氣相色譜法測定艾草貼中桉油精的含量

翁曉君

（深圳市計量質量檢測研究院，廣東深圳 518110）

艾草貼是以艾葉為主要原料，與其他藥物提取物或生藥細末混合成膏，攤涂在無紡布上，覆蓋離型紙，經切片包裝而成的敷貼，敷貼于皮膚、孔竅、穴位等可治療疾病。艾葉為菊科植物艾的干燥葉，有特殊香氣，味苦、性涼，具有散寒止痛、溫經止血、祛濕止癢等功效，臨床常用于治療呼吸系統疾病、婦科疾病、消化系統疾病以及外科疾病[1]。艾葉含有揮發油、黃酮、有機酸和三萜類等多種化學成分，其中桉油精、樟腦、龍腦、松油醇等為艾葉揮發油的主要共有成分[2]。

桉油精，又名1,8-桉葉(油)素、桉葉素，具有類樟腦氣味的無色液體，是一種從桉樹屬植物中提取的單萜烯類氧化物，天然存在于桉樹屬、菊科的蒿屬、樟科的月桂屬，以及唇形科的鼠尾草屬、薰衣草屬、百里香屬、迷迭香屬等芳香植物中。桉油精具有抑菌、抗病毒、抗寄生蟲、抗炎、抗氧化、抗腫瘤、改善組織纖維化及屏障功能、神經保護、肝保護、解痙、鎮痛、抗膽固醇降血脂、防治糖尿病并發癥等藥理作用，對呼吸系統、消化系統、神經系統和循環系統均有一定的保護作用[3-4]，在醫藥、生活用品、化妝品領域中應用廣泛。

桉油精是艾草貼中的主要成分，但目前未發現檢測艾草貼中桉油精含量的報道。本研究參考相關資料建立艾草貼中桉油精含量的檢測方法[5-7]，以期為企業產品質量控制提供良好的質量檢測標準。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

7890B 氣相色譜儀（配有FID 氫火焰離子化檢測器），美國Agilent 公司； QUINTIX313-1CN 型千分之一分析天平，德國賽多利斯公司；QUINTIX224-1CN 型萬分之一分析天平，德國賽多利斯公司；AS10200ADT 超聲萃取儀，天津奧特賽恩斯儀器有限公司；MS3 Digital 旋渦振蕩器，德國IKA 公司。

桉油精（CAS：470-82-6；純度：99.7%），德國Aldrich 公司；正己烷、乙酸乙酯、無水乙醇，HPLC 級，德國Merck 公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 標準溶液的配制

準確稱取桉油精標準品0.017 0 g（精確稱量至0.000 1 g）于100 mL 容量瓶中，用正己烷溶解、定容，配制成質量濃度為169 mg/L 的儲備液。以桉油精標準溶液為母液，以正己烷為稀釋液配制成質量濃度為0.5 mg/L、1.0 mg/L、5.0 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L、50.0 mg/L 的系列標準溶液，現配現用。

1.2.2 樣品前處理1.2.2.1 樣品的制備

取市售艾草貼，剪碎混勻，裝入潔凈的可密封盛樣容器中，密封并標明標記。

1.2.2.2 樣品的提取

稱取剪碎均勻的樣品0.4 g（精確稱量至0.001 g）置于50 mL 離心管中，精密加入正己烷40 mL，稱定重量，超聲2 h 后，再稱定重量，用正己烷補足重量，渦旋搖勻，9 000 r/min 轉速離心2 min，取上清液，用0.22 μm 濾膜過濾后，按色譜條件進行測定。

1.2.3 氣相色譜條件

色譜柱：HP-INNOWAX 毛細管柱（30 m×250 μm，0.25 μm）；柱溫：程序升溫，初始溫度70 ℃，保持4 min，以5 ℃/min 升溫至140 ℃，保持1 min，再以60 ℃/min 升溫至260 ℃，保持3 min；進樣口溫度200 ℃；FID 檢測器溫度250 ℃；進樣方式：分流進樣，分流比5 ∶1，進樣量1 μL；載氣（氮氣）：1.0 mL/min，氫氣：40 mL/min；空氣：350 mL/min。

1.2.4 精密度實驗

取濃度為10 mg/L的桉油精標準工作液，按“1.2.3”色譜條件連續進樣6 次，測定儀器精密度；取同一批艾草貼陽性樣，按“1.2.2”方法制備6 份試樣溶液并測定，比較每次測定數據之間的差異，并計算6 次測定值之間的相對標準偏差，測定方法重復性。

1.2.5 加標回收實驗

在已知桉油精含量的艾草貼樣品中添加169 mg/L的桉油精標準儲備液，添加量依次為0.24 mL、0.48 mL、2.40 mL，按“1.2.2”方法制備試樣溶液后測定含量，并計算回收率。

1.2.6 樣品測定

取8 批次市售艾草貼，按“1.2.2”方法制備試樣溶液后進行測定。

2 結果與分析

2.1 樣品前處理條件的選擇

2.1.1 提取溶劑的選擇

桉油精與艾草貼中其他天然成分的化學性質不同，在不同溶劑中的溶解度也存在差異。本文以艾草貼陽性樣為樣品，使用3 種有機溶劑（乙酸乙酯、正己烷、無水乙醇）提取桉油精，超聲時間均為1 h，結果見圖1。結果表明，正己烷作為提取液時，提取效果最好，分離度好，且雜質干擾小。

圖1 提取溶劑對樣品中桉油精含量的影響

2.1.2 提取時間的選擇

本文考察了超聲提取時間（0.5 h、1.0 h、2.0 h、3.0 h）對提取率的影響，結果發現提取時間越長，提取率越高，但考慮到超聲時間過長會導致提取溶劑損失過多，且超聲3 h 和超聲2 h 的結果相差不大。因此本文選取超聲時間為2 h，該條件下提取率高，適用于艾草貼中桉油精的提取。

2.2 儀器條件的優化

艾草貼中揮發性成分復雜，雜質較多，為了更好地分離桉油精，本文在測試檢測方法時發現采用聚乙二醇作為固定相的強極性HP-INNOWAX 毛細管柱能更好地分離桉油精和其他雜質；通過改變氣體流速和色譜柱程序升溫等條件優化艾草貼中桉油精含量測定的氣相色譜條件，使其在保證桉油精分離效果良好的前提下，控制檢測時間在25 min 以內，可提高檢測效率，優化后的色譜條件見1.2.3。桉油精標樣和樣品中桉油精的氣相色譜圖如圖2、圖3 所示。

圖2 桉油精標準品色譜圖

圖3 樣品中桉油精色譜圖

2.3 標準曲線與檢出限

由圖4 可知，線性回歸方程為y=2.520 21x-0.199 648，相關系數r=0.999 96，桉油精在0.5 ～50.0 mg/L 的濃度范圍內與其峰面積積分線性關系良好。以取樣量0.40 g 計，本方法對樣品的檢出限為0.05 g/kg（S/N＞3），定量限為0.1 g/kg（S/N＞10）。

圖4 桉油精的標準曲線圖

2.4 精密度

按1.2.4 測定儀器精密度，得到桉油精峰面積的相對標準偏差為2.93%，表明儀器精密度良好。按1.2.4測定方法重復性，得到桉油精峰面積的相對標準偏差為3.47%，表明方法的重復性較好。

2.5 加標回收率

如表1 所示，在桉油精的低、中、高3 個濃度下的平均回收率在91.3%～93.6%，RSD為2.00%～4.46%，說明本方法準確度良好。

表1 回收率試驗結果

2.6 樣品測定

由表2 可知，市售艾草貼中桉油精含量差異較大。可能有以下幾個原因：（1）不同生產企業使用了不同的原料，如艾草的品種、產地和種植環境不同；（2）不同企業在生產艾草貼時采用的加工工藝或生產流程也有所不同，可能導致桉油精含量的差異；（3）不同生產企業在質量控制方面可能存在差異，有些企業可能會嚴格監控產品中桉油精的含量。

表2 樣品含量測定結果

3 結論

本研究建立了氣相色譜法檢測艾草貼中桉油精含量的分析方法。結果表明，采用本方法測定桉油精含量線性范圍較寬、靈敏度高、準確度高，在實際樣品檢測中具有可行性，操作簡單、高效，可為企業控制產品質量提供較為理想的分析方法。