豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）S 蛋白的原核表達與純化

劉之睿，黃嘉瑤，蘇榮，陳濛濛，彭春婷，唐青海，唐斯萍

（衡陽師范學院化學與材料科學學院，生命科學學院，南岳山區生物資源保護與利用湖南省重點實驗室，動物微生物新型檢測技術及生物制劑衡陽市重點實驗室，湖南 衡陽 421008）

豬傳染性胃腸炎是由豬傳染性胃腸炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus，TGEV）引起的高度傳染性消化道疾病。該病以引發2 周齡內的仔豬嘔吐、嚴重腹瀉、劇烈脫水為主要特征，感染后仔豬體重迅速減輕、脫水，1 周內死亡[1]，死亡率高達100%。TGEV 屬于冠狀病毒科α 冠狀病毒（Coronavirus），基因組為不分段的單股正鏈RNA，其大小為2.86×104bp，線性結構順序為5'-ORF1a-ORF1b-S-ORF3a-ORF3b-E-M-N-ORF7-3'[2]。共編碼4 個結構蛋白（S、M、N、E）和三種非結構蛋白ORF1a/1b、ORF3a/3b 和ORF7[3]。其中S 蛋白是典型的I 型病毒融合膜蛋白[4]，可以與宿主細胞受體特異性結合，介導病毒入侵易感細胞，確定病毒的組織親嗜性和侵染宿主細胞的范圍，是病毒的毒力蛋白。其C 端區域高度保守，N 端區域能與紅細胞表面唾液酸作用，具有血凝活性[5]，膜外區上分布著A、B、C、D 四個主要的抗原位點[6]。S 蛋白在腸道中復制的能力與毒力直接相關[7]，并且是唯一能誘導機體產生中和抗體的主要結構蛋白[8]。因此，TGEV菌株的差異及其感染潛力高度依賴于S 蛋白[9]。S蛋白不僅是研究TGEV 基因工程疫苗的主要抗原，對病毒病原的檢測也具有重要意義。

本試驗對TGEV 毒株編碼的S 蛋白進行原核表達，通過各項條件優化得到一株高效表達菌株，表達的重組蛋白具有良好的反應原性，并采用試劑盒純化，為進一步研究相應的抗體檢測試劑盒和基因工程亞單位疫苗奠定了基礎。……