小鵝瘟、鴨病毒性肝炎卵黃抗體高免蛋免疫程序的研究

陳生雷，王一平，陳欣婷，李鳳艷，舒秀偉

（ 遼寧益康生物股份有限公司，遼寧 遼陽 111000 ）

小鵝瘟（GP）是由小鵝瘟病毒（GPV）引起的一種急性或亞急性敗血病，主要病理變化表現為滲出性腸炎。GP主要侵害出殼后4～20 日齡雛鵝，傳染快且病死率可高達90%～100%，是危害養鵝業最嚴重的病毒性傳染病之一[1-4]。近年來，養鵝業發展迅猛，但GP的流行對養鵝業造成了巨大的經濟損失。鴨病毒性肝炎（DVH）是由鴨病毒性肝炎病毒（DHV）引起的一種急性、高度傳染性的病毒性疾病，主要感染21日齡以內的雛鴨，可引起典型的肝炎癥狀，雛鴨死亡率高達80%[5-7]。目前對以上兩種水禽疫病主要防治措施為應用卵黃抗體[8-10]。為使卵黃抗體效價達到較高水平，本試驗將GP、DVH（1型+3型）二聯滅活疫苗接種不同組別的商品蛋雞，分別在接種后不同時間檢測卵黃中的抗體效價，以篩選最佳高免蛋免疫接種程序。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗動物

試驗動物為110 日齡海蘭褐商品蛋雞，由遼寧益康生物股份有限公司提供。

1.1.2 疫苗、陽性血清和檢測用抗原

GP、DVH（1 型+3 型）二聯滅活疫苗（批號：GM202101，遼寧益康生物股份有限公司）。GP陽性血清、DHV LSE 株陽性血清、DHV QZE 株陽性血清（自制）；GP瓊擴抗原、DHV 1 型LSE 株檢驗抗原、DHV 3 型QZE 株檢驗抗原均由遼寧益康生物股份有限公司提供。

1.1.3 主要儀器

T25高速剪切機（IKA公司）、BSC-1304IIA2生物安全柜（北京東聯哈爾儀器制造有限公司）、3k15高速冷凍離心機（德國Sigms公司）等。

1.2 試驗設計

隨機將2 500只產蛋雞分成5組，每組500只雞。A組首次免疫劑量為1.0 mL/只；接種后14 d 進行第2 次免疫，劑量為1.0 mL/只；第2次免疫后21 d進行第3次免疫，劑量為1.5 mL/只。B組首次免疫劑量為1.0 mL/只；接種后14 d進行第2次免疫，劑量為1.5 mL/只；第2次免疫后21 d進行第3 次免疫，劑量為1.5 mL/只。C 組首次免疫劑量為1.0 mL/只；接種后21 d進行第2次免疫，劑量為1.0 mL/只；第2 次免疫后21 d 進行第3 次免疫，劑量為1.5 mL/只。D組首次免疫劑量為1.0 mL/只；接種后21 d進行第2次免疫，劑量為1.5 mL/只；第2次免疫后21 d進行第3次免疫，劑量為1.5 mL/只。E組不接種作為非免疫對照組。

1.3 測定指標及方法

1.3.1 安全性評價

免疫后每天觀察雞死亡、精神狀態、采食等情況至試驗結束，計算死淘率。每次免疫后14 d隨機抽取10只雞，觀察疫苗注射部位有無硬結、腫脹、潰爛等情況。第3次免疫后21 d，隨機抽取5只雞剖殺，觀察疫苗吸收情況。

1.3.2 抗體水平

分別于免疫前以及首免、第2 次免疫及第3 次免疫后14、21 d 分別取蛋進行GP、DVH 卵黃抗體效價測定，測定方法按照試劑盒說明書操作。

1.3.3 產蛋統計

免疫后每周進行產蛋統計，計算產蛋率。

2 結果與分析

2.1 安全性評價（見表1）

表1 安全性評價Tab.1 Safety evaluation

由表1 可知，免疫后，與不免疫對照組相比，4 個注射組雞群的精神狀態、采食、飲水等情況差異均不明顯。免疫雞檢查注射局部，均無腫脹、潰爛等異常情況發生。A 組死淘12 只（死淘率2.4%），B 組死淘15 只（死淘率3.0%），C組死淘14只（死淘率2.8%），D組死淘16只（死淘率3.2%），各組死淘差異不明顯。A 組疫苗已全部吸收，B組有2只雞注射部位可見小顆粒；C組疫苗已全部吸收，D組有1只雞注射部位可見未完全吸收的小顆粒。

2.2 抗體監測結果（見表2、表3）

表2 GP瓊擴抗體監測結果Tab.2 Results of GP AGAR amplification antibody monitoring

表3 DVH中和抗體監測結果Tab.3 Results of DVH neutralizing antibody monitoring

由表2、表3 可知，首免14 d 后即可產生抗體，GP、DVH 抗體均在3 免后21 d 達到高峰，GP 瓊擴抗體效價為1∶200～1∶280，DVH 抗體效價為1∶919.58～1∶1 591.71。B組、D組抗體水平高于A組和C組，說明抗體水平隨著免疫劑量增加而升高；A組和C組、B組和D組首免和第2次免疫間隔時間不同，抗體增長差異不顯著。

2.3 不同免疫方案對蛋雞產蛋率的影響（見表4）

表4 不同免疫方案對蛋雞產蛋率的影響Tab.4 Effects of different immunization regimens on laying rate of laying hens 單位：%

由表4 可知，三免后21 d，免疫組產蛋率為80.00%～83.43%，對照組的產蛋率為85.43%，提示大劑量和高頻次免疫會對產蛋雞的產蛋性能產生一些應激性的影響，臨床表現為產蛋率下降，免疫組比對照組下降2.34%～6.36%。

3 討論

GP 和DVH 是水禽疫病防控的重點疾病[11-14]，對其預防疾病控制的主要方法是應用GPV、DHV 制備滅活疫苗免疫商品蛋雞。具體方法是經檢測達到使用標準的種蛋提取卵黃抗體，制備成凍干或水劑的抗體制劑，對雛鴨和雛鵝進行免疫以達到保護作用?？贵w的提取方法很多，如何高效地提取卵黃中的抗體并有效利用抗體，達到降低成本提升效率是相關研究的最終目標，實現這一降本增效的目標的基本環節是雞群免疫和保證抗體持續期[15]。本研究為優化免疫程序，通過設置不同劑量和免疫間隔時間對試驗雞進行GP、DVH（1型+3型）二聯滅活疫苗免疫，在免疫過程中的不同時間測定卵黃GP瓊擴抗體、DVH中和抗體水平，同時對疫苗免疫后的安全性包括接種部位吸收情況、死淘率和產蛋率進行統計比較。結果表明，疫苗免疫后試驗雞局部吸收良好，且死淘率與對照組相比差異不顯著。產蛋率結果顯示，免疫組由于經過3次不同劑量的滅活疫苗免疫，產蛋率略低于對照組，說明高劑量免疫會對雞群產蛋率產生一定影響。3免后21 d，B組、D組GP瓊擴抗體、DVH中和抗體高于A組、C組，說明抗體水平隨著免疫劑量增加而增加；各組首免和第2次免疫間隔不同時間比較，間隔21 d 組雞抗體水平略高于較間隔14 d，且產蛋率也高于間隔14 d。綜上，高劑量和高頻次免疫時，免疫間隔時間延長對機體的應激恢復會有一定的效果。通過上述試驗結果表明，適當增加免疫劑量可提升抗體水平，但同時也會對雞群的產蛋性能產生一定影響，在增加免疫劑量的同時也要考慮應激引起的生產性能下降。因此，應綜合考慮優化免疫程序，包括劑量、頻次和間隔時間，以保持較好的抗體水平和生產性能。

4 結論

本研究結果顯示，優化最佳免疫程序為首次免疫劑量1.0 mL/只，21 d 后進行第2 次免疫（劑量為1.5 mL/只），21 d 后進行第3 次免疫（劑量為1.5 mL/只），3 免后21 d 可采集種蛋進行抗體制備，后期通過持續的抗體監測調整維持免疫的時間和劑量。