子癇前期患者孕晚期血清miR-181a、C反應(yīng)蛋白表達量及臨床意義

于海微,林錦芬,黃團明,鄧 虹,李 玲,蔡翩翩

(廈門市中醫(yī)院婦產(chǎn)科,福建 廈門 361009)

子癇前期是妊娠期特有的進展性疾病,隨著病情的發(fā)展能夠影響重要臟器功能,給母兒的健康造成了嚴重的影響[1]。目前,子癇前期的病因及具體機制尚未清楚,臨床普遍認為與孕婦、胎兒、胎盤等多方面因素協(xié)同作用所致,例如:胎盤因子進入母體血液循環(huán)、子宮-胎盤血管結(jié)構(gòu)異常等,其中家族史、年齡、多胎妊娠、慢性高血壓或腎臟病病史是其高危因素[2]。同時,一些研究發(fā)現(xiàn)炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)損傷也是引起子癇前期的重要原因[3-4]。C反應(yīng)蛋白(CRP)屬于急性時相反應(yīng)蛋白,當機體存在急性損傷或炎性反應(yīng)時,其濃度會在短時間內(nèi)快速升高[5]。微小RNA(miRNA)是一類約22個堿基長度的非編碼RNA,在細胞分化、增殖、凋亡等多種生物學進程中具有重要的作用。有學者發(fā)現(xiàn),微小RNA-181a在子癇前期患者胎盤組織中可以出現(xiàn)特異性的增強表達,考慮其參與了子癇前期的病理生理過程[6]。為了完善子癇前期患者的診療方案,本研究回顧性分析孕晚期子癇前期患者資料,分析血清miR-181a、CRP表達量及臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料:回顧性分析2020年2月～2023年2月于廈門市中醫(yī)院就診的108例孕晚期子癇前期患者資料將其作為研究組,選取同期于本院進行產(chǎn)檢的108例正常孕晚期產(chǎn)婦作為對照組。研究組年齡25～40歲,均值(34.50±3.28)歲;孕周28～36 w,均值(33.25±2.08)w;其中初產(chǎn)婦72例,經(jīng)產(chǎn)婦36例。對照組年齡24～42歲,均值(34.55±3.25)歲;孕周28～36 w,均值(33.30±2.25)w;其中初產(chǎn)婦70例,經(jīng)產(chǎn)婦38例。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。納入標準:子癇前期符合《婦產(chǎn)科學》第9版[7]中的診斷標準;單胎妊娠;孕周≥28 w;患者具有良好的溝通能力;本院建檔且資料完整。排除標準:存在其他妊娠合并癥或并發(fā)癥;合并急性或慢性感染性疾病;有藥物濫用史或酗酒史;胎兒畸形和雙胎;免疫缺陷;惡性腫瘤;近1個月使用過抗凝藥;凝血功能障礙;患有精神障礙。

1.2方法:兩組受檢對象均接受孕晚期血清miR-181a與CRP檢測。采集受檢者空腹狀態(tài)下的靜脈血標本3～5 ml放置在抗凝管中,使用低速離心機(型號:TD6M;由湖南滬康離心機有限公司生產(chǎn))進行離心10 min,速度為3 000 r/min,半徑為10 cm,血清分離后取上清液,放置在-80℃的冰箱內(nèi)存儲。①CRP:使用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)對CRP進行檢測,由上海康朗生物科技有限公司提供試劑盒。②miR-181a:提取血清300 μl,加入1 ml Trizol試劑,之后提取總RNA,對其純度與濃度進行檢測,逆轉(zhuǎn)錄RNA為cDNA,使用cDNA作為模板,通過實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)對miR-181a的表達量進行檢測。miR-181a下游引物序列5′-CATACTGCCCCTCCCGTTTG-3′,上游引物序列5′-TGGGATTCGATCAACAGAGAGT-3′;內(nèi)參U6下游引物序列5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′,上游引物序列5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′。反應(yīng)條件:15min、95℃預(yù)變性、20s、94℃變性、34s、60℃退火,循環(huán)頻次為40次,各標本有平行反應(yīng)復(fù)孔3個,以U6作為對照,使用“2-ΔΔCt”法對miR-181a表達量進行計算。

1.3觀察指標:①比較兩組受檢者的血清miR-181a與CRP水平。②比較研究組中輕度子癇前期患者(67例)與重度子癇前期患者(41例)的血清miR-181a與CRP水平。③根據(jù)妊娠結(jié)局分析研究組中妊娠結(jié)局良好患者(78例)與妊娠結(jié)局不良(30例)患者的血清miR-181a與CRP水平。不良妊娠結(jié)局包括:急性胎兒宮內(nèi)窘迫、產(chǎn)后出血、胎盤早剝、胎死宮內(nèi)、早產(chǎn)、凝血功能障礙、新生兒窒息等任意一種。④觀察miR-181a、CRP聯(lián)合檢測與單獨檢測使用受試者工作特征(ROC)曲線對子癇前期不良妊娠結(jié)局的預(yù)測效能,即敏感度與特異度進行分析。

1.4統(tǒng)計學分析:采用SPSS23.0軟件對研究數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計與分析行t及χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1兩組miR-181a與CRP水平對比:研究組miR-181a水平[(6.20±1.00)]與CRP水平[(43.52±6.562)mg/L]均高于對照組[(1.03±0.38)、(4.20±1.03)mg/L],差異有統(tǒng)計學意義(t=50.224、61.537,P<0.05)。

2.2輕度與重度子癇前期患者血清miR-181a、CRP水平對比:重度子癇前期患者的血清miR-181a水平[(7.18±1.30)]與CRP水平[(51.98±12.87)mg.L],均高于輕度子癇前期患者[(6.50±1.12)、(39.02±11.06)mg/L],差異有統(tǒng)計學意義(t=3.155、5.551,P<0.05)。

2.3妊娠結(jié)局良好與妊娠結(jié)局不良患者的血清miR-181a、CRP水平對比:妊娠結(jié)局不良患者的血清miR-181a水平[(7.35±1.36)]、CRP水平[(52.65±10.67)mg/L]均高于妊娠結(jié)局良好患者[(5.45±1.27)、(40.80±8.55)mg/L],差異有統(tǒng)計學意義(t=6.828、6.009,P<0.05)。

2.4miR-181a、CRP聯(lián)合檢測與單獨檢測對于子癇前期不良妊娠結(jié)局的預(yù)測效能:ROC曲線分析發(fā)現(xiàn),miR-181a與CRP聯(lián)合檢測對于子癇前期不良妊娠結(jié)局的預(yù)測敏感度、特異度高于單獨CRP、miR-181a檢測,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 miR-181a、CRP聯(lián)合檢測與單獨檢測對于子癇前期不良妊娠結(jié)局的預(yù)測效能

3 討論

子癇前期是一種多因素、多通路、多機體致病的疾病,其發(fā)病率約為4%～6%,能夠?qū)е滦?、腎、肝、肺、腦、內(nèi)分泌、血液系統(tǒng)及子宮胎盤血流灌注異常,不僅直接危害母兒的健康,且是孕產(chǎn)婦與胎兒死亡的重要原因[7-8]。因此,盡早且準確的預(yù)測子癇前期發(fā)生、進展以及不良妊娠結(jié)局情況,對于保障母兒預(yù)后具有積極的影響。

CRP屬于急性時相反應(yīng)蛋白,主要由肝臟合成,對于各種急慢性炎性反應(yīng)具有較高的敏感性[9]。正常情況下,CRP在體內(nèi)的含量極微,而機體存在炎性損傷、感染等問題時,活化的巨噬細胞分泌細胞因子誘導(dǎo)并刺激肝細胞,導(dǎo)致CRP水平快速升高,其生物學特性表現(xiàn)為激活與識別某種影響防御機制與炎癥的物質(zhì)[10]。有研究指出,妊娠高血壓患者的血清CRP水平高于正常孕產(chǎn)婦,并與血壓指標呈正相關(guān)性[11]。CRP可以提高吞噬細胞的作用,影響凋亡細胞清除,使凋亡指數(shù)上升[12]。同時,CRP升高后可以促進其他炎性因子形成,損傷血管內(nèi)皮,干擾舒血管物質(zhì)的釋放,導(dǎo)致子癇前期的形成與加重[13]。miRNA是一類不編碼蛋白、缺乏開放閱讀框的小分子RNA,miRNA與其靶基因序列間的低互補性可以使其與多個靶基因互相作用,所以在諸多生物學過程與通路中發(fā)揮著多樣性的復(fù)合效應(yīng)。有研究采用熒光實時定量PCR技術(shù)對子癇前期患者的157個miRNA表達進行檢測,發(fā)現(xiàn)其miRNA與正常妊娠者存在明顯差異[14]。miR-181a在細胞的分化與生長中發(fā)揮著重要的作用,特別是在自身免疫性疾病與惡性腫瘤方面的異常表達能夠引起細胞功能異常。

現(xiàn)階段,臨床關(guān)于miR-181a在孕晚期子癇前期患者中的應(yīng)用報道甚少,本研究結(jié)果說明miR-181a、CRP表達與孕晚期子癇前期患者病情進展、預(yù)后不良有關(guān),考慮原因如下:全身小動脈痙攣及內(nèi)皮細胞功能障礙是子癇前期患者的基本生理病理變化,而胎盤在供血不足的情況下能夠刺激機體釋放促炎因子CRP,CRP升高后損傷血管內(nèi)皮細胞,促進其釋放的舒血管物質(zhì)減少,進一步升高了血壓水平。同時,CRP能夠促進血管平滑肌細胞遷移與增生,增加血管重構(gòu)阻力。miR-181a通過多個靶向基因參與了滋養(yǎng)細胞侵襲、血管內(nèi)皮損傷等病理過程,干擾滋養(yǎng)細胞合成,導(dǎo)致胎盤血流動力學發(fā)生變化,繼而加重子癇前期進展。因此,臨床可以對子癇前期患者進行miR-181a、CRP水平動態(tài)檢測,一旦發(fā)現(xiàn)水平異?；虺掷m(xù)性升高應(yīng)警惕病情加重,及時診療與治療,以便保障妊娠結(jié)局。此外,ROC曲線分析結(jié)果說明miR-181a、CRP聯(lián)合檢測可以彌補單一檢測的不足,提高診斷效能,且血清學標本獲取簡便,利于患者接受,有望成為子癇前期患者病情預(yù)測、臨床診療的新靶點與標志物。需要注意的是,由于本次研究為回顧性分析,結(jié)果可能存在偏倚,加之樣本量有限,所以血清miR-181a、CRP檢測對于子癇前期患者的臨床應(yīng)用價值仍需要進一步探討與論證。綜上所述,miR-181a、CRP表達與孕晚期子癇前期患者病情進展、預(yù)后不良有關(guān),聯(lián)合檢測能夠提高不良妊娠結(jié)局的預(yù)測效能,具有一定的臨床參考價值。