角鯊烯環(huán)氧酶對宮頸鱗癌細胞增殖、凋亡及遷移侵襲的影響

夏娜娜,陳思穎,楊京蕊,康 敏,余敏敏

(南京中醫(yī)藥大學附屬南京醫(yī)院/南京市第二醫(yī)院,江蘇 南京 210003)

宮頸癌是困擾女性的常見惡性腫瘤之一,其發(fā)病率位居我國婦科惡性腫瘤前列[1]。宮頸癌的病理分型包括鱗癌、腺癌和腺鱗癌,其中鱗癌占比達到了75%～80%[2]。當前針對宮頸鱗癌的治療手段仍是以早期手術及中晚期放化療為主,然而對于晚期、復發(fā)或轉移的患者而言,雖經(jīng)放化療,預后仍較差。隨著現(xiàn)代分子生物學和基因組學的發(fā)展,腫瘤的靶向治療、免疫治療進行的如火如荼,但目前已有的靶向藥物針對宮頸鱗癌的治療療效有限。因此,對于宮頸鱗癌的治療有待于發(fā)現(xiàn)新的更可靠的治療靶點。

近年來,人們通過對腫瘤生物學和腫瘤代謝的深入探究,了解到膽固醇代謝重編程在腫瘤進展中的作用,主要表現(xiàn)為膽固醇合成的上調和相關代謝產(chǎn)物的異常聚集[3]。角鯊烯環(huán)氧酶(squalene epoxidase,SQLE)主要存在于內質網(wǎng)上,是膽固醇生物合成中的第二種限速酶,能夠催化角鯊烯轉化為2,3-環(huán)氧角鯊烯。研究表明,SQLE的表達與多種腫瘤如胰腺癌[4]、前列腺癌[5]和乳腺癌[6]等進展、侵襲和轉移緊密相關。然而,SQLE在宮頸鱗癌中的調控作用還未見報道。本研究首先通過生物信息學方法分析了SQLE在宮頸鱗癌和正常宮頸組織的mRNA及蛋白表達量差異,探討了SQLE與宮頸鱗癌臨床病理學特點之間的關系,然后評估了高表達SQLE mRNA宮頸鱗癌患者的總生存期(overall survival,OS)和無病生存期(disease free survival,DFS),最后以宮頸鱗癌細胞Siha為對象,用小干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制SQLE的表達及轉染重組質粒促進SQLE的表達,觀察SQLE基因對Siha細胞增殖、凋亡和遷移侵襲的影響及作用機制,為宮頸鱗癌的臨床治療提供新的思路與理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1生物信息學資料 GEPIA數(shù)據(jù)庫(gene expression profiling interactive analysis,http://gepia.cancer-pku.cn/)是一個基于癌癥基因組圖譜(TCGA)和基因型-組織表達數(shù)據(jù)庫的基因表達分析的網(wǎng)絡工具。SQLE在宮頸鱗癌與正常宮頸組織中的基因差異表達使用GEPIA數(shù)據(jù)庫篩選條件:Gene:SQLE, |Log2FC|≥1,P<0.05,Cancer name:CESC,同時使用此篩選條件分析SQLE的表達對宮頸鱗癌患者生存預后的影響;人類蛋白圖譜(HPA)數(shù)據(jù)庫(the human protein atlas,https://www.proteinatlas.org/) 可以在單細胞水平上實現(xiàn)下調蛋白的空間定位,并提供基因的組織學表達信息。使用HPA數(shù)據(jù)庫檢索條件:Gene:SQLE,Cancer Type:CESC,下載SQLE在宮頸鱗癌與正常宮頸組織的免疫組化染色圖片;使用UALCAN數(shù)據(jù)庫(http://ualcan.path.uab.edu/)檢索條件:Gene:SQLE, Cancer Type:CESC,分析SQLE的表達與臨床病理資料的相關性。

1.1.2細胞株 人臍靜脈內皮細胞HUVEC-12和人宮頸鱗癌細胞Siha購自中國科學院上海細胞研究所。

1.1.3主要試劑 DMEM培養(yǎng)基(Gibco,C11995500BT);胎牛血清(Gibco,10099141);CCK-8試劑盒(美國MCE,HY-K0301);RIPA裂解液(上海碧云天,P0013B);BCA試劑盒(上海碧云天,P0010S);結晶紫染液(上海碧云天,C0121)、凋亡檢測試劑盒(南京諾唯贊生物,A211-01)、GAPDH抗體(10494-1-AP)、SQLE抗體(12544-1-AP)、Bax抗體(50599-2-IG)、Bcl-2抗體(12789-1-AP)、E-cadherin抗體(10494-1-AP)、Vimentin抗體(10494-1-AP),購自武漢三鷹生物;PI3K(A0265)、p-PI3K(AP0854)、Akt(A11016)、p-Akt抗體(AP0140)購自武漢愛博泰克;LipofectamineTM2000轉染試劑盒(美國Invitrogen,11668019)。

1.2 方法

1.2.1細胞培養(yǎng)及轉染 采用含10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基,置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中孵育,取對數(shù)生長期的細胞進行實驗。在轉染前1天消化收集Siha細胞,接種細胞至6孔板中,使轉染細胞密度達到40%～60%,根據(jù)siRNA ∶DEPC水=1OD ∶125 μL配制儲存液,以脂質體 ∶siRNA儲存液為1 ∶1(V/V)的最優(yōu)比,按照說明書進行基因干擾處理。同樣細胞傳代3次達穩(wěn)定狀態(tài)后取細胞密度達到40%～60%時進行質粒轉染,轉染空載體質粒的Siha細胞為Vector組,轉染SQLE重組質粒的Siha細胞為SQLE組,依照試劑盒說明進行轉染操作。轉染48 h后收集細胞,顯微鏡觀察細胞形態(tài)并判斷轉染效率,Western blot法驗證轉染效果。

1.2.2CCK-8法檢測細胞增殖 將轉染后的細胞接種于濃度為5×103/孔的96孔培養(yǎng)板中,設置干擾對照組(si-NC組)、干擾處理組(si-SQLE組),過表達對照組(Vector組)及過表達處理組(SQLE組)。每組處理5個復孔,置于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱,分別培養(yǎng)24、48和72 h。每孔加入90 μL完全培養(yǎng)液及10 μL CCK-8,將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱避光孵育2 h,用酶標儀檢測A450nm值。

1.2.3流式細胞儀檢測凋亡率 細胞傳代鋪至6孔板,設置si-NC組、si-SQLE組、Vector組和SQLE組并轉染相關片段,6 h后換液,48 h后棄培養(yǎng)液,用PBS洗2次,用不含EDTA的0.25%胰酶消化,1 200 r·min-1離心5 min,得到細胞沉淀。用預冷的PBS洗滌細胞,加入100 μL Binding Buffer混勻細胞,然后每組細胞加Annexin V-FITC和PI各5 μL,室溫避光放置10 min,加入400 μL 1× Binding Buffer,混勻,在1 h內用流式細胞儀檢測。

1.2.4劃痕實驗檢測細胞遷移 取經(jīng)處理過的各組對數(shù)生長期Siha細胞鋪至6孔板,待細胞貼壁且密度達到90%時,用200 μL吸頭劃直線痕,每孔橫豎各劃3條,用PBS輕洗3次去除漂浮細胞,加入無血清培養(yǎng)基,每孔隨機選取5個視野并標記,分別在0和24 h用顯微鏡拍照。

1.2.5Transwell檢測細胞侵襲 將50 μL基質膠稀釋液加入小室上層中,放入恒溫培養(yǎng)箱至基質膠凝固。取經(jīng)處理過的對數(shù)生長期Siha細胞,以每孔數(shù)為2×105個重懸200 μL不含胎牛血清的培養(yǎng)液中,置于上層小室。同時,將含有20%胎牛血清的600 μL培養(yǎng)液放入下室。培養(yǎng)24 h后,去除上室細胞,用4%多聚甲醛固定下室細胞,0.1%結晶紫染色,晾干后拍照并計數(shù)。

1.2.6Western blot檢測細胞蛋白表達 向各組細胞中加RIPA裂解液提取總蛋白,BCA法測定蛋白濃度,加熱使蛋白變性。SDS-PAGE蛋白電泳,蛋白分離后,電轉至PVDF膜上。先用含5%脫脂奶粉封閉1 h,再以一抗工作液(1 ∶1 000)在4 ℃孵育過夜,最后以二抗(1 ∶5 000)室溫孵育1.5 h。洗膜,加入ECL化學發(fā)光劑,暗室顯影曝光。結果采用ImageJ軟件進行分析,實驗重復3次。

1.2.7qRT-PCR法檢測SQLE mRNA表達水平 收集細胞,用TRIzol試劑提取細胞總RNA,用反轉錄試劑盒將RNA反轉錄為cDNA。以cDNA為模板,GAPDH為內參,進行PCR擴增,引物序列:SQLE上游引物5′-CTCCAAGTTCAGGAAAAGCCTGG-3′,下游引物5′-GAGAACTGGACTCGGGTTAGCT-3′;GAPDH上游引物5′-CTGCCAACGTGTCAGTGGTG-3′,下游引物5′-TCAGTGTAGCCCAGGATGCC-3′。

2 結果

2.1 宮頸鱗癌及正常宮頸組織SQLE mRNA的表達GEPIA數(shù)據(jù)庫分析結果表明,SQLE在宮頸鱗癌組織中表達量明顯高于正常宮頸組織,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見Fig 1A。

2.2 HPA數(shù)據(jù)庫免疫組化結果通過HPA數(shù)據(jù)庫檢索免疫組織化學檢測標本,獲得宮頸正常組織標本2例,宮頸鱗癌標本17例,宮頸腺癌標本5例;免疫組織化學檢測結果(Fig 1B)顯示,宮頸正常組織樣本中均未檢測到SQLE蛋白的表達,宮頸鱗癌組織中13例SQLE蛋白表達呈陽性,宮頸腺癌組織中4例SQLE蛋白表達呈陽性。

Fig 1 Different expression and immunohistochemical staining

2.3 SQLE與宮頸鱗癌臨床病理特征相關性分析通過UALCAN數(shù)據(jù)庫進行SQLE基因表達與臨床病理資料相關性分析,納入306例腫瘤樣本、3例正常組織樣本。分析結果顯示在Stage分期、年齡、淋巴結轉移等亞組中,SQLE在宮頸鱗癌中的表達均高于正常組織,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),見Fig 2A-F。其中在宮頸鱗癌中不同年齡、Stage分期和淋巴結轉移等組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),見Fig 2A-E。在宮頸鱗癌的不同Stage分期中,SQLE在Ⅳ期的表達高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期;在宮頸鱗癌的不同淋巴結轉移中,SQLE在N0組的表達低于N1組。而在宮頸鱗癌腫瘤分級中組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),見Fig 2F。

Fig 2 Correlation analysis between SQLE gene expression and clinical pathological data

2.4 高表達SQLE mRNA的宮頸鱗癌患者的OS和DFS評估通過GEPIA數(shù)據(jù)庫OS和DFS結果顯示,SQLE mRNA低表達組宮頸鱗癌患者的OS較高表達組明顯延長,差異有統(tǒng)計學意義(HR=1.80,P<0.05);SQLE mRNA低表達組宮頸鱗癌患者的DFS較高表達組,差異無統(tǒng)計學意義(HR=1.60,P>0.05),見Fig 3。

Fig 3 Relationship between expression of SQLE and OS, DFS in patients with cervical squamous cell carcinoma

2.5 SQLE在宮頸鱗癌Siha和人臍靜脈內皮HUVEC-12細胞中的表達以人臍靜脈內皮HUVEC-12細胞作為對照,通過qRT-PCR和Western blot法檢測SQLE在人宮頸鱗癌Siha細胞中mRNA和蛋白表達水平,見Fig 4。結果顯示,Siha細胞SQLE mRNA和蛋白相對表達量分別為(2.35±0.55,1.33±0.15),明顯高于HUVEC-12細胞(1.00±0.04,1.00±0.09),差異具有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。

Fig 4 Differential expression of SQLE in Siha and HUVEC-12

2.6 SQLE對Siha細胞SQLE蛋白表達和細胞增殖影響轉染SQLE siRNA和過表達質粒48 h后,用qRT-PCR及Western blot法檢測人宮頸鱗癌Siha細胞中SQLE mRNA及蛋白表達,見Fig 5A-F。與si-NC組相比,si-SQLE轉染組SQLE mRNA及蛋白表達水平明顯降低(1.00±0.13vs0.19±0.06,1.00±0.05vs0.45±0.07)(P<0.01,P<0.05),見Fig 5A-C;與Vector組相比,SQLE轉染組SQLE mRNA及蛋白表達量增加(1.00±0.20vs3.22±0.54,1.38±0.12vs1.00±0.08)(P均<0.05),見Fig 5D-F。CCK-8結果顯示,與si-NC組細胞生長相比,作用24 h、48 h及72 h si-SQLE組Siha細胞增殖明顯抑制(0.52±0.08vs0.39±0.05,0.75±0.12vs0.56±0.10,1.13±0.10vs0.82±0.12),差異具有統(tǒng)計學意義(P均<0.05),見Fig 5G;與Vector組相比,作用24 h、48 h及72 h SQLE組Siha細胞增殖率增加(0.51±0.06vs0.72±0.08,0.65±0.09vs0.90±0.12,1.10±0.12vs1.46±0.16),差異具有統(tǒng)計學意義(P均<0.05),見Fig 5H。

2.7 SQLE對Siha細胞凋亡率的影響癌癥的發(fā)病機制可能與磷脂酰絲氨酸外化和DNA斷裂在內的凋亡過程有關,在藥物研發(fā)中靶向細胞凋亡可能是化療治療癌癥的最終過程。結果顯示,si-NC組和si-SQLE組Siha細胞的凋亡率分別為(6.10±1.10)%和(11.74±3.31)%。與si-NC組相比,干擾SQLE可促進Siha細胞凋亡(P<0.01),見Fig 6A-B。Vector組和SQLE組Siha細胞的凋亡率分別為(7.78±1.32)%和(2.70±0.54)%。與Vector組相比,過表達SQLE可明顯抑制Siha細胞凋亡(P<0.01),見Fig 6C-D。

Fig 6 Effect of SQLE on Siha cell apoptosis

2.8 SQLE對Siha細胞遷移能力的影響細胞遷移實驗結果顯示,si-NC組和si-SQLE組Siha細胞的遷移率分別為(47.37±4.98)%和(21.05±3.24)%,與si-NC組相比,si-SQLE組細胞遷移率明顯降低(P<0.01),見Fig 7A-B。Vector組和SQLE組Siha細胞的遷移率分別為(42.86±5.90)%和(72.73±8.15)%,與Vector組相比,過表達SQLE組細胞遷移率明顯增加(P<0.01),見Fig 7C-D。

Fig 7 Effect of SQLE on migration ability of Siha

2.9 SQLE對Siha細胞侵襲能力的影響Transwell實驗結果顯示,si-NC組和si-SQLE組Siha細胞的侵襲數(shù)目分別為(102±11)個和(67±6)個,與si-NC組相比,si-SQLE組細胞侵襲數(shù)目明顯降低(P<0.01),見Fig 8A-B。Vector組和SQLE組Siha細胞的侵襲數(shù)目分別為(105±8)個和(133±12)個,與Vector組相比,過表達SQLE組細胞侵襲數(shù)目增加(P<0.05),見Fig 8C-D。

Fig 8 Effect of SQLE on invasion ability of Siha

2.10 SQLE對Siha細胞凋亡及侵襲遷移相關蛋白的影響結果顯示,si-NC組和si-SQLE組Siha細胞中E-cadherin、Vimentin、Bcl-2和Bax蛋白相對表達量分別為(1.20±0.14vs2.10±0.27)、(1.88±0.17vs1.02±0.08)、(1.72±0.15vs1.00±0.12)和(1.29±0.12vs2.02±0.16)。可知與si-NC組相比,si-SQLE組Vimentin和Bcl-2蛋白水平明顯降低(P均<0.01),E-cadherin和Bax蛋白水平升高(P<0.01,P<0.05),見Fig 9A-B。Vector組和SQLE組Siha細胞中E-cadherin、Vimentin、Bcl-2和Bax蛋白相對表達量分別為(1.51±0.16vs1.00±0.06)、(1.05±0.14vs1.56±0.25)、(1.03±0.18vs1.59±0.19)和(1.44±0.15vs1.05±0.10)。與Vector組相比,過表達SQLE組Vimentin和Bcl-2蛋白水平明顯升高(P均<0.05),E-cadherin和Bax蛋白水平明顯降低(P均<0.05),見Fig 9C-D。

Fig 9 Effect of SQLE on expression of E-cadherin, Vimentin, Bcl-2 and Bax proteins in Siha

2.11 SQLE對PI3K/Akt信號通路相關蛋白表達影響PI3K/Akt信號途徑廣泛存在于各種血管細胞中,在細胞增殖、遷移和抗凋亡中起著重要作用。結果顯示,si-NC組和si-SQLE組Siha細胞p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt相對表達量分別為(1.85±0.19vs1.00±0.12)和(2.76±0.24vs1.86±0.16)(P均<0.05)。與si-NC組相比,si-SQLE組總PI3K蛋白及總Akt蛋白水平均無明顯影響,但p-PI3K和p-Akt蛋白水平降低(1.90±0.16vs1.00±0.12,1.92±0.18vs1.38±0.15)(P<0.01,P<0.05),見Fig 10A-B。Vector組和SQLE組p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt相對表達量分別為(1.72±0.15vs2.36±0.22)和(1.00±0.10vs2.65±0.29)(P<0.05,P<0.01)。同樣,兩組相比,其總PI3K蛋白及總Akt蛋白水平均無明顯變化,但與Vector組相比,SQLE組p-PI3K和p-Akt蛋白水平明顯升高(1.77±0.19vs2.69±0.24,1.00±0.06vs2.69±0.20)(P<0.05,P<0.01),見Fig 10C-D。

3 討論

目前全球范圍內宮頸癌占女性所有惡性腫瘤的第二位,僅次于乳腺癌[1]。宮頸鱗癌的病因至今尚未完全明確,該病的發(fā)生與基因、病毒感染、過早性生活等有關[2]。由于缺乏有效的輔助治療,宮頸鱗癌患者的預后較差,因此,迫切需要開發(fā)有效的靶標生物標志物或有前途的藥物來改善患者的預后。

SQLE位于人類染色體8q24.13上,是一種致癌基因,能夠影響膽固醇生物合成[4]。有研究顯示,膽固醇會減弱某些物質對細胞膜的破壞作用,從而保護線粒體內質網(wǎng)及細胞膜的功能完整性[7]。研究表明[8],SQLE通過調節(jié)膽固醇代謝促進多種人類癌癥的腫瘤發(fā)生和轉移。SQLE mRNA的表達與高危ER+乳腺癌明顯相關,SQLE可以通過增強膽固醇的合成,參與維持乳腺癌干細胞的干細胞性和乳腺腫瘤的進展[9]。膽固醇積累引起的SQLE減少通過激活β-catenin致癌途徑和p53腫瘤抑制通路失活,加重結直腸癌的進展[10]。SQLE在肝癌組織中表達上調,可以通過正向調控ERK信號通路促進肝癌細胞的增殖和遷移,與肝癌的發(fā)生發(fā)展密切相關[11]。在胰腺癌中,SQLE與胰腺癌細胞的放射抗性相關,改變細胞周期進展特征,誘導癌細胞遷移和侵襲,從而影響患者的預后[4]。以上可知,SQLE可作為許多腫瘤預后不良的主要標志物。然而,目前SQLE基因在宮頸鱗癌中的作用還未見報道。

本研究利用GEPIA數(shù)據(jù)庫和免疫組化證實,SQLE mRNA和蛋白在宮頸鱗癌組織中高表達,且SQLE mRNA高表達組宮頸鱗癌患者的OS明顯縮短,表明SQLE低表達的宮頸鱗癌患者預后可能會更好。通過UALCAN數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn),在宮頸鱗癌的不同Stage分期中,SQLE在Ⅳ期的表達明顯高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期(P<0.01);在宮頸鱗癌的不同淋巴結轉移中,SQLE在N0組的表達低于N1組(P<0.01),這表明SQLE可能抑制宮頸腫瘤細胞凋亡并促進其增殖及侵襲遷移。CCK-8實驗證實,干擾SQLE可抑制宮頸鱗癌Siha細胞增殖,過表達SQLE可促進Siha細胞增殖(P均<0.05),說明SQLE基因可促進宮頸鱗癌細胞增殖,但與膽固醇的合成變化有無直接關系還需要進一步研究。位于17pl3染色體上的TP53參與細胞增殖、細胞周期調控、DNA修復及促進細胞凋亡等過程,從而防止細胞轉移[12]。p53蛋白能夠調控Bcl-2和Bax的表達,從而在細胞凋亡中發(fā)揮作用。Bax主要參與細胞的內在凋亡信號通路,激活后從細胞質聚集于線粒體外膜,導致線粒體釋放細胞色素C,激活下游的caspase等蛋白,從而啟動細胞凋亡的過程。促凋亡蛋白Bax觸發(fā)內在通路的激活,這是開發(fā)治療藥物的絕佳靶點,目前正在進行臨床試驗。流式細胞術結果顯示,敲減si-SQLE組Siha細胞凋亡率明顯高于si-NC組,過表達SQLE組細胞凋亡率明顯低于Vector組(P均<0.01)。Western blot結果顯示,si-SQLE組Bcl-2/Bax比值為si-NC組的0.37倍,即兩者比值減小,可知干擾SQLE可以有效促進Siha細胞凋亡,過表達SQLE基因結果與之相反。上皮間質轉化EMT是宮頸癌轉移的重要機制之一,極化的上皮細胞通過重編程獲得間充質細胞的特征,促使細胞的運動性和遷移能力增強[13]。宮頸癌組織中上皮化分子標志物E-cadherin低表達和間質化分子標志物Vimentin高表達在腫瘤的侵襲和轉移過程中起到了重要的調控作用,是細胞惡性轉化的一個特征。本實驗結果顯示,干擾SQLE可以抑制Siha細胞遷移和侵襲,過表達SQLE能夠促進Siha細胞遷移和侵襲。類似報道是SQLE對肝癌細胞、胰腺癌細胞等侵襲遷移具有促進作用。

PI3K/Akt作為一種重要細胞內信號轉導通路,其已被證實在多種惡性腫瘤中激活,參與腫瘤細胞增殖、侵襲及凋亡。PI3K是一種磷脂酰肌醇激酶,可使下游的Akt蛋白活化,活化的Akt通過抑制線粒體途徑上調Bcl-2及下調Bax蛋白的表達,發(fā)揮抗凋亡作用[14]。恢復癌細胞凋亡的信號通路,誘導癌細胞凋亡,可從根本上解決宮頸鱗癌的問題。宮頸癌患者的不良預后與腫瘤是否浸潤、轉移密切相關,其中上皮間質轉化的作用尤為重要。研究顯示[15],PI3K/Akt通路激活后可降低細胞中E-cadherin的水平,并誘導Vimentin的表達,從而誘導EMT轉化并促進腫瘤轉移。本研究表明,干擾SQLE可以抑制p-PI3K、p-Akt的表達水平,阻斷PI3K/Akt信號通路;過表達SQLE可以增加p-PI3K、p-Akt的表達水平。提示SQLE可能通過促進PI3K/Akt信號途徑調控Siha細胞的增殖、凋亡及侵襲轉移過程。這與之前的研究相比,其結果具有較好的一致性。

綜上所述,本研究初步探索了SQLE在宮頸鱗癌進展中的作用。臨床研究顯示,與正常組織的mRNA和蛋白水平相比,宮頸鱗癌組織中SQLE的表達明顯上調,且SQLE高表達的患者預后較差。細胞實驗表明,干擾SQLE抑制Siha細胞增殖、侵襲、遷移及促進其凋亡,過表達SQLE促進Siha細胞增殖、侵襲、遷移及抑制其凋亡。機制研究表明,SQLE可能通過促進PI3K/Akt信號通路在宮頸鱗癌中發(fā)揮調控作用。所以SQLE有望成為治療宮頸鱗癌的潛在靶點。但本研究還未考察SQLE對宮頸鱗癌相關動物實驗的作用,這也將是下一步需要研究的內容。