者CD4+、CD8+、HIF-1α水平及CD4+/CD8+的比較（±s）

組別復發組（n=24）未復發組（n=100）t值P值CD4+（%）25.57±5.15 41.62±5.43 16.228＜0.01 CD8+（%）35.45±5.85 21.64±4.72 12.267＜0.01 CD4+/CD8+1.18±0.24 1.35±0.31 2.320＜0.05 HIF-1α（ng/ml）67.54±7.25 63.42±7.38 2.293＜0.05

2.3 結直腸癌患者術后復發影響因素的多因素Logistic 回歸分析

多因素Logistic 回歸分析結果顯示，CD8+、HIF-1α均是結直腸癌患者術后復發的獨立危險因素（P＜0.01），而CD4+和CD4+/CD8+均是結直腸癌患者術后復發的獨立保護因素（P＜0.01）。（表3）

表3 結直腸癌患者術后復發影響因素的多因素Logistic回歸分析

2.4 CD4+/CD8+、HIF-1α單獨及聯合檢測對結直腸癌患者術后復發的評估價值

ROC 曲線顯示，CD4+/CD8+聯合HIF-1α檢測評估結直腸癌患者術后復發的曲線下面積為0.872，高于CD4+/CD8+、HIF-1α單獨檢測的0.784、0.790。（表4、圖1）

圖1 CD4+/CD8+、HIF-1α單獨及聯合檢測評估結直腸癌患者術后復發的ROC曲線

表4 CD4+/CD8+、HIF-1α單獨及聯合檢測對結直腸癌患者術后復發的評估價值

3 討論

結直腸癌作為病死率位居全球第二的惡性腫瘤，已對人類的生活質量和生命健康造成嚴重威脅[9]。研究證實，結直腸癌患者術后復發風險較高，而常規檢查方法（如CT、B 超檢查等）對患者術后復發風險的評估具有一定的局限性，因此需借助血清學指標進行評估[10]。張靜等[11]研究指出，CD4+T 細胞對機體抗腫瘤免疫功能具有調節作用，而CD8+T 細胞可對腫瘤細胞進行特異性殺滅，因此CD4+/CD8+可直接反映機體的抗腫瘤免疫力。楊寧波等[12]研究表明，HIF-1α在多種類型腫瘤中呈高表達，可直接參與腫瘤進展、血管生成及腫瘤細胞轉移等過程。然而CD4+/CD8+與HIF-1α聯合檢測對結直腸癌患者術后復發的評估價值少有報道，因此本研究探討CD4+/CD8+聯合HIF-1α檢測對結直腸癌患者術后復發的評估價值，旨在為臨床治療結直腸癌及評估其預后提供參考。

本研究結果顯示，Ⅱ期結直腸癌患者的CD4+/CD8+明顯低于Ⅰ期患者，HIF-1α水平明顯高于Ⅰ期患者，差異均有統計學意義（P＜0.01）；CD4+/CD8+隨分化程度的升高而升高，HIF-1α水平隨分化程度的升高而降低。表明CD4+、CD8+及HIF-1α在結直腸癌發生發展過程中發揮重要作用。相關研究指出，免疫功能低下是導致結直腸癌患者術后復發的因素之一[13]。劉夢瑤等[14]研究發現，CD4+T 細胞通過識別腫瘤細胞表面抗原，激活免疫系統，促進腫瘤細胞凋亡。于曉潔和丘木水[15]的研究表明，CD4+T 細胞可調節機體的免疫平衡，其水平與結直腸癌患者的預后呈正相關。CD8+T 細胞可分化出具有殺傷效應的細胞毒性T 細胞和具有免疫調節功能的調節性T 細胞，進而提高機體免疫力，殺滅腫瘤細胞[16-17]。HIF-1α可直接對腫瘤細胞的缺氧耐受性進行調控，通過激活機體內糖酵解相關因子，提高腫瘤細胞的缺氧耐受性及侵襲性，進而促進腫瘤發生浸潤和轉移[18]。孫艷麗等[19]研究指出，HIF-1α通過結合靶基因序列調控機體缺氧反應基因的表達，進而調節腫瘤細胞能量代謝平衡，保持腫瘤細胞供血供氧穩定。本研究結果還顯示，復發組患者的CD4+水平及CD4+/CD8+均低于未復發組，CD8+、HIF-1α水平均高于未復發組，與相關研究報道的結果相似[20-21]。表明CD4+、CD8+T 細胞及HIF-1α均可能與結直腸癌復發有關。本研究的多因素Logistic 回歸分析結果顯示，CD8+、HIF-1α均是結直腸癌患者術后復發的獨立危險因素（P＜0.01），而CD4+和CD4+/CD8+均是結直腸癌患者術后復發的獨立保護因素（P＜0.01），與孫國鋼和宋新江[22]的研究結果部分相同。本研究的ROC 曲線顯示，CD4+/CD8+聯合HIF-1α檢測評估結直腸癌患者術后復發的曲線下面積為0.872，高于CD4+/CD8+、HIF-1α單獨檢測的0.784、0.790。表明CD4+/CD8+聯合HIF-1α檢測對結直腸癌患者術后復發具有一定的評估價值。

綜上所述，CD4+/CD8+聯合HIF-1α檢測對結直腸癌患者術后復發具有一定的評估價值，可為臨床干預及治療提供參考。