小反芻獸疫活疫苗免疫簡陽大耳羊抗體水平檢測與分析

曾海燕 福建省寧化縣動物疫病預(yù)防控制中心 福建寧化 365400

小反芻獸疫（PPR）又稱羊瘟，是由小反芻獸疫病毒（PPRV）引起的一種急性高度接觸性傳染病，主要感染山羊、綿羊等小反芻動物，易感羊群發(fā)病率和病死率可高達(dá)100%，對養(yǎng)羊業(yè)造成嚴(yán)重影響，被我國列為一類動物疫病。 由于該病暫時沒有特效的治療方法，當(dāng)前防控PPR 最有效的措施主要通過疫苗免疫，PPR 在福建省實行強(qiáng)制免疫，寧化縣近年來政府采購實行強(qiáng)制免疫的疫苗是小反芻獸疫活疫苗（Clone 9 株）， 該疫苗說明書上注明PPR 活疫苗的免疫持續(xù)期為36 個月。簡陽大耳羊是努比亞山羊雜交選育品種，該品種在寧化縣養(yǎng)殖數(shù)量、比例較大，南方牧業(yè)和群益現(xiàn)代等規(guī)模較大的羊養(yǎng)殖企業(yè)所養(yǎng)殖品種均為簡陽大耳羊。 2017 年，寧化縣群益現(xiàn)代農(nóng)業(yè)有限公司從四川簡陽市引進(jìn)的簡陽大耳羊檢測出PPR 抗體陽性羊，經(jīng)調(diào)查了解調(diào)入羊在種羊場免疫過PPR 疫苗，群益現(xiàn)代從PPR 非免疫備案場轉(zhuǎn)為免疫場。為了解小反芻獸疫活疫苗（Clone 9 株）免疫該品種羊的抗體水平， 結(jié)合寧化縣春秋防和免疫抗體監(jiān)測工作， 于2019-2022 年對該公司羊場開展PPR 活疫苗免疫簡陽大耳羊抗體水平的檢測， 為有效防控簡陽大耳羊PPR 合理制定其疫苗免疫程序提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗地點(diǎn) 寧化縣群益現(xiàn)代農(nóng)業(yè)有限公司種羊場。

1.2 試驗材料

1.2.1 試驗動物 試驗選取檢測無母源抗體， 臨床檢查為體質(zhì)健康、未免疫過疫苗、4 月齡左右的簡陽大耳羊后備母羊50 只。

1.2.2 疫苗 小反芻獸疫活疫苗屬于政府采購苗，天康生物股份有限公司生產(chǎn)， 規(guī)格50 頭份/瓶，批號2019009-2，有效期至2021-01-25。

1.2.3 檢測試劑 小反芻獸疫競爭ELISA 抗體檢測試劑盒，蘭州獸研生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.3 試驗方法

1.3.1 試驗設(shè)計試驗時間：2019 年9 月至2022 年10 月。 選擇寧化縣群益現(xiàn)代農(nóng)業(yè)有限公司種羊場后備母羊群，全群采血檢測其母源抗體，從中選擇母源抗體檢測陰性且臨床健康的4 月齡左右后備母羊50 只。 將選取的后備母羊分為兩組，試驗組羊40 只，佩帶區(qū)別于其他羊的黃色耳標(biāo)；對照組羊10 只，佩帶紅色標(biāo)識，兩組羊分欄飼養(yǎng)。 指定動物防疫員對試驗組羊接種小反芻獸疫活疫苗（Clone 9 株），對照組不接種該疫苗，且飼養(yǎng)方式不改變。 在試驗組羊接種疫苗后第30、180、360、540、720、900、1 080 d 同時對兩組羊頸靜脈采集血液樣本， 靜置、離心分離血清，送往實驗室進(jìn)行血清學(xué)抗體檢測。分析試驗羊在疫苗免疫后不同時期的免疫抗體水平。

1.3.2 免疫方法 用滅菌生理鹽水稀釋小反芻獸疫活疫苗，每毫升含活疫苗1 頭份，每只免疫羊頸部皮下注射1.0 mL。

1.3.3 血樣采集和檢測方法

1.3.3.1 血樣采集與處理 對試驗組羊接種疫苗后第30、180、360、540、720、900、1 080 d 按時進(jìn)行頸靜脈采血， 采集血液數(shù)量分別是38、30、35、30、33、32、32 份； 對照組羊在對應(yīng)時間同時采集血樣數(shù)量為10、9、8、7、8、7、8 份， 采集的血樣必須無溶血、無污染，靜置1 h 以上，4 000 r/min 離心3 min，分離血清，每管血清不少于1 mL，并放置-20 ℃以下冰箱中保存待檢。

1.3.3.2 檢測方法 依據(jù) 《小反芻獸疫診斷技術(shù)》GB/T 27982-2011，對所采集的血清樣本嚴(yán)格按照小反芻獸疫競爭ELISA 抗體檢測試劑盒說明書操作并進(jìn)行結(jié)果判定。

2 結(jié) 果

試驗組羊在免疫后30 d 檢測抗體陽性率達(dá)100%； 免疫后180 d 抗體陽性率96.7%； 免疫后360 d 抗體陽性率91.4%；免疫后540 d 抗體陽性率80.0%； 免疫后720 d 抗體陽性率69.7%； 免疫后900 d 抗體陽性率65.6%；免疫后1 080 d 抗體陽性率為59.3%（見表1、圖1）。對照組未檢出陽性樣品。

圖1 羊小反芻獸疫免疫抗體陽性率

在排除各種人為因素（如不規(guī)范的免疫操作、檢測失誤）的情況下，簡陽大耳羊按規(guī)定免疫程序接種小反芻獸疫活疫苗（Clone 9 株）后，羊群540 d 內(nèi)免疫抗體合格率達(dá)到80%， 無需再接種該疫苗；而720 d 后免疫抗體合格率低于70%， 應(yīng)適時加強(qiáng)免疫。

3 分析與討論

3.1 不同品種的羊PPR 免疫抗體水平存在差異不同品種的羊其遺傳基因、體質(zhì)、生理機(jī)能等不同，機(jī)體免疫應(yīng)答也會不同。 葉淑超等[1]對黃羊和湖羊等不同品種羊進(jìn)行PPR 免疫抗體監(jiān)測，結(jié)果表明不同品種的羊免疫PPR 疫苗后都能產(chǎn)生較好的免疫效果，但免疫抗體水平存在差異?？紤]免疫效果的品種差異， 針對寧化縣主要飼養(yǎng)品種簡陽大耳羊開展本次試驗。

3.2 母源抗體會干擾羔羊初免時免疫反應(yīng) 赫飛等[2]研究表明，羔羊首免受小反芻獸疫母源抗體的干擾，大部分母源抗體持續(xù)期1～3 個月，個別湖羊場4 月齡母源抗體還呈現(xiàn)較高的水平。 本試驗對照組檢測結(jié)果全部陰性， 說明該場沒有受到外來病毒的干擾。試驗表明，簡陽大耳羊在排除母源抗體影響和野毒抗體干擾的情況下，規(guī)范操作接種PPR 疫苗后，540 d 內(nèi)免疫抗體合格率達(dá)到80%以上，免疫后720～1 080 d，免疫抗體合格率逐漸下降，雖然部分羊免疫抗體持續(xù)陽性期達(dá)36 個月（1 080 d），但群體免疫抗體陽性率已低于70%，免疫抗體合格率低于國家標(biāo)準(zhǔn)。為了保持羊群較高的免疫抗體水平，疫苗免疫720 d 前后應(yīng)適時加強(qiáng)免疫。

3.3 不同企業(yè)生產(chǎn)的PPR 疫苗免疫抗體水平也存在差異 劉敏等[3]在小反芻獸疫專項監(jiān)測評估中對新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司、 西藏自治區(qū)獸醫(yī)生物藥品制品廠、 揚(yáng)州威克生物工程有限公司3 家企業(yè)生產(chǎn)的小反芻獸疫活疫苗（Clone9 株）進(jìn)行了對比試驗，結(jié)果3 家疫苗的免疫合格率均在73%以上，疫苗免疫原性較好，其中西藏自治區(qū)獸醫(yī)生物藥品制品廠的樣品免疫個體合格率最高。 本試驗所用疫苗是天康畜牧股份有限公司產(chǎn)品， 劉敏等對比試驗說明天康畜牧生產(chǎn)的PPR 疫苗免疫后的抗體陽性率比西藏獸醫(yī)疫苗更低。

3.4 不同場點(diǎn)類型的羊PPR 免疫抗體水平也存在差異 孫瑛瑛[4]研究表明，種畜場小反芻獸疫免疫效果較其他場點(diǎn)好，可能是種畜場環(huán)境條件、飼養(yǎng)管理水平較好的原因。 鑒于種畜場飼養(yǎng)管理的優(yōu)越性及種羊飼養(yǎng)年限較長，本試驗選擇群益現(xiàn)代種羊場，通過對簡陽大耳羊持續(xù)性地進(jìn)行PPR 免疫抗體監(jiān)測，掌握不同時間點(diǎn)的免疫抗體水平， 為寧化縣簡陽大耳羊養(yǎng)殖戶制定合理的小反芻獸疫免疫程序提供參考依據(jù)。