高效薄層色譜、薄層質譜和HPLC指紋圖譜聯用技術鑒定杜仲不同部位的化學成分差異

劉 星，王 玲，姚 帥，張建青，果德安*

高效薄層色譜、薄層質譜和HPLC指紋圖譜聯用技術鑒定杜仲不同部位的化學成分差異

劉 星1, 2，王 玲2，姚 帥2，張建青2，果德安1, 2*

1. 南京中醫藥大學藥學院，江蘇 南京 210023 2. 中國科學院上海藥物研究所，中藥標準化技術國家工程研究中心，上海 201203

建立杜仲不同部位的高效薄層色譜（high performance thin layer chromatography，HPTLC）、高效薄層質譜鑒別方法（TLC/MS）和高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜，比較杜仲皮、葉、雄花、種子的差異，尋找差異性成分，并互相驗證，用于杜仲的質量控制。通過優化供試品制備、展開劑和顯色劑等條件，建立杜仲皮的HPTLC，并將該方法應用于杜仲皮、葉、雄花、種子的區分，尋找差異性斑點；利用QTOF/MS對4個部位的HPTLC斑點進行鑒定，明確差異性成分；采用HPLC建立杜仲皮、葉、雄花、種子的指紋圖譜，采集多批次數據，利用偏最小二乘判別分析（partial least squares discriminant analysis，PLS-DA）篩選對4個部位區分貢獻較大的差異性成分，與薄層色譜和薄層質譜鑒定結果互相驗證。自建HPTLC鑒別方法優于各國藥典，可清晰地實現4個部位的區分；利用QTOF/MS對主要斑點進行分析，共鑒定27個成分，其中10個成分通過對照品確認；基于HPLC的PLS-DA多元統計分析篩選出14個差異性成分（VIP＞1）。松脂醇二葡萄糖苷在HPTLC、TLC/MS和HPLC檢測技術下均鑒定為杜仲皮的特異性成分；ulmoidoside A、ulmoidoside B、ulmoidoside C、ulmoidoside D是種子中穩定的差異性標志物；對于葉和花的鑒別，3種鑒別方式所得到的差異性標志物差別較大，葉中共找到7個標志物，花中共找到9個標志物。建立的高效薄層色譜、薄層質譜和HPLC指紋圖譜方法均可實現杜仲皮、葉、雄花、種子的區分，聯用技術尋找到的差異性成分為杜仲及其中成藥質量控制指標的選擇奠定基礎。

杜仲；不同部位；薄層色譜；薄層質譜；指紋圖譜；多元統計分析；松脂醇二葡萄糖苷

杜仲Oliv.為杜仲科杜仲屬多年生落葉喬木，是我國傳統藥用植物。其干燥樹皮是名貴中藥杜仲，干燥葉是另一味中藥杜仲葉。2者都被收載于《中國藥典》2020年版中，具有補肝腎、強筋骨的功效，用于治療肝腎不足、腰膝酸痛等[1]。杜仲樹需生長15年以上其樹皮方可做藥用，藥用資源緊張[2]。近年來，人們對杜仲非傳統藥用部位葉、雄花、種子的化學成分和藥理作用開展了系統的研究[3-6]。杜仲皮、葉、雄花、種子化學成分相似，主要為木脂素類、環烯醚萜類、黃酮類、苯丙素類[7-8]。市場上植物提取物、中藥制劑、保健品中存在藥用部位與非藥用部位相互摻雜的現象。因此有必要建立區分杜仲不同部位的質量控制方法。

目前報道的文獻大多是針對杜仲皮建立薄層色譜鑒別[9-10]或指紋圖譜鑒別方法[11-13]，尚未有文獻建立薄層色譜質譜或指紋圖譜鑒別方法對杜仲皮、葉、雄花、種子4個部位同時進行區分，本研究從高效薄層色譜（high performance thin layer chromatography，HPTLC）、薄層質譜（thin layer chromatography-mass spectrometry，TLC/MS)、HPLC指紋圖譜3個層面建立杜仲不同部位的分析方法，并結合偏最小二乘判別分析（partial least squares discriminant analysis，PLS-DA）等化學模式識別方法，揭示杜仲不同部位間的差異，為杜仲藥材質量控制及評價提供參考依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

HPTLC系統（瑞士卡瑪公司），包括薄層自動點樣儀ATS4、薄層成像儀VISUALIZER、薄層自動展開儀ADC2、薄層自動浸漬器、薄層板加熱器III和visionCATS工作站；Waters ACQUITY Arc高效液相色譜儀（美國Waters公司），配有二元泵、柱溫箱、樣品管理器、PDA 2998檢測器；UPLC-QTOF/MS系統由Waters ACQUITY UPLC型超高效液相色譜儀和Waters Xevo G2-S Q-TOF質譜儀組成；Quintix 224-1CN-1型電子天平（賽多利斯北京有限公司）；Milli-Q Integral型超純水系統（美國默克公司）；P180H超聲波水浴鍋（德國埃爾瑪公司）。

1.2 藥物與試劑

對照品松脂醇二葡萄糖苷（批號8963）、松脂醇單葡萄糖苷（批號9285）、丁香樹脂醇雙葡萄糖苷（批號8792）、京尼平苷（批號8598）、京尼平苷酸（批號1241）、車葉草苷酸（批號9614）、桃葉珊瑚苷（批號7683）均購自上海詩丹德生物技術有限公司；杜仲樹脂酚雙葡萄糖苷（批號PS012113）購自成都普思生物科技股份有限公司，以上對照品質量分數均大于98%；綠原酸（批號110753-202018，96.1%）、蘆丁（批號100080-202012，91.6%）均購自中國食品藥品檢定研究院；液相分析試劑用乙腈為色譜純（美國霍尼韋爾公司）；磷酸為分析純（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；樣品制備及薄層展開用甲醇、二氯甲烷、冰醋酸等溶劑均為分析純（國藥集團上海化學試劑有限公司）。

1.3 樣品

共收集15批杜仲皮、9批杜仲葉、10批杜仲雄花、9批杜仲種子，樣品產地見表1。藥材均由上海藥物研究所中藥現代化中心姚帥高級實驗師通過性狀、顯微等鑒定為杜仲.Oliv.。

表1 杜仲皮、葉、雄花、種子樣品信息

2 方法

2.1 TLC/MS分析

2.1.1 對照品溶液的制備 稱取對照品松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇單葡萄糖苷、丁香樹脂醇雙葡萄糖苷、京尼平苷酸、車葉草苷酸、桃葉珊瑚苷適量，加甲醇溶解配成質量濃度分別為0.25、0.25、0.25、0.50、0.50、0.50 mg/mL的對照品溶液，即得。

2.1.2 薄層色譜供試品溶液的制備 精密稱取杜仲皮、葉、雄花、種子粉末（過3號篩）約0.5 g，加甲醇5 mL，超聲處理（功率1130 W，頻率37 kHz）15 min，14 000 r/min離心10 min，取上清液作為供試品溶液。

2.1.3 質譜供試品溶液的制備 取已展開的高效薄層板，沿展開方向剪取部分條帶，經顯色后置可見光下檢視定位斑點，未顯色部分按定位結果刮取對應斑點，加50%甲醇1 mL超聲處理30 min，14 000 r/min離心10 min，取上清液作為供試品溶液。

2.1.4 薄層色譜條件 采用超高效薄層色譜板G60 F254（20 cm×10 cm，Merck，Darmstadt，德國）。吸取對照品、供試品溶液各10 μL，以條帶狀方式點樣于高效薄層板上，以二氯甲烷-冰醋酸-甲醇-水（15∶6∶2∶2）為展開劑，展開，取出，晾干；以10%硫酸乙醇為顯色劑，浸10%硫酸乙醇之后105 ℃加熱5 min顯色，置可見光下檢視。

2.1.5 質譜條件 電噴霧ESI源，負離子模式檢測；毛細管電壓1.0 kV；錐孔電壓40 V；source offset 80 V；離子源溫度100 ℃；脫溶劑溫度450 ℃；脫溶劑體積流量800 L/h；質譜掃描方式為Fast DDA，掃描范圍為100～1500，掃描時間0.20 s；碰撞能設置為低質量端裂解能量10～20 V，高質量端裂解能量40～50 V。

2.2 HPLC分析

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取對照品松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇單葡萄糖苷、丁香樹脂醇雙葡萄糖苷、杜仲樹脂酚雙葡萄糖苷、京尼平苷、京尼平苷酸、綠原酸、蘆丁適量，加甲醇溶解配成質量濃度分別為50、50、100、50、50、100、100、100 μg/mL的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取杜仲皮、葉、雄花、種子細粉（過3號篩）0.6 g，加50%甲醇20 mL，稱定質量，超聲處理（功率1130 W，頻率37 kHz）30 min，放冷，再稱定質量，用50%甲醇補足減失的質量，14 000 r/min離心10 min，取上清液，經0.22 μm微孔濾膜濾過，取續濾液即得。

2.2.3 色譜條件 采用Waters HSS T3（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，以乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）為流動相進行梯度洗脫（0～48 min，5%～21% A；48～60 min，21%～36% A）。柱溫為30 ℃，體積流量為1.0 mL/min，進樣量為10 μL，檢測波長為230 nm。

3 結果與分析

3.1 HPTLC方法的優化

對HPTLC供試品制備方式、展開劑和顯色劑進行了優化。以杜仲皮為對象，比較了《香港中藥材標準》《韓國藥典》和《歐洲藥典》中的供試品制備方式以及4種自建的制備方法，具體見表2。

不同迭代下,3種算法的MAPE的性能對比如圖2所示。由圖2可知,隨著迭代次數的增加,3種模型的錯誤率都逐漸下降,這是由于隨著訓練次數增加網絡參數的分布越來越接近最小值點。但是BP網絡在達到一定的訓練次數后錯誤率出現震蕩并且有逐漸增加的趨勢,而SVM和高斯過程回歸的錯誤率穩定下降,這間接的證明了這兩種算法可以使網絡初始參數的分布區域更加接近最小值點,并且有效地避免了局部震蕩。對比這兩類算法,高斯過程回歸算法錯誤率更低,效率更高。

表2 供試品制備方法

結果表明，不同提取方式在不同顯色劑下得到的圖譜輪廓具有較大差異，其中方法《韓國藥典》、自建方法1、2得到成分較為豐富，自建方法1（甲醇超聲處理15 min）相比于其他制備方法操作簡便省時，背景干擾較小，因此作為最終供試品制備方式。色譜條件方面考察二氯甲烷-甲醇-甲酸（30∶10∶1）、三氯甲烷-甲醇-水（10∶5∶1）、甲苯-乙酸乙酯-甲酸（65∶35∶1）、二氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水（15∶2∶6∶2）4種展開劑對杜仲薄層分離的影響，結果表明展開劑三氯甲烷-甲醇-水（10∶5∶1）和二氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水（15∶2∶6∶2）獲得的薄層斑點較多，斑點細窄。進一步考察了硫酸-水（2∶8）、稀硫酸試液、茴香醛試液、10%硫酸乙醇試液等顯色劑，結果表明，采用10%硫酸乙醇試液顯色劑獲得條帶清晰、斑點分離度好，因此最終選擇二氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水（15∶2∶6∶2）用于杜仲藥材的薄層分析，結果見圖1。

3.2 杜仲不同部位的HPTLC及區分

采用上述供試品制備和色譜條件，對杜仲皮、葉、雄花、種子進行分析，代表性樣品結果如圖2所示。從整體上看，杜仲皮和種子的斑點較少，葉和花的斑點較多。薄層板底部的斑點（Rf＝0.10、0.14、0.17，棕色）以及Rf＝0.36處的紅褐色斑點在皮、葉中均可觀察到；在杜仲皮中，Rf＝0.32處的棕色斑點在葉、雄花、種子中觀察不到，可作為區分皮與其他部位的特征斑點；在杜仲葉中，除了Rf值在0.1～0.2的棕色斑點以及Rf＝0.36的斑點外，還可以觀察到Rf＝0.27（棕色），Rf＝0.54（紅褐色），Rf＝0.85（紅褐色）處幾個顏色較深的主斑點，說明這些成分在葉中的含量較高，其中Rf＝0.85處的紅褐色斑點僅存在于杜仲葉中可作為其特征斑點。在杜仲雄花中，斑點Rf＝0.1（黑色），Rf＝0.24（紅褐色），Rf＝0.36（紅褐色），Rf＝0.45（紫色）為主要斑點，但杜仲種子在Rf＝0.1和Rf＝0.24，杜仲皮和葉在Rf＝0.36存在與花顏色相近的斑點，因此將Rf＝0.45的紫色斑點作為花的特征斑點。此外，Rf＝0.38處的細藍棕色斑點，Rf＝0.63處的黃色斑點以及Rf＝0.67和Rf＝0.71處的2個紫色斑點僅存在于杜仲雄花中，也可以作為其特征斑點。在種子中，斑點較少且顏色相近，主要集中于薄層板的下三分之一處，與其他部位的條帶輪廓差異較大。各個薄層斑點通過質譜進行鑒別并用對照品進行進一步驗證，見表3。

A-展開劑為二氯甲烷-甲醇-甲酸（30∶10∶1），顯色劑為硫酸-水（2∶8） B-展開劑為三氯甲烷-甲醇-水（10∶5∶1），顯色劑為稀硫酸試液 C-展開劑為甲苯-乙酸乙酯-甲酸（65∶35∶1），顯色劑為茴香醛試液 D-展開劑為二氯甲烷-甲醇-冰醋酸：水（15∶2∶6∶2），顯色劑為10%硫酸乙醇試液；條帶1、2、3、4、5、6、7的供試品制備方式分別對應文中所述的《香港中藥材標準》《韓國藥典》《歐洲藥典》及4種自建方法

3.3 杜仲不同部位的TLC/MS鑒定及區分

通過質譜對薄層色譜得到的主要斑點和差異性斑點進行鑒定，進一步明確杜仲皮、葉、雄花、種子所含成分的差異。取“2.1.3”項下制備的4個部位斑點的供試品溶液，進行UPLC-QTOF/MS分析，共檢測到31個成分，杜仲皮的薄層斑點檢測到7個成分（圖3），主要是木脂素類；杜仲葉、雄花的薄層斑點各檢測到17個成分（圖4、5），主要是黃酮類；杜仲種子的薄層斑點檢測到9個成分（圖6），主要是環烯醚萜類。從4個部位共鑒定了27個成分，舉例說明具體鑒定過程：斑點p4（Rf＝0.32），一級質譜圖可見加和離子峰727.242 0（[M－H＋HCOOH]?）和準分子離子峰681.240 8（[M－H]?），二級質譜圖中可見519.186 3（[M－H－Glc]?）、357.133 6（[M－H－2Glc]?）、151.038 7（[M－H－C24H34O13]?）等碎片，151.038 7是四氫呋喃環裂解后形成的特征離子，根據這些碎片信息初步將斑點p4（Rf＝0.32）鑒定為松脂醇二葡萄糖苷，用該對照品進行驗證，薄層板上相同Rf值處出現顏色相同的斑點（圖2），鑒定結果可靠準確。斑點p3（Rf＝0.36）的TIC圖中可見3個色譜峰，對應的母離子分別為373.114 1（[M－H]?），787.267 3（[M－H＋HCOOH]?），520.179 4（[M－H]?），根據它們的一級和二級質譜信息，推測該斑點可能含有京尼平苷酸、丁香樹脂醇雙葡萄糖苷、eucomoside B，用對照品進行驗證（圖2），斑點p3（Rf＝0.34）含有丁香樹脂醇雙葡萄糖苷、京尼平苷酸，由于沒有eucomoside B對照品，所以該成分未進行驗證。鑒定的27個成分中共有6個成分用對照品在薄層板上進行了驗證（圖2）。

表3 杜仲不同部位斑點的質譜信息

*表示與對照品比對確認 “＋”-檢測到 “?”-未檢測到

“*” refers to the compound identified by comparing with reference standard “+”- detected “-”-not detected

圖3 杜仲皮的TLC/MS圖譜

圖4 杜仲葉的TLC/MS圖譜

圖5 杜仲雄花的TLC/MS圖譜

圖6 杜仲種子的TLC/MS圖譜

京尼平苷酸是4個部位的共有成分，eucomoside B是皮、葉、花的共有成分，桃葉珊瑚苷、191.054 8、387.112 5是葉、花、種子的共有成分。化合物M1：松脂醇單葡萄糖苷、M3：丁香樹脂醇雙葡萄糖苷、M6：松脂醇二葡萄糖苷、M7：1-羥基松脂醇雙葡萄糖苷僅存在于杜仲皮中。化合物M9：285--Glc（447.094 0）、M10：301--Glc（463.087 7）、M11：285--Glc-Rha（593.148 7）、M16：301--Glc-Mal（549.084 2）、M18：285--Glc-Glc-Mal（695.147 8）僅存在于杜仲葉中。化合物M23：車葉草苷酸、M24：285--Rha-Glc（593.153 6）、M25：301--Glc-Glc（625.138 7）、M26：301--Glc-Rha（609.147 2）僅存在于杜仲雄花中。化合物M27：ulmoidoside B、M28：729.2250、M29：ulmoidoside D、M30：ulmoidoside A、M31：ulmoidoside C僅存在于杜仲種子。這些差異性成分對應的薄層斑點體現在杜仲皮中p1（Rf＝0.51），p3（Rf＝0.36），p4（Rf＝0.32），p5（Rf＝0.17），杜仲葉中y2：（Rf＝0.40），y4：（Rf＝0.32），y5：（Rf＝0.24），y7：（Rf＝0.14），杜仲雄花中h2：（Rf＝0.38），h4：（Rf＝0.24），h5：（Rf＝0.20），杜仲種子中z2：（Rf＝0.27），z3：（Rf＝0.24），z4：（Rf＝0.19），z5：（Rf＝0.14），z6：（Rf＝0.10）。這些差異性的斑點及其對應的質譜信號可作為杜仲不同部位薄層質譜區分的特征。

3.4 杜仲不同部位的HPLC色譜及差異性區分

按照“2.2.3”項方法，采用建立的HPLC指紋圖譜方法，對15批杜仲皮、9批杜仲葉、10批杜仲雄花、9批杜仲種子的指紋圖譜進行采集。為檢測儀器穩定性，每隔6針進1針QC溶液。各部位疊加圖譜及對照圖譜如圖7所示。15批杜仲皮標定了13個共有峰，9批杜仲葉標定了15個共有峰，10批杜仲雄花標定了14個共有峰，9批杜仲種子標定了13個共有峰。4個部位指紋圖譜的輪廓圖表明杜仲皮中的峰7，杜仲葉中的峰5、6，杜仲雄花中的峰8、9，杜仲種子中的峰10、11、12、13是明顯有差異的色譜峰。

皮：1-京尼平苷酸 5-京尼平苷 7-松脂醇二葡萄糖苷 10-杜仲樹脂酚雙葡萄糖苷 11-丁香樹脂醇雙葡萄糖苷 13-松脂醇單葡萄糖苷；葉： 2-京尼平苷酸 5-綠原酸 10-蘆丁；雄花：3-京尼平苷酸 4-綠原酸 6-京尼平苷 9-蘆丁

為了全面、科學、客觀地找尋區分4個部位的差異性成分，將15批杜仲皮，9批杜仲葉，10批杜仲雄花，9批杜仲種子的各色譜峰峰面積導入SIMCA-14.1軟件進行多元統計分析。采用PLS-DA模型對數據進行統計分析，標度化方法為Par，自變量累積解釋能力參數（2）為0.934，因變量累積解釋能力參數（2）為0.972，預測能力參數（2）為0.934，均大于0.5，說明建立模型有較好的解析能力和預測能力。對該模型進行擾動測試，200次驗證結果顯示，2和2在縱軸的截距分別為0.248，?0.529，說明PLS-DA沒有過擬合情況，預測結果可靠（圖7-C）。由PLS-DA得分圖（圖7-B）可知杜仲皮、葉、花、種子樣品能夠實現很好的區分，說明4個部位之間的化學成分存在差異。以VIP值＞1為標準，篩選得到14個差異性成分，分別為皮：峰7（松脂醇二葡萄糖苷，R＝34.424 min）；葉：峰5（綠原酸，R＝23.388 min），峰6（R＝24.588 min），峰l4（R＝51.752 min），峰12（R＝45.667 min）；雄花：峰3（京尼平苷酸，R＝11.768 min），峰8（R＝36.423 min），峰6（京尼平苷，R＝27.728 min），峰9（蘆丁，R＝39.801 min），峰13（R＝51.988 min）；種子：峰10（ulmoidoside A，R＝50.433 min），峰11（ulmoidoside C，R＝55.286 min），峰12（ulmoidoside D，R＝56.351 min），峰13（ulmoidoside B，R＝57.781 min）。綜合考慮4個部位指紋圖譜的輪廓圖中差異明顯的色譜峰以及VIP值篩選出的差異性成分，將皮中峰7（松脂醇二葡萄糖苷）作為皮的特征峰；葉中峰6（R＝24.588 min）作為葉的特征峰；雄花中峰8（R＝36.423 min）作為雄花的特征峰；種子中峰10（ulmoidoside A），峰11（ulmoidoside C），峰12（ulmoidoside D），峰13（ulmoidoside B）作為種子的特征峰。

3.5 HPTLC、TLC/MS和HPLC指紋圖譜對杜仲不同部位差異性成分闡述

4 討論

HPTLC方法是《中國藥典》2020年版法定的鑒別手段，尤其隨著自動點樣儀、自動展開儀、薄層自動浸漬器等全自動儀器的普及，使得傳統的薄層色譜也能夠實現標準化的操作，增加了薄層色譜的重現性。但薄層色譜仍面臨需要主觀判斷、斑點鑒定難、共流出嚴重的困境。TLC/MS聯用技術很大程度上可以改善這種劣勢，在薄層保留時間和斑點顏色的基礎上，提供了精確的相對分子質量和碎片信息，增加了新維度的信息，使得鑒定結果更為可靠。

表4 高效薄層色譜、薄層質譜和液相指紋圖譜檢測到的差異性成分

在杜仲不同部位的鑒定中，利用薄層質譜在葉中找到了5個特征成分，同時檢測這5個特征成分，比薄層的1個斑點，液相的1個特征峰的鑒定結果更為客觀、可靠。在本研究中，也存在薄層色譜尋找到的差異性斑點未在質譜中檢測到的情況，可能是由于該成分質譜響應較差，如葉中Rf＝0.85（紅褐色）的斑點。

本研究中，由于客觀原因，采用的是離線的薄層質譜聯用，操作較為復雜，但當薄層和質譜在線聯用的時候，則有可能實現標準化操作。考慮到高分辨質譜費用比較昂貴，可以將薄層色譜與低分辨質譜聯用，也可以取得類似的結果。薄層質譜聯用技術在中藥，尤其是在中成藥的鑒別方面是一種非常有潛力且容易推廣的技術，一方面能夠在復雜體系和共流出嚴重的情況下監控目標化合物，另一方面可實現多味藥的同時鑒別，改變《中國藥典》中成藥中“一味藥一薄層方法”現狀，縮短檢測時間和檢測成本。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Chemical variance in different parts ofby HPTLC, TLC/MS and HPLC hyphenated techniques

LIU Xing1, 2, WANG Ling2, YAO Shuai2, ZHANG Jian-qing2, GUO De-an1, 2

1. School of Pharmacy, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, China 2. National Engineering Laboratory for TCM Standardization Technology, Shanghai Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 201203, China

To establish the high performance thin layer chromatography (HPTLC), thin layer chromatography-mass spectrometry (TLC/MS) and high performance liquid chromatography (HPLC) fingerprint for the identification of bark, leaf, flower and seed of Duzhong (Oliv.) and differential components were filtrated and verified for the quality control of.HPTLC method was established by optimizing the sample preparation, mobile phase and derivatization reagent and applied to identify the bark, leaf, male flower, seed ofbased on the specific spots and/or peaks. HPTLC spots in four parts were then identified through quadrupole time of flight mass spectrometry (QTOF/MS) to find the differential components. HPLC was used to establish the fingerprints of bark, leaf, flower and seed of. Partial least squares discriminant analysis (PLS-DA) was used to screen the chemical markers that contributed greatly to the differentiation of the 4 parts based on multiple batches of data and the results were verified with TLC and TLC/MS.HPTLC identification method is the best compared to the method reported in pharmacopoeia from other countries, and can clearly distinguish the four parts. Additionally, the main spots were analyzed by QTOF/MS, and a total of 27 components were identified, 10 of which were confirmed by reference substances. Fourteen differential components (VIP > 1) were screened out by PLS-DA based on HPLC. According to the results obtained by HPTLC, TLC/MS and HPLC, pinoresinol diglucoside were selected as the characteristic component of bark, ulmoidoside A, ulmoidoside B, ulmoidoside C, ulmoidoside D as the robust markers in seed. The differential markers obtained by these three methods varied widely, with seven markers in leaf, nine markers in flower in total.HPTLC, TLC/MS, HPLC methods established could be used to effectively distinguish bark, leaf, flower and seed of, and the screened differential components lay a solid foundation for the selection of quality control indexes ofand its related Chinese patent medicines.

Oliv.; different parts; HPTLC; TLC/MS; HPLC fingerprint; multivariate statistical analysis; pinoresinol diglucoside

R286.2

A

0253 - 2670(2023)21- 7166 - 10

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.21.025

2023-03-06

國家自然科學基金青年項目（82003940）；岐黃工程首席科學家項目（2020）

劉 星，女，碩士研究生，研究方向為質量控制方法研究。E-mail: 15136456231@163.com

通信作者：果德安，男，研究員，博士生導師，主要從事中藥分析與現代質量標準研究。Tel: (021)50271516 E-mail: daguo@simm.ac.cn

[責任編輯 時圣明]