胃腺癌和淋巴結轉移癌中Claudin18.2表達研究

袁雪芹,張靜婷,2,李 霞,2

(1.濟寧醫學院附屬金鄉醫院病理科,山東 濟寧 272299;2.深圳市龍崗區第三人民醫院病理科,廣東 深圳 518115)

胃癌是全球最常見的惡性腫瘤之一,2020年全球發病率排名第五,死亡率排名第四[1],也是我國最常見的消化道惡性腫瘤[2],大多數患者確診時已是晚期。目前治療仍然是以化療為主,靶向藥物較少,晚期胃癌患者的治療效果差,5年生存率僅 為30%左右[3],急需開發一些新的靶向治療藥物[4]。Claudin18.2(CLDN18.2)是在上皮緊密連接處表達的四肽蛋白Claudin家族的成員,正常情況下 Claudin18.2蛋白主要表達在胃黏膜上皮細胞,其在胃癌、胰腺癌、食管癌等癌變組織中表達明顯上調,并參 與腫瘤細胞的增殖、分化及轉移[5]。在一項隨機2期研究(FAST)中,對經組織學證實的中到強Claudin18.2表達的進展期胃癌和胃食管連接部癌患者,zolbetuximab (IMAB362)聯合化療比單純化療延長了總生存期和無進展生存期,安全性和耐受性可接受[6]。目前多項研究在進行,對于Claudin18.2在胃癌中的分布及表達僅在國外有一些研究[7-8],目前在中國胃癌患者中僅查及少量研究[9-10],對于Claudin18.2 在胃癌中表達及臨床病理學特征之間的關系尚不清楚。因而,本研究進一步探討患者胃原發性腺癌及淋巴結轉移癌中Claudin18.2的表達情況,為靶向選擇、治療積累一些理論依據。

1 資料與方法

1.1一般資料:收集深圳市龍崗區第三人民醫院病理科和濟寧醫學院附屬金鄉醫院病理科2010～2022年間胃腺癌組織和淋巴結轉移癌樣本共計110組,病理學分級采用WHO 分類標準(2019),本研究的組織學樣本均經兩位病理學家復診。組織標本經 4%中性甲醛固定,石蠟包埋,常規5 μm切片。本研究經過本院醫學倫理委員會審批同意執行。

1.2方 法:應用免疫組織化學 EnVision法檢測 Claudin18.2(上海杰浩)的表達水平,操作按試劑盒說明書進行,正常胃黏膜作為陽性對照。

1.3免疫組織化學結果判定:免疫組織化學結果由兩位病理醫師進行交叉雙盲判定。Claudin18.2的免疫組織化學結果判讀參照 Sahin等[6,11]報道的方法,該方法參考腫瘤細胞膜的染色強度和腫瘤細胞的百分比綜合評價,對完全、基底及側膜或側膜染色的癌細胞百分比進行評估。染色強度分為0(無細胞膜反應)、1+(弱細胞膜反應)、2+(中等細胞膜反應)和3+(強細胞膜反應),只有陽性對照(健康胃組織)顯示預期的染色模式,腫瘤標本的染色才被認為是有效的。Claudin18.2陽性定義為至少40%的腫瘤細胞中中度(2+)或強Claudin18.2染色(3+)。

1.4統計學方法:應用 Office 2010軟件的Excel程序進行χ2檢驗,以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1患者和腫瘤特征:患者年齡35～75歲(中位年齡65歲),男和女患者分別為65例和45例。原發腫瘤位于胃小彎及胃竇部71例(64.5%),胃體部22例(20%),胃食管交界處17例(15.5%)。按腫瘤分期,Ⅲ期80例(72.7%),Ⅱ期30例(27.3%);按Lauren表型,腸型58例(52.7%),彌漫型43例(39.1%),混合型10(8.2%)。見表1。

表1 胃癌患者Claudin18.2的表達和臨床病理特征之間的關系

2.2免疫組化結果

2.2.1胃癌原發部位及淋巴結轉移部位Claudin18.2的表達:在正常胃黏膜上皮可見中度的Claudin18.2表達,其作為本次研究的內對照(圖1A)。在胃癌中,Claudin18.2主要表達于細胞膜,部分腫瘤細胞可見細胞質表達。細胞膜可見完整的、基底側膜或者側膜表達陽性。按照FAST研究的標準(≥40%的腫瘤細胞中≥2+膜染色強度),本研究胃癌Claudin18.2的陽性率為50%(55/110)圖1B-1D分別顯示胃腺癌組Claudin18.2 強度1+～3+。淋巴結轉移癌中觀察到中到強Claudin18.2表達陽性率為44.5%(49/110),圖2A-2D分別顯示Claudin18.2在淋巴結轉移癌中強度0～3+。兩組間差異無統計學意義(P>0.05)。

圖1 胃腺癌組織中Claudin18.2的表達水平(EnVision,×200)

2.2.2胃腺癌原發灶中Claudin18.2的表達水平與臨床病理學特征之間的關系:不同年齡、性別、臨床分期的患者Claudin18.2的表達差異無統計學意義(P>0.05);但Lauren分型中腸型較彌漫型的Claudin18.2的表達明顯增高,差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

3 討論

在國外FAST研究[6]中顯示:在Claudin18.2表達陽性的胃癌患者中,化療聯合zolbetuximab (IMAB362)的治療II期臨床試驗已經顯示了很好的療效,因而有必要進一步研究明確Claudin18.2在中國胃癌患者中的表達情況及與臨床特征的關系。

本研究中選擇了110例原發性胃癌進行Claudin18.2免疫組化檢測,本研究發現Claudin18.2在胃腺癌中表達于腫瘤細胞基底及側膜,胃腺癌中的陽性率為54.5%。FAST研究中共計篩選了689例歐美胃癌患者,其Claudin18.2陽性率為49%。Rohde等[12]收集了134例日本胃癌患者,運用與FAST研究相同的抗體及評價標準,其Claudin18.2的陽性率為52%,據此發現本研究與日本及歐美胃腺癌Claudin18.2的陽性率相似。Dottermusch等共收集了德國278例胃癌患者,運用免疫組化研究結果顯示Claudin18.2的陽性率為42.2%。在陽性患者中,1+、2+及3+的患者的陽性率分別為患者的14.8%、13.3%及14.1%,≥40%的腫瘤細胞中≥2+膜染色強度的百分率僅僅為10%,該結果明顯比我們的研究及既往研究均低。進一步分析原因,該研究使用的抗體是Abcam的CLDN18.2抗體(clone EPR19202,Cambridge,UK),與我們及FAST研究中使用的均不同,這可能是其中的原因之一,這些結果也提示,在Claudin18.2的檢測中使用一致的抗體及評價體系比較可靠。本研究中比較了胃腺癌和淋巴結轉移癌組織中Claudin18.2的陽性率,結果顯示兩者陽性率相似,這一結果和Rohde等[12]研究結果相似。此結果也初步提示,未來對于Claudin18.2的臨床檢測可以使用原發灶或轉移灶,增加了臨床檢測的便利性。

本研究中繼續分析了Claudin18.2的表達與臨床參數之間的關系,研究顯示Claudin18.2在不同年齡組、性別及臨床分期之間均未見明確的統計學差異,但是Claudin18.2的表達與Lauren分型由一定關系。Claudin18.2在腸型胃癌中表達近70%,彌漫型胃癌中僅30%,該研究結果和Dottermusch等[7]的研究結果相似。Kim等[13]檢測了彌漫型胃癌中Claudin18.2的表達水平,其用H-Score 對結果進行統計,結果即使H-Score 80分的患者約占25%,與本研究結果相似。這一結果提示,腸型胃癌比彌漫型胃癌將更有機會從Claudin18.2的治療中獲益。

本研究對Claudin18.2在胃癌中的表達水平及臨床參數之間的關系做了初步探討,初步提示約50%的中國胃癌患者未來有可能從Claudin18.2的治療中獲益。由于樣本量有限,尚需要進一步擴大樣本量來驗證該結果。