不同產地赤芝藥材的質量分析

曾 秒，謝孟君，祝子喻，俞月婷，張 梅

不同產地赤芝藥材的質量分析

曾 秒，謝孟君，祝子喻，俞月婷，張 梅*

成都中醫藥大學藥學院 西南特色中藥資源國家重點實驗室，四川 成都 611137

對不同產地批次赤芝進行全面的質量評價，為靈芝藥材質量標準的完善及優質赤芝原料藥的篩選提供依據。收集15批次各GAP基地的靈芝藥材，參照《中國藥典》2020年版方法及行業通用方法，考察其水分、灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物，分別采用比色法、柱前衍生高效液相色譜法（PMP-HPLC）、高效凝膠滲透色譜法（HPGPC）測定多糖含量并進行比較；采用比色法測定三萜甾醇含量，HPLC法進行靈芝酸A一測多評；同時對15批赤芝的HPLC指紋圖譜進行差異比較。15批赤芝藥材均符合《中國藥典》2020年版的質量標準要求，指紋圖譜聚類分析和主成分分析（principal component analysis，PCA）結果表明山東聊城產赤芝能明顯區別于其他批次樣品。15批赤芝藥材均符合《中國藥典》質量標準，說明國內赤芝GAP基地種植質量良好；同時山東聊城產赤芝能顯著區別于其他產地批次赤芝樣品，主要體現在三萜甾醇等有效成分的含量更高。

靈芝；質量評價；主成分分析；多糖；三萜；指紋圖譜

靈芝是多孔菌科真菌靈芝的子實體，由于極高的藥用價值而被大規模商業化種植，其中赤芝(Leyss. ex Fr.) Karst.和紫芝Zhao Xu et Zhang被納入《中國藥典》2020年版[1]。古代認為靈芝具有死而復生、延年益壽的功效，中醫用于心神不定、不茶不飯、失眠夢多、肺氣虛證咳喘等。現代研究表明，靈芝在肝損傷[2]、癌癥[3-4]、心血管疾病[5]、大腦損傷[6]、氧化損傷[7-8]、高血糖[9-10]、炎癥[8,11]、免疫[12]、衰老[13]等疾病上面發揮了巨大作用，有非常重要的研究價值和市場前景。目前靈芝在食品藥品方面已經有廣泛的應用[14]，我國的靈芝GAP基地有必要按照更嚴格的質量標準，逐步規范化和標準化，不斷推動靈芝產業的發展。

靈芝的主要化學成分為多糖類、三萜類化合物、甾醇、氨基酸類、生物堿、核苷類、脂肪酸類以及微量元素等[15-16]，其中多糖和三萜是其主要活性成分，也是研究最多的成分。經過多年的培育，靈芝形成了諸多品種，形態、質地各異，成分含量也有所區別，有效成分質量控制的方法也多種多樣[17-18]，其中赤芝在我國應用廣泛，在各個省市都有擴大栽培的趨勢，但赤芝培育的品種繁多，同時GAP基地的種植水平不一。

本實驗選用15批不同GAP種植基地的赤芝藥材，對其進行全面的質量分析，為不同GAP基地赤芝的種植現狀提供質量依據。

1 材料

1.1 藥材來源

分別從5個省份的11個靈芝GAP種植基地收集15批赤芝藥材，由廣東省微生物研究所食用菌中心謝意珍研究員鑒定為多孔菌科真菌赤芝(Leyss. ex Fr.) Karst.的干燥子實體。藥材樣品來源見表1。

表1 靈芝供試樣品編號、各培育品種及GAP種植基地

1.2 試劑

對照品齊墩果酸（質量分數為98%，批號MUST-16070406，）購于中國科學院成都生物研究所；葡萄糖（質量分數為99.5%，批號11083-201609）、巖藻糖（質量分數為99.7%，批號112014-201601）購于中國食品藥品檢定研究院；來蘇糖（質量分數為99%，批號L115557）、甘露糖（質量分數為98%，批號D121716）、葡萄糖醛酸（質量分數為98%，批號C10584817）、半乳糖（質量分數為97%，批號G100368）購于上海阿拉丁試劑有限公司；右旋糖酐相對分子質量標準（套）對照品（批號140637～646-201203）購于Sigma公司；靈芝酸A（質量分數為99%，批號A0842）、靈芝酸F（質量分數為97.3%，批號A0917）、靈芝酸H（質量分數為97.2%，批號A0931）、靈芝酸B（質量分數為99%，批號A0916）、靈芝烯酸B（質量分數為99%，批號A0923）、靈芝酸C2（質量分數為99%，批號A0911）、靈芝烯酸C（質量分數為99%，批號A0924）、靈芝烯酸D（質量分數為98.7%，批號A0907）、靈芝酸D（質量分數為99%，批號A0906），靈芝酸G（質量分數為99%，批號A0909）均購于上海詩丹德標準技術服務公司；乙腈為色譜級；三氟乙酸、甲醇、乙醇、濃硫酸、蒽酮、冰醋酸、高氯酸、醋酸乙酯、香草醛、疊氮化鈉、硫酸鈉、鹽酸、氫氧化鈉、醋酸銨等均為分析級。

1.3 儀器

GZX-9070MBE型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海一恒科學儀器有限公司）；SX-2-5-12型箱式電阻爐（北京科偉永興儀器有限公司）；UV3200S型紫外分光光度計儀（上海美普達儀器有限公司）；安捷倫1200高效液相色譜儀（美國Agilent公司）、示差折光檢測器（美國Agilent公司）。

2 方法與結果

2.1 一般性檢查及浸出物

按照《中國藥典》2020年版四部通則0832項下的烘干法和2302項下的灰分測定[19]，檢測15批樣品的水分及灰分，結果見表2。15批樣品均滿足《中國藥典》的要求，水分為1.47%～7.28%，灰分在0.69%～2.79%。

因靈芝水溶性浸出物得率太低，同時為方便同步進行多糖相對分子質量分布、多糖含量、單糖組成測定，水溶性浸出物參考《中國藥典》2020年版設計方案[1]。取赤芝粉末（過2號篩）8 g，精密稱定，置500 mL圓底燒瓶中，精密加水240 mL，靜置1 h，加沸石2～4顆，置電熱套中，連接回流裝置，加熱至沸騰，并保持微沸4 h，趁熱抽濾，用25 mL熱水潤洗3次，往濾渣及濾紙中再精密加水240 mL，加熱回流3 h，操作同上，合并濾液。加水至640 mL，搖勻，量取320 mL（約為4 g樣品），置已恒定質量的蒸發皿中，水浴蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定干燥物質量，結果見表2。15批樣品的水溶性浸出物含量符合《中國藥典》2020年版的要求，質量分數為6.50%～16.43%。

表2 赤芝質量評價結果

靈芝醇溶性浸出物參照《中國藥典》2020年版通則2201[19]，以水溶性浸出物的方法，將溶劑替換為乙醇，設計步驟如下：靈芝子實體打粉，過篩，取2～5號篩之間的粉末約4 g ，精密稱定，置250mL平底燒瓶中，精密加入無水乙醇100 mL，加沸石2～4顆，密塞，靜置1 h，連接回流裝置，90 ℃水浴回流1 h（沸騰后開始計時），關閉水浴鍋電源并加入冷水降溫后，迅速取下平底燒瓶，及時密塞，流水冷卻至室溫后，在真空度?0.01～?0.03 MPa下抽濾，抽干后每次用25 mL無水乙醇洗滌平底燒瓶、濾器和濾渣，共3次，濾液轉移至已干燥至恒定質量的蒸發皿中，在90 ℃水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定質量，以干燥物來計算醇溶性浸出物含量。結果顯示15批樣品的醇溶性浸出物質量分數為2.45%～6.39%，其中S13（山東聊城）含量最高。

2.2 比色法測定多糖含量

取“2.1”項下的水溶性浸出物，參照《中國藥典》2020年版中靈芝多糖的含量測定方法（硫酸蒽酮法測定）[1]，以葡萄糖質量分數為橫坐標（），峰面積為縱坐標（），制定標準曲線為＝7.095 4＋0.037 8，2=0.999 9，計算供試品溶液中葡萄糖的含量，結果見表2。15批樣品均符合《中國藥典》2020年版要求，質量分數范圍為1.04%～3.19%，其中樣品S11（陜西漢中瀘農1號）的多糖含量最高。

2.3 柱前衍生高效液相色譜法（PMP-HPLC）測定多糖含量[20]

2.3.1 對照品衍生化溶液的制備 取甘露糖、葡萄糖醛酸、半乳糖、巖藻糖各約10 mg，葡萄糖約100 mg，精密稱定，用純凈水溶解并定容至50 mL量瓶中，搖勻，作為混合對照品溶液備用；取對照品來蘇糖約10 mg，精密稱定，用純凈水溶解并定容到25 mL，搖勻，作為內標對照品溶液備用；精密移取0.125 mL混合對照品溶液和0.125 mL內標，混勻。加入0.15 mol/L的NaOH溶液0.3 mL和0.1 mol/L的PMP溶液0.5 mL，充分混勻后，70 ℃水浴30 min，冰浴終止反應，加入0.15 mol/L的鹽酸0.32 mL和純凈水0.65 mL，充分混勻后，12 000 r/min室溫離心10 min，吸取上清液適量即得。

2.3.2 供試品衍生化溶液的制備 將“2.1”項下8 g靈芝子實體的水提物，定容至10 mL，經0.22 μm濾膜過濾后，取0.25 mL，加入0.250 mL三氟乙酸溶液，充氮氣，酒精噴燈封管，置110 ℃烘箱中水解4 h，取出，放至室溫；加入0.5mL甲醇，60 ℃以下真空減壓干燥，反復處理3次，至水解液干燥完全；殘渣精密加入0.125 mL熱水和0.125 mL內標（來蘇糖），超聲30 s，使殘渣完全溶解并與內標充分混勻，加入NaOH 0.3 mL和PMP 0.5 mL，充分混勻后，70 ℃水浴保溫30min，迅速取出，冰浴30 s終止反應，加入0.32 mL的HCL和0.65 mL 純凈水，充分混勻后，12 000 r/min室溫離心10 min，小心吸取上清液適量，即得。

2.3.3 色譜條件 色譜柱Waters Symmetry Shield RP18（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫30 ℃，以18%乙腈-82% 0.1 mol/L醋酸銨水溶液為流動相等度洗脫，體積流量為1 mL/min，檢測波長250 nm，進樣量20 μL，混合對照品色譜圖和供試品衍生化溶液色譜圖見圖1。

2.3.4 方法學考察 精密度、穩定性、重復率、加樣回收率試驗根據文獻方法[20]操作，RSD均小于3%，方法學考察結果符合要求。

2.3.5 樣品的測定將所測供試品單糖按以下公式計算含量（計算時需扣除子實體的水分），單糖含量見表3。合計后得到多糖含量，結果見表2。多糖含量在0.33%～0.95%，均符合《中國藥典》2020年版規定，其中S13（山東聊城）含量最高。

單糖量＝(u/s)×s×(/)×100

u為樣品溶液中目標物與內標物的峰值響應比，s為標準溶液中目標物與內標物的峰值響應比，s為經衍生化的標準溶液等分試樣中相關分析物的量，為相對于樣品溶液體積的稀釋系數，為制備樣品溶液所用靈芝子實體的質量

圖1 混合對照品(A)和供試品(B) 衍生化溶液色譜圖

2.4 高效凝膠滲透色譜法（HPGPC）測定多糖含量[21]

不同來源或種類的靈芝，其多糖成分的相對分子質量有較大差異，HPGPC法作為測定多糖相對分子質量及含量的常見分析手段，已經成為靈芝質量評價的行業共性方法，本實驗也將其納入不同產地赤芝質量考察的標準之一。

2.4.1 混合對照品溶液的制備 取右旋糖酐及葡萄糖對照品約50 mg，精密稱定，分別加超純水溶解，定容至5 mL量瓶中，制成10 mg/mL的右旋糖酐對照品儲備液和葡萄糖對照品儲備液。混合對照品參數見表4。

表3 15批赤芝中單糖含量

表4 右旋糖酐對照品參數

2.4.2 供試品溶液的制備 取“2.1”項下的水溶性浸出物濾液160 mL（約2 g樣品），沸水浴蒸干，用5 mL熱水超聲溶解，緩慢加入無水乙醇至總體積約40 mL，超聲，4 ℃下靜置12 h，4000 r/min，4 ℃離心30 min，棄上清液后真空干燥，沉淀物用熱水溶解并轉移至10 mL量瓶中，密塞封口，50 ℃超聲10 min，放至室溫，定容至刻度線，搖勻，取溶液約5 mL，室溫下4000 r/min離心10 min，上清液過0.45 μm微孔濾膜，取3 mL左右續濾液備用。

2.4.3 色譜條件 采用串聯凝膠色譜柱TSK-GEL（300 mm×7.8 mm，10 μm），柱溫35 ℃；流動相為0.71% Na2SO4硫酸鈉水溶液，體積流量0.5 mL/min，進樣量20 μL。

2.4.4 標準曲線繪制 以各對照品峰位相對分子質量的對數作為縱坐標（），峰頂時間作為橫坐標（），凝膠滲透色譜專用軟件校正標準曲線得＝10.491 4?0.162 4，2=0.998 2。

2.4.5 方法學考察 精密度、穩定性、重復性、加樣回收率試驗按照參考文獻方法[21]操作，RSD均小于3%，方法學考察結果符合要求。

2.4.6 樣品測定 將值設為5000和400 000代入標準曲線公式，求得對應峰位相對分子質量下的峰頂時間1和2，對各供試品圖譜1到2之間的響應面積進行積分，獲得峰位相對分子質量5000～400 000的響應面積S1；積分標識相對分子質量為5000～670 000的右旋糖酐對照品圖譜，獲得各進樣對照品的對應峰面積，并統一折算成10 mg/mL濃度的峰面積，然后求得平均峰面積S2。代入下式求得多糖含量，具體測定結果見表2。結果表明15批赤芝藥材多糖含量在0.72%～2.51%，其中赤芝S11（陜西漢中瀘農1號）的多糖含量最高。

多糖含量＝S1/S2×10×10/子實體質量/1000

2.5 比色法測定總三萜及甾醇含量[1]

2.5.1 對照品溶液的制備 取干燥至恒定質量的齊墩果酸對照品約10 mg，精密稱定，加甲醇溶解并定容至50 mL量瓶中，制成含齊墩果酸0.2 mg/mL的對照品儲備液。

2.5.2 供試品溶液的制備 靈芝子實體打粉，過篩，取2～5號篩之間的粉末約2 g，精密稱定，置150 mL具塞錐形瓶中，精密加入無水乙醇100 mL，加沸石2～4顆，密塞，稱定質量，靜置1 h，水浴回流1 h，冷卻至室溫，稱定質量，用無水乙醇補足失重，搖勻，取適量過0.22 μm微孔濾膜，取續濾液約2 mL備用。

2.5.3 標準曲線的繪制 精密量取對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，分別置15 mL具塞試管中，揮干，預冷2 min后精密加入新配制的香草醛冰醋酸溶液（精密稱取香草醛0.5 g，加冰醋酸使溶解成10 mL，即得）0.2 mL，高氯酸0.8 mL，具塞，從冰浴取出，渦旋混勻，移入70 ℃水浴中加熱15 min，立即取出置冰浴中冷卻5 min，取出置室溫水中回溫5 min，精密加入醋酸乙酯4 mL，渦旋混勻，采用石英比色皿，以相應試劑為空白，照紫外-可見分光光度法（通則0401）[19]，在546 nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標（），濃度為橫坐標（），繪制標準曲線＝8.095 4＋0.038 8，2=0.999 9。

2.5.4 樣品的測定 精密量取供試品溶液0.2 mL，置15 mL具塞試管中，照標準曲線制備項下的方法，自“揮干”起，同法操作，測定吸光度，從標準曲線計算供試品溶液中齊墩果酸的含量，結果見表2。15批赤芝都滿足《中國藥典》2020年版要求，范圍在0.70%～1.74%，其中赤芝S13（山東聊城產）三萜甾醇含量最高。

2.6 HPLC法測定靈芝酸含量[22]

2.6.1 色譜條件 色譜柱Waters Symmetry Shield RP18（250 mm×4.6 mm，5 μm），體積流量1 mL/min，檢測波長257 nm，進樣量20 μL，柱溫20 ℃。以0.1%磷酸水（A）-乙腈（B）作為流動相，洗脫程序為0～10 min，85%～75% A；10～58 min，75%～71% A；58～60 min，71%～69% A；60～68 min，69% A；68～78 min，69%～64% A；78～98 min，64% A；98～100 min，64%～0% A。

2.6.2 混合對照品溶液的制備 取靈芝酸A約4 mg，靈芝酸B、靈芝烯酸B、靈芝酸C2、靈芝烯酸C、靈芝烯酸D、靈芝酸D、靈芝酸F、靈芝酸G、靈芝酸H各約2 mg，精密稱定，用甲醇溶解并定容到10 mL量瓶中，搖勻備用。制得各對照品溶液均為0.2 mg/mL的對照品溶液。

2.6.3 靈芝酸A對照品溶液的制備 取靈芝酸A對照品約10 mg，精密稱定，用甲醇溶解并定容到25 mL量瓶中，配制成0.442 mg/mL的靈芝酸A的對照品原液，再逐步稀釋為0.331 500、0.221 000、0.110 500、0.055 250、0.027 625 mg/mL的對照品溶液。

2.6.4 供試品溶液的制備 精密稱定赤芝粉末3 g，加入150 mL醋酸乙酯，水浴回流1 h，抽濾，用25 mL醋酸乙酯洗滌3次，合并濾液，85 ℃水浴揮干，用甲醇5 mL溶解殘渣并定容至5 mL量瓶中，搖勻，過0.22 μm微孔濾膜，備用。

2.6.5 標準曲線的繪制 將“2.6.3”項不同質量濃度的靈芝酸A對照品溶液分別進樣，以質量濃度為橫坐標（），以峰面積為縱坐標（）繪制標準曲線，得＝11 290.231 6＋11.852 7，2＝0.999 9。

2.6.6 方法學考察 精密度、穩定性、重復率、加樣回收率試驗根據參考文獻方法[22]，RSD均小于3%，方法學考察結果符合要求。

2.6.7 樣品測定 將混合對照品和供試品溶液分別進樣，色譜圖見圖2。以靈芝酸A標準曲線進行計算，其他目標峰按換算因子全部折算為靈芝酸A，求和即得靈芝酸總量，結果見表2。結果表明15批赤芝藥材靈芝酸含量在0.05%～0.79%，其中山東聊城產赤芝S4、S9的靈芝酸含量較高。

靈芝酸量＝(u/s)×s×(/)×100

u為樣品溶液中目標物的峰面積，s為標準溶液中靈芝酸A的峰面積，s為標準溶液中靈芝酸A的濃度，為制備樣品溶液的靈芝子實體質量，為與靈芝酸A的相對響應因子

1-靈芝烯酸C 2-靈芝酸C2 3-靈芝酸G 4-靈芝烯酸B 5-靈芝酸B 6-靈芝酸A 7-靈芝酸H 8-靈芝烯酸D 9-靈芝酸D 10-靈芝酸F

2.7 指紋圖譜的建立

2.7.1 供試品溶液的制備 取靈芝細粉約3 g，精密稱定，加入250 mL潔凈干燥平底燒瓶，精密加入150 mL醋酸乙酯，加沸石2～3顆，具塞，靜置浸泡1 h，水浴回流1 h，抽濾，用25 mL醋酸乙酯洗滌平底燒瓶、濾紙和濾渣，重復3次，濾液入潔凈干燥蒸發皿，水浴揮干，用5 mL甲醇溶解殘渣并完全轉移至5 mL量瓶中，定容，搖勻，過0.22 μm微孔濾膜，備用。

2.7.2 混合對照品溶液的制備 同“2.6.2”項

2.7.3 色譜條件 同“2.6.1”項。

2.7.4 方法學考察 同時取赤芝S15的供試品溶液進行精密度、重復性和穩定性的驗證，各項RSD均小于3%，方法學考察結果符合要求。

2.7.5 指紋圖譜的建立 將15批赤芝的指紋圖譜導入《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統》（2012版），以赤芝S15指紋圖譜作為參考譜圖，進行峰匹配，以中位數生成對照圖譜，得到15批赤芝指紋圖譜和對照指紋圖譜見圖3，共得到23個共有峰，同時對指紋圖譜進行相似度評價，結果見表5。

2-靈芝烯酸C 3-靈芝酸C2 5-靈芝酸G 6-靈芝烯酸B 8-靈芝酸B 12-靈芝酸A 15-靈芝酸H 17-靈芝烯酸D 19-靈芝酸D 23-靈芝酸F

表5 15批赤芝指紋圖譜相似度

以共有峰的峰面積為變量，將15批赤芝的峰面積經歸一化處理后，進行主成分分析（principal component analysis，PCA），自動擬合得到4個主成分，2為0.969，2為0.57（＞0.5），模型擬合較好且有良好的預測性，結果見圖4。15批赤芝分成了3組，山東聊城的赤芝（S4、S9、S13）與其余批次的赤芝差異較大。

根據PCA的結果，將15批赤芝分成2組，一組為山東聊城組，一組為其他產地，進行正交偏最小二乘判別分析（orthogonal partial least squares discriminant analysis，OPLS-DA）（圖5），自動擬合得到6個主成分，2為0.936，2為0.96。選擇VIP≥1的色譜峰作為區分山東聊城與其他產地赤芝的標志差異物（色譜峰以保留時間計），VIP值見圖6，其中VIP≥1的色譜峰有8個，分別為峰19（靈芝酸D）、18、4、9、15（靈芝酸H）、23（靈芝酸F）、21、5（靈芝酸G）。

圖4 15批赤芝PCA圖

圖5 15批赤芝OPLS-DA圖

圖6 15批赤芝的VIP圖

3 討論

本實驗對15批不同產地和批次的赤芝，進行了全面質量控制方法考察，15批赤芝全部符合《中國藥典》2020年版的要求。靈芝產業龐大，市面上存在跟風種植的情況，針對未來中藥材產業升級以及綠色農業的趨勢，國內需要加快GAP的建設，中國作為靈芝藥材大國和市場需求大國，靈芝GAP基地更應該以嚴格的質量標準，逐步規范化、標準化，不斷推動靈芝產業的發展。

對比3種多糖質量評價方法的結果可知，測定方法不同，測定結果有顯著差異。靈芝多糖種類繁多，結構復雜，是由3股單糖鏈構成的具有螺旋狀立體構型（三維結構）的葡聚糖[23]，主要由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、巖藻糖、木糖和阿拉伯糖通過不同比例和不同糖苷鍵類型連接構成，活性多糖有效成分附著在細胞壁內側，大部分直接與蛋白質形成分子絡合物[24]，而3種多糖檢測方法都是基于醇沉除雜工藝，因此非糖類物質容易與目標多糖同步沉淀成為代測物。硫酸蒽酮法測定總多糖，原理是氧化出醛基與蒽酮結合并顯色，在固定波長下檢測，這些非糖類化合物會參與顯色反應，或本身在測定波長下以強吸收的方式形成干擾誤差。HPGPC法的原理是基于不同分子量在凝膠色譜柱中的分離情況，因此待測定物的計算也會受到雜質干擾。總之，可以綜合3種多糖的考察方式，視實際情況選擇評價手段。

對靈芝藥材中三萜類成分進行含量測定結果表明，甾醇作為靈芝最重要的活性成分之一，是靈芝質量的重要指標，《中國藥典》測定靈芝三萜和甾醇，但由于靈芝三萜提取率低、雜質多，紫外分光光度法的測定容易受到提取物中皂苷、油酸等物質干擾，導致特異性不強，三萜甾醇含量與實際有較大的差異；目前從靈芝中已分離出300多種三萜類成分[25]，其中靈芝酸是最主要的成分，針對三萜中的靈芝酸，以靈芝酸A來計算10種靈芝酸含量，該測定物質較明確，但未將甾醇部位納入靈芝活性成分的考察。

指紋圖譜的PCA分析和OPLS-DA分析結果中山東聊城的S13、S4、S9與其他批次的差異較大，其中S13中三萜甾醇含量最高，靈芝酸含量最低，可能是S13中中性三萜和甾醇等脂溶性成分的含量更高；S4、S9中靈芝酸含量較高，三萜甾醇含量居中。

山東聊城GAP基地赤芝在三萜或甾醇等脂溶性成分上區別于其他產地批次的赤芝，經VIP分析得到8個與其他批次不同的主要色譜峰，可見靈芝酸類成分在區分山東聊城和其他產地的靈芝上具有重要意義，同時挖掘指紋圖譜的標志差異峰也可以為不同產地靈芝的質量評價提供依據。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Quality evaluation offrom different areas

ZENG Miao, XIE Meng-jun, ZHU Zi-yu, YU Yue-ting, ZHANG Mei

State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137, China

A comprehensive quality evaluation analysis of Chizhi [(Leyss. exFr.) Karst.]samples from different batches or origins was conducted to provide a basis for the improvement of the quality standard of Lingzhi () and to screening of high-qualitymaterials.Referring to the method of2020 edition and common approaches in this field, fifteen batches ofherbs from each GAP base were collected and examined for moisture, ash, water-soluble leachate, alcohol soluble leachate, the polysaccharide content was compared by determining colorimetric method, precolumn derivatization high performance liquid chromatography (PMP-HPLC), and high performance gel permeation chromatography (HPGPC). The triterpene sterol content was determined by colorimetric method, and the QAMS of ganoderic acid A was evaluated by HPLC method.. The fingerprint profiles of 15 batches ofwere also compared for differences.All 15 batches ofmet the quality standard requirements of the2020 edition, the results of fingerprint cluster analysis and principal component analysis (PCA) show thatof Liaocheng, Shandong Province can be clearly distinguished from other batches of.All 15 batches ofmet the quality standards of the, indicating that the quality of the domesticGAP base cultivation is good; at the same time,of Liaocheng, Shandong Province can be significantly different from other origin batches ofsamples, mainly in the higher content of active ingredients such as triterpene sterols.

(Leyss.exFr.) Karst.; quality evaluation; principal component analysis; polysaccharides; triterpenes; fingerprint

R286.2

A

0253 - 2670(2023)21 - 7193 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.21.028

2023-02-10

國家自然科學基金資助項目（81774202）；成都中醫藥大學杏林學者學科人才科研提升計劃（CXTD2018010）

曾 秒，女，碩士，研究方向為藥物分析。E-mail: 1220799848@qq.com

通信作者：張 梅，女，博士生導師，從事中藥藥效物質基礎及質量控制與評價研究。E-mail: zhangmei63@cdutcm.edu.cn

[責任編輯 時圣明]