層黏連蛋白α3亞基在胰腺癌組織中的表達及其與肝轉移的關系

任培君 江月萍 周積曉 荊雪 董嫻寧 周建蕊

1青島大學附屬醫院消化內科,青島 266000;2青島大學附屬醫院病理科,青島 266000

【提要】 回顧性分析82例行手術切除且病理證實為胰腺癌患者的臨床資料,探討層黏連蛋白α3亞基(LAMA3)在胰腺癌組織中的表達及其與肝轉移的關系。結果顯示,胰腺癌肝轉移組LAMA3高表達率顯著高于非肝轉移組,腫瘤分化程度、病理分期及LAMA3表達水平與胰腺癌肝轉移相關且是其獨立危險因素。LAMA3高表達可能促進胰腺癌發生肝轉移,LAMA3可作為一種潛在治療靶點和預后標志物。

胰腺癌是一種高度致命的惡性腫瘤,確診后的5年生存率僅為10%[1]。轉移是胰腺癌患者死亡的主要原因,其中肝臟為最常見的轉移部位,其次是腹膜、肺和胸膜等[2-4]。層黏連蛋白是由α、β和γ亞基組成的異三聚體分子,層黏連蛋白α3亞基(laminin subunit alpha 3,LAMA3)基因參與編碼層黏連蛋白的α亞單位,從而調節細胞轉移和機械信號傳導,抑制腫瘤細胞的侵襲和轉移[5-6]。LAMA3參與胃癌、并影響卵巢癌、皮膚癌、肺癌和膀胱癌等腫瘤的發生、發展,影響患者預后[7-11]。已有文獻證實LAMA3在胰腺癌組織中表達升高[12-14],但LAMA3的表達與胰腺癌術后肝轉移的關系尚不明確。本研究旨在探討LAMA3在胰腺癌組織中的表達及其與肝轉移的關系,為臨床判斷預后提供有效證據。

一、資料與方法

1．研究對象:收集2018年1月至2020年12月間青島大學附屬醫院病理科存檔的82例行手術治療且術后病理證實為胰腺導管腺癌患者的石蠟標本。所有患者術前未行放、化療。記錄患者的性別、年齡、血清CEA和CA19-9水平、腫瘤大小、腫瘤分化程度、病理分期、是否淋巴結轉移、有無脈管侵犯及神經侵犯等。本研究經青島大學附屬醫院醫學倫理委員會批準通過(QYFYWZLL27485),患者或其家屬均簽署知情同意書。

2．胰腺癌組織LAMA3蛋白表達檢測:標本常規切片,采用免疫組織化學法檢測胰腺癌組織LAMA3蛋白表達,嚴格按試劑盒說明書操作。鼠抗人LAMA3單克隆抗體購自美國Abcam公司,工作濃度1∶100。以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照,以胞質中出現黃色或棕褐色的顆粒樣著色為LAMA3蛋白陽性表達。根據陽性細胞的染色強度和陽性細胞百分比進行評分:無染色為0分,染色呈淡黃色為1分,染色呈棕黃色為2分,染色呈棕褐色為3分;陽性細胞占比≤20%為0分,21%～50%為1分,51%～75%為2分,>75%為3分。兩者相乘≥4分為LAMA3高表達,<4分為LAMA3低表達。

3．隨訪和分組:采用門診就診的方式進行隨訪。術后隨訪1年,隨訪至2021年12月31日。根據隨訪期內影像學檢查結果有無肝轉移瘤將患者分為肝轉移組和非肝轉移組。

二、結果

1．臨床資料:82例患者中,男性50例,女性32例,年齡29～86(62.30±0.99)歲。血清CEA水平3.55(0.75～80.20)ng/ml,CA19-9水平104.95(0.63～2194.00)U/ml;腫瘤大小3.00(1.00～8.00)cm;腫瘤分化程度示高分化1例,中分化48例,中-低分化12例,低分化21例;病理分期示Ⅰ期35例,Ⅱ期38例,Ⅲ期6例,Ⅳ期3例;伴有淋巴結轉移38例,脈管侵犯27例,神經侵犯65例。

2．胰腺癌肝轉移與LAMA3蛋白表達及患者臨床病理特征的關系:免疫組織化學染色結果顯示,LAMA3在肝轉移組胰腺癌組織中呈高表達(圖1)。38例肝轉移組患者中11例(28.9%)LAMA3呈高表達,44例非肝轉移組患者中僅1例(2.3%)LAMA3呈高表達,肝轉移組LAMA3高表達率顯著高于非肝轉移組,差異有統計學意義(χ2=11.614,P<0.05,表1)。臨床病理特征分析發現,腫瘤大小、腫瘤分化程度及病理分期與胰腺癌肝轉移顯著相關(P值均<0.05),而性別、年齡、血清CEA水平、血清CA19-9水平、淋巴結轉移、脈管侵犯及神經侵犯與胰腺癌肝轉移無關(表1)。

表1 胰腺癌肝轉移與患者臨床病理特征及層黏連蛋白α3亞基蛋白表達的關系

圖1 肝轉移組胰腺癌組織(1A)和非肝轉移組胰腺癌組織(1B)中的層黏連蛋白α3亞基表達(免疫組織化學 ×400)

3．影響胰腺癌肝轉移的多因素分析:多因素logistic回歸分析結果顯示,腫瘤分化程度、病理分期及LAMA3高表達是影響胰腺癌肝轉移的獨立危險因素(表2)。

表2 影響38例胰腺癌肝轉移的多因素分析

4．LAMA3高表達與胰腺癌肝轉移患者病理特征的關系:LAMA3高表達與胰腺癌肝轉移組患者的腫瘤大小、腫瘤分化程度、病理分期及淋巴結轉移均無明顯相關性(表3)。

表3 層黏連蛋白α3亞基高表達與胰腺癌肝轉移組患者病理特征的關系[例(%)]

討論LAMA3位于人的18號染色體上,包含76個外顯子,2 665 624個堿基對,主要包括LAMA3A和LAMA3B兩個轉錄本[15]。LAMA3編碼層黏連蛋白并廣泛存在于人體的各個器官中,參與調節細胞黏附和遷移,并通過高親和力受體與細胞結合,從而間接促進和抑制腫瘤細胞的生長[16]。腫瘤組織中LAMA3的表達水平及其對患者預后的影響因癌癥類型而異。研究發現,長鏈非編碼RNA LINC00628通過招募甲基化酶促進LAMA3啟動子甲基化,從而降低LAMA3在肺腺癌中的表達[9]。Tang等[10]研究發現,LAMA3在卵巢癌組織中表達水平低于正常組織,且LAMA3低表達卵巢癌患者預后比高表達患者差。已有研究證明LAMA3在胰腺癌組織中表達上調,且其過表達可促進癌細胞增殖、分化,從而影響胰腺癌患者的生存預后[12,15]。本課題組前期采用生物信息學方法也證實了LAMA3在胰腺癌組織中高表達,這表明LAMA3可能參與胰腺癌的進展過程。

腫瘤細胞從原始病灶脫落,穿過基底膜,侵入至血管或淋巴管,通過血流或淋巴擴散至遠端器官最終形成繼發性腫瘤[17]。層黏連蛋白332是基底膜屏障的關鍵成分,一旦LAMA3表達異常,層黏連蛋白332便無法合成,基底膜結構缺失不完整,為腫瘤發生血行轉移提供有利的條件[18]。Huang等[14]探討了LAMA3、LAMB3和LAMC2在胰腺導管腺癌惡性生物學行為中的作用,結果表明LAMA3不僅在腫瘤組織中高表達,且LAMA3對腫瘤細胞增殖、遷移和侵襲的影響更強。本研究分析了患者臨床病理特征及LAMA3表達與胰腺癌肝轉移的相關性,結果發現腫瘤分化程度、病理分期及LAMA3表達是影響胰腺癌肝轉移的獨立危險因素。LAMA3高表達的患者肝轉移率高達91.7%(11/12),提示LAMA3高表達可能促進胰腺癌患者發生肝轉移。除此之外,腫瘤分化程度越低,病理分期越晚的胰腺癌患者肝轉移率越高。

Pan等[19]研究證實,隨著胰腺癌病理分期的進展,LAMA3的表達呈漸進性增加。Chen等[12]研究也發現LAMA3的陽性表達與胰腺癌的分化、浸潤深度和分期顯著相關,這表明LAMA3可能通過相關機制在胰腺癌的進展過程中發揮重要作用。本研究進一步分析LAMA3高表達與胰腺癌術后肝轉移患者病理特征的相關性,結果發現LAMA3高表達與患者的腫瘤大小、腫瘤分化程度、病理分期及淋巴結轉移均無明顯相關,這可能與本研究所納入的肝轉移組患者樣本量少有關。未來仍需要多中心、大樣本數據加以證實。

綜上所述,LAMA3在胰腺癌組織中表達增高,其表達水平是影響胰腺癌患者發生肝轉移的獨立因素,LAMA3高表達可能促進胰腺癌患者發生肝轉移。未來可通過檢測胰腺癌組織中LAMA3的表達水平來預測胰腺癌患者的肝轉移情況,對判斷患者預后具有指導意義。

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