保健食品中輔酶Q10 類軟膠囊酸價測定方法探究

吳媛媛， 馮雪萍，李亞軍，楊子忠，石志慧，杜 晶，譚周楊

（1.酵母功能湖北省重點實驗室，湖北 宜昌 443003；2.安琪紐特股份有限公司，湖北 宜昌 443003）

0 引言

隨著生活水平的提高，人們更加注重通過食用保健品來提高自身免疫力[1-2]。輔酶Q10是人體重要的輔酶之一，具有提高人體免疫力[3-4]、清除自由基[5-6]、降低血壓[7]、抗氧化性的功效[8-9]，在預防和輔助治療心血管疾病[10-11]、糖尿病[12-13]、腫瘤等慢性病方面有良好的效果[14-15]，因此輔酶Q10類軟膠囊被廣泛運用于保健品中，而酸價是保健食品中反映油脂類產品質量優劣的重要檢測指標[16-18]。

酸價是混合物中游離羧酸基團數量的一個計量標準，以中和1 g 油脂中游離脂肪酸所需的氫氧化鉀的毫克數來表示[19-20]。若酸價過高則會導致人體腸胃不適、腹瀉并損害肝臟[21-22]；酸價越小，代表油脂質量越好[23-24]，營養價值越高，因此酸價常用于衡量油脂的品質[25-26]。

目前，國內尚未建立保健食品中輔酶Q10類軟膠囊酸價檢測標準，現采用的檢測方法多為GB 5009.229《食品安全國家標準 食品中酸價的測定》[27]。此外，為保證食品檢測水平，還需對檢測方法進行不確定度分析，測量不確定度是判斷測量結果的依據和評定測量水平的指標，并利用該手段來提高質量評價與質量控制水平，為今后保健食品的檢驗提供支持[28-29]。

由于保健食品中輔酶Q10類軟膠囊內容物性質較為特殊，當室內溫度較高時，內容物為液體狀態，室內溫度較低時，內容物為凝固狀態，因此研究通過對樣品前處理進行優化，在常溫或低溫狀態下均能使內容物被混合溶液完全溶解成澄清的油脂試樣，便于使用酚酞指示劑滴定法及冷溶劑自動電位滴定法開展酸價檢測工作。除此之外，酚酞指示劑滴定法相較于自動電位滴定法節省儀器成本、方法操作簡單、準確度高，且更適用于顏色較淺的油脂試樣，可為實驗室及檢測機構在進行保健食品軟膠囊酸價檢測時提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器：G20S 型自動電位滴定儀、電極（DGi116-Solvent）、ME204/02 型分析天平、HH-M4 型恒溫水浴鍋。

試劑：無水乙醚（含量≥99.5%）、異丙醇（含量≥99.7%）、氫氧化鈉（含量≥96.0%）、無水乙醇（含量≥99.7%）。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗前準備

油脂試樣前處理：取輔酶Q10軟膠囊，將內容物擠于250 mL 錐形瓶中，放置于50 ℃水浴鍋內，使內容物融化為液體狀態。

混合溶液前處理：配置中性乙醚/異丙醇（1/1，V/V）混合溶液于具塞試劑瓶中，放置于30 ℃水浴鍋內，使混合溶液保持微熱狀態。

1.2.2 試驗方法

參考國標GB 5009.229《食品安全國家標準 食品中酸價的測定》。

1.2.3 計算公式

3.3 患者版目標管理對冠心病患者心功能及生活質量的影響 本研究結果顯示，觀察組患者干預后LVEF、VO2max、6MWT指標及生活質量較對照組明顯改善(P<0.01)。目標管理手冊通過微信隨訪的方式，加強了患者院外管理及指導，提高了患者院外疾病管理意識及積極性，使患者明確達到管理目標與改善心功能的關系，提高其健康意識及疾病管理意愿，促使患者建立健康的生活方式，從而改善患者心功能[10]。此外，目標管理加強了患者與醫護人員的溝通及交流，增強患者治療信心，同時目標管理讓患者學會情緒管理，緩解其不良情緒，促進患者身心健康，從而提高患者生活質量。

式中：X——酸價，mg/g；

V——消耗標準滴定液體積，mL；

V0——空白消耗標準滴定液體積，mL；

C——滴定溶液的濃度，mol/L；

m——滴定用供試品的稱樣量，g。

2 結果與分析

2.1 檢測方法結果

2.1.1 酚酞指示劑滴定法

該方法對試樣前處理后，按照GB 5009.229 第一法進行檢測，平行檢測6 次，測得酸價為1.031 1 mg/g，RSD 為0.45%。

表1 酚酞指示劑滴定法試驗結果

2.1.2 冷溶劑自動電位滴定法

該方法對試樣前處理后，按照GB 5009.229 第二法進行檢測，平行檢測6 次，測得酸價為1.029 8 mg/g，RSD 為0.42%。

冷溶劑自動電位滴定法試驗結果見表2。

表2 冷溶劑自動電位滴定法試驗結果

2.1.3 熱乙醇指示劑滴定法

該方法采用自動電位滴定法，平行檢測6 次，測得酸價為1.132 6 mg/g，RSD 為0.45%。

熱乙醇指示劑滴定法試驗結果見表3。

表3 熱乙醇指示劑滴定法試驗結果

以輔酶Q10類軟膠囊為研究對象，當室內溫度過低時內容物為固體狀態時，將內容物及乙醚/異丙醇混合溶液置于水浴內，采用GB 5009.229 第一法、第二法進行試驗，并與GB 5009.229 第三法進行對比，由表1、表2 和表3 可知，3 種方法的酸價檢測結果無顯著差異，由此說明，經優化后的前處理方式不會對輔酶Q10類軟膠囊酸價測定產生影響，測量結果比較接近試驗結果的真實值。保健食品輔酶Q10類軟膠囊酸價的測定是一個難點，若在不同溫度條件下采用不同的酸價檢測方法，可能會導致酸價檢測結果存在偏差。研究表明，冷溶劑自動電位滴定法可有效避免顏色干擾，適用于顏色較深的樣品。另外，該方法測得的結果也較為準確，但是該方法對實驗室有一定要求[23]，與指示劑手動滴定相比，電位滴定速度較慢，而較長時間的滴定過程使得滴定結果受到影響。在不能配備自動電位滴定儀的條件下，可采用熱乙醇指示劑滴定法和冷溶劑指示劑滴定法，但熱乙醇指示劑滴定法僅適用于固體油脂樣品，另外，根據表1、表2 和表3 可見，熱乙醇指示劑滴定法消耗的滴定體積更多。綜合上述分析，使用酚酞指示劑滴定法操作更加簡單、便捷，不僅可以提高試驗效率、節省試劑，還可以延長了設備的使用壽命，且該方法更適用于顏色較淺的油脂樣品，更適用于實驗室日常檢測。

2.2 不確定度評價

2.2.1 不確定度的來源和分析

測試產生的不確定度采用A 類方法評定。由于重復性測試所導致，來源于單一測定重復性標準偏差u（1）。

系統效應導致的不確定度采用B 類方法評定，包括稱取試樣產生的不確定度u（2）、50 mL 棕色滴定管產生的不確定度u（3）、氫氧化鈉標準滴定液濃度產生的不確定度u（4）、氫氧化鈉摩爾質量產生的不確定度u（5）。

2.2.2 不確定度的評價

酸價測量結果重復性引入的不確定度分量urel（1）。重復性測量引入的不確定度可連續測量得到的測量列，采用A 類評定方法進行評定。重復測量6 次，結果見表1。樣品平均質量為10.138 5 g，平均酸價為1.031 1 mg/g，標準偏差為0.004 6 mg/g，相對標準偏差為0.004 5，則樣品酸價測量重復性引入的相對不確定度為urel（1）為0.004 5。

氫氧化鈉標準滴定液的不確定度u（4）。氫氧化鈉標準溶液為直接購買的，由標準物質認定證書得到擴展不確定度urel=0.3%，置信概率為95%，濃度為0.100 1 mol/L，假設正態分布，查表得Kp=1.960，因此相對標準不確定度urel（4）=0.001 53。

氫氧化鉀摩爾質量所產生的不確定度u（5）。從IUPAC 最新版的原子量表中查的氫氧化鉀中各元素的原子量和不確定度見表4，對于每一個元素來說，標準不確定度是將IUPAC 所列不確定度作為矩形分布的、極差計算得到的。

表4 氫氧化鉀各元素原子量和不確定度

氫氧化鉀各元素原子量和不確定度見表4。

2.2.3 合成標準不確定度計算

影響其結果的各分量相互獨立，相對合成不確定度為：

擴展不確定度：取包含因子k=2，則擴展不確定度Urel=3.15%×2=6.30%。

2.2.4 測量擴展不確定度報告

用手動滴定法測定輔酶Q10軟膠囊中酸價，測定值為1.031 1 mg/g的測量不確定度為Urel=6.30%，k=2。

3 結論

保健食品因其成分復雜，存在各方面干擾，合適的樣品前處理方法和檢測方法是影響酸價測定的關鍵所在。根據保健食品中輔酶Q10類軟膠囊內容物特性，對樣品前處理進行優化，在常溫或低溫狀態下均能使內容物被混合溶液溶解成澄清的油脂試樣。這樣既可以使用酚酞指示劑滴定法又可以使用冷溶劑自動電位滴定法測定其酸價，使用酚酞指示劑滴定法檢測時，測得標準偏差為0.004 6 mg/g，相對標準偏差為0.45%，擴展不確定度為6.30%。結果表明，利用酚酞指示劑滴定法測定酸價是一種可行的方法，此方法操作簡單、重復性好、準確度高，且適用于顏色較淺的食用油脂樣品，無需特殊儀器可以快速測出保健食品中輔酶Q10類軟膠囊酸價的含量，為今后類似產品的酸價測定奠定了基礎。