雞法氏囊素注射液對豬T 淋巴細(xì)胞E 玫瑰花環(huán)結(jié)合率影響的試驗

劉小龍 派生特（福州）生物科技有限公司 福州 350500

雞法氏囊素（Bursin，BS）作為雞法氏囊中具有免疫活性物質(zhì)的重要成分， 其不僅對禽類具有重要的免疫調(diào)節(jié)作用， 且對哺乳動物也具有明顯的免疫學(xué)及生理學(xué)活性[1-2]。

脫E 受體法是通過檢測T 淋巴細(xì)胞活性從而反映機體細(xì)胞免疫水平的一種常用試驗方法。 其原理是T 淋巴細(xì)胞的表面具有能與綿羊紅細(xì)胞（Sheep red blood cell，SRBC）表面糖肽結(jié)合的E 受體；當(dāng)兩者混合后，E 受體與SRBC 結(jié)合粘附于T 細(xì)胞的表面，呈現(xiàn)出花環(huán)狀。 若將T 淋巴細(xì)胞在45 ℃溫浴中可脫去表面E 受體，大大降低了花環(huán)結(jié)合率。 雞法氏囊素是雞法氏囊組織中具有生物學(xué)活性的小分子物質(zhì)，能促使脫E 受體的T 淋巴細(xì)胞重新合成E 受體，提高T 淋巴細(xì)胞E 玫瑰花環(huán)結(jié)合率。

本試驗通過脫E 受體法檢測雞法氏囊素注射液對豬T 淋巴細(xì)胞活性的影響，以期了解本公司制備的雞法氏囊素注射液的藥理學(xué)活性。

1 材料和儀器

1.1 試驗動物 健康成年公綿羊，由福建百橋湖羊養(yǎng)殖基地提供；健康育肥豬，由福建省福州市連江縣敖江鎮(zhèn)生豬屠宰場提供。

1.2 試劑 豬淋巴細(xì)胞分離液（購自天津灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司）；戊二醛、甲醇（購自西隴化工股份有限公司）；氯化鉀、姬姆薩染料、氯化鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、枸櫞酸、碳酸氫鈉、枸櫞酸鈉、葡萄糖（均購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司）。

1.3 儀器 TDZ5-WS 離心機 （購自湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司）； 光學(xué)顯微鏡ECLIPSE E100（購自Nikon 公司）；HH-S2 水浴鍋 （購自上海上登實驗設(shè)備有限公司）。

1.4 制品 參考專利文獻(xiàn)[3-4]制備雞法氏囊素注射液，批號分別為：BS001 批、BS002 批及BS003 批，由派生特（福州）生物科技有限公司提供。

2 方 法

將BS001 批、BS002 批及BS003 批雞法氏囊素注射液按國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的《轉(zhuǎn)移因子溶液國家藥品標(biāo)準(zhǔn)》 中的效力檢驗方法-脫E受體法進(jìn)行檢驗[3-4]，其操作具體如下。

2.1 試驗設(shè)計 試驗分成5 組，分別為：試驗組1、試驗組2、試驗組3、對照組及空白組。 其中，試驗組1、2 和3 分別加入BPP20140606 批、BPP20140607批及BPP20140608 批雞法氏囊素注射液待檢樣品0.1 mL， 再分別加入脫E 受體的T 細(xì)胞懸液0.2 mL； 對照組加入Hank′s 液0.1 mL 和脫E 受體的T 細(xì)胞懸液0.2 mL； 空白組加入Hank′s 液0.1 mL 和胸腺T 細(xì)胞懸液0.2 mL。 每組各做3 個重復(fù)管。37 ℃溫浴1.0 h 后，各組加入綿羊紅血球懸液0.2 mL，搖勻，以500 r/min 離心3 min，放入4 ℃冰箱，次日取出吸棄上清液，各加入固定液一滴于每管中，搖勻，靜置10 min，再加2 滴染色液，搖勻后室溫放置15 min 開始計數(shù)。

2.2 計數(shù) 分別統(tǒng)計計數(shù)板上64 個大方格的淋巴細(xì)胞總和(應(yīng)不少于200 個)與玫瑰花環(huán)結(jié)的細(xì)胞數(shù)(不少于3 個綿羊紅細(xì)胞結(jié)合的淋巴細(xì)胞)， 求出每組3 個平行管E 玫瑰花結(jié)合率平均值。

2.3 數(shù)據(jù)處理 所得數(shù)據(jù)用單因素方差分析和最小顯著性差異法（LSD）分析，P＜0.05 為差異顯著。

3 結(jié) 果

3.1 溫浴脫E 受體對花環(huán)結(jié)合率的影響 結(jié)果顯示（見表1），空白組E 玫瑰花環(huán)結(jié)合率為59.4%，顯著高于對照組的31.0%（P＜0.05）， 比對照組提高了28.4%，說明45 ℃溫浴對豬T 細(xì)胞膜E 受體有脫落作用。

表1 溫浴脫E 受體對花環(huán)結(jié)合率影響的結(jié)果/%

3.2 雞法氏囊素注射液對E 玫瑰花環(huán)結(jié)合率的影響 結(jié)果顯示（見表2），各試驗組E 玫瑰花環(huán)結(jié)合率分別為43.3% 、42.6%和43.5%，均顯著高于對照組的31.0%（P＜0.05）， 分別提高了12.2%、11.6%和12.5%， 說明雞法氏囊素注射液可使脫E 受體后的豬T 淋巴細(xì)胞恢復(fù)其E 受體功能。

表2 雞法氏囊素注射液對E 玫瑰花環(huán)結(jié)合率的影響 /%

4 討 論

本次試驗各試驗組豬T 淋巴細(xì)胞E 玫瑰花環(huán)結(jié)合率均顯著高于對照組（P＜0.05），分別比對照組提高了12.2%、11.6%和12.5%。 說明本公司制備的雞法氏囊素注射液可使脫E 受體后的豬T 淋巴細(xì)胞恢復(fù)其E 受體功能，提高豬T 淋巴細(xì)胞E 玫瑰花環(huán)結(jié)合率，具有增強豬細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)的功能。

雞法氏囊素（BS）作為一種新型的免疫增強劑，其生物學(xué)活性在多項試驗中得到證明，BS 具有提高機體免疫功能、增強疫苗免疫的效果，對病毒感染也有一定的預(yù)防作用，能使雜交瘤細(xì)胞凋亡[5-9]。 雞法氏囊素具有非常廣闊的市場前景， 關(guān)于雞法氏囊素的研究還在繼續(xù)， 希望在不久的將來研發(fā)出該類新藥。