文山引種陽春砂與其偽品巴雙砂的鑒別

莫偉，班夢夢，張丹雁，范紫穎，楊麗

（1.廣州采芝林藥業有限公司，廣東 廣州 510360；2.廣州中醫藥大學中藥學院，廣東 廣州 510006；3.廣東黃埔衛生職業技術學校，廣東 廣州 510700）

陽春砂來源于姜科植物陽春砂Amomum villosumLour.的干燥成熟果實，為四大南藥之一，具有化濕開胃、溫脾止瀉、理氣安胎等功效[1]。陽春砂以廣東陽春為道地產區，引種于云南、廣西等地，老撾、越南、緬甸亦有引種。

目前，市售陽春砂以云南文山、云南版納、老撾和越南引種為主流商品[2]，隨著進口陽春砂不斷流入國內市場，本課題組調研發現在老撾引種陽春砂中兩種均被云南當地藥農稱為“嫁接品種”的老撾巴雙砂和老撾巴色砂，2種均為姜科豆蔻屬植物，種源不明，因分別產自老撾巴雙、巴色地區而得名，為新一輪兩個常見陽春砂高仿偽品，被單獨冒充或分別摻入文山引種陽春砂和版納引種陽春砂中出售，其外觀性狀分別與兩個云南陽春砂商品相似，非專業人士難以辨別[3]。前期本課題組報道了版納陽春砂與巴色砂的性狀、揮發油成分等特征鑒別[4]，但文山引種陽春砂與老撾巴雙砂（以下簡稱巴雙砂）未見報道，為準確有效地鑒別和區分陽春砂正偽品，規范陽春砂在市場的流通，本文采用傳統經驗鑒別、顯微鑒別及理化鑒別法對云南文山陽春砂與巴雙砂的性狀、橫切面及粉末顯微、揮發油成分特征進行對比分析和鑒定，以期為陽春砂真偽鑒別提供科學參考依據。

1 材料、儀器及試劑

1.1 材料

文山陽春砂樣品收集于云南省文山州馬關縣馬白鎮南山幸福社區引種的陽春砂，巴雙砂樣品收集于老撾產區，又稱“老撾巴雙砂”。經廣州中醫藥大學張丹雁教授鑒定陽春砂為姜科豆蔻屬植物陽春砂（Amomum villosumLour.）的干燥成熟果實，巴雙砂為陽春砂同屬偽品，種源不明。樣品保存于廣州中醫藥大學中藥鑒定實驗室。

1.2 儀器

SX70HS 長焦照相機（佳能）；DFT-150 粉碎機（溫州頂歷醫療器械有限公司）；B302 生物顯微鏡（重慶奧特光學儀器有限公司）；STP120 組織脫水機、HistoStar組織包埋機[賽默飛世爾科技（中國）有限公司]；JB-L5 凍臺（武漢俊杰電子有限公司）；HM 340E 輪轉式切片機[賽默飛世爾（上海）儀器有限公司]；DS-1500A 電子天平（佛山市順德區拓普域電子有限公司）；FA1004N 萬分之一分析天平（上海菁海儀器有限公司）；TC-15 恒溫電熱套（海寧市華星儀器廠）；Agilent7693自動進樣器、7890B氣相色譜儀、Agilent5977質譜儀（美國安捷倫公司）。

1.3 試劑

50%FAA 固定液（批號20210206，福州飛凈生物科技有限公司）；無水乙醇（批號20210720，天津市致遠化學試劑有限公司）；二甲苯（批號20200620，天津市致遠化學試劑有限公司）；水合氯醛（批號20190301，天津市大茂化學試劑廠）；丙三醇（批號20190708，天津市廣成化學試劑有限公司）；以上試劑均為分析純。

2 方法

2.1 性狀鑒定法

通過傳統性狀鑒別方法對文山陽春砂和巴雙砂外觀形狀、顏色、表面毛刺、種子團、種子形狀、氣味等特征進行對比鑒別。

2.2 顯微鑒定法

2.2.1 橫切面顯微[5]采用常規石蠟切片法制備文山陽春砂和巴雙砂種子橫切面顯微裝片，鏡檢，拍攝顯微特征。

2.2.2 粉末顯微 文山陽春砂和巴雙砂種子粉碎后過五號篩，制片并置于顯微鏡下觀察，拍攝顯微特征。

2.3 揮發性成分分析

2.3.1 揮發油提取 取樣品粉末約15 g，精密稱定后置于500 mL圓底燒瓶中，加入300 mL蒸餾水，參照《中國藥典》2020 年版四部通則“2204”中揮發油提取測定法（甲法）提取，加熱保持微沸約4 h，至揮發油量不再增加時停止加熱，靜置冷卻至室溫，讀取揮發油含量，計算揮發油提取率。

2.3.2 供試品的制備 精密吸取“2.3.1”項所得揮發油20 μL，石油醚定容至2 mL，混合均勻后過0.22 μm微孔濾膜，取續濾液，即得。

2.3.3 GC-MS 條件 色譜條件：HP-5ms UI 型毛細管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；進樣口溫度：250 ℃；程序升溫：初始溫度50 ℃，然后以5 ℃/min升至230 ℃，保持14 min。載氣：高純度氦氣；流速：1 mL/min；分流比100∶1；進樣量：1 μL。

質譜條件：離子源230 ℃，接口280 ℃；掃描范圍：m/z50～550；溶劑延遲3 min。

2.3.4 樣品測定及數據處理 取供試品溶液進樣分析，通過與NIST14 質譜數據庫進行對照，計算機自動檢索并進行文獻比對，對各色譜峰進行鑒定，采用色譜峰面積歸一化法計算樣品揮發油中各成分的相對質量分數。

3 結果

3.1 性狀鑒別

文山陽春砂類圓球或卵圓形，淺黃棕色、棕色或紫棕色；表面毛刺粗短且稀疏，刺基寬扁而粗，具不明顯鈍三棱，果實頂端鈍，花被基凸起明顯；果皮稍厚，鼓起，內表面淺棕、淺黃棕或黃白色；種子團三瓣，隔膜外延，種子多面體狀長形，20～54粒；種子氣芳香，味微苦澀、微辛涼，成熟度高者味甜，辛涼感弱。

巴雙砂卵形，棕褐或黑褐色；表面毛刺稀疏，細縱棱多而明顯，果實頂端尖，有時略歪斜，花被基短且微突；果皮稍厚，略貼種子團，內表面淺黃棕或棕色；種子團三瓣，隔膜外延，種子多面體狀三角形，40～75 粒；果殼稍具煙熏氣，種子味苦澀，香氣特異似山姜果。見圖1。

圖1 文山陽春砂（A）和巴雙砂（B）的外觀性狀特征Figure 1 Character identification of A. villosum Lour. from Wenshan(A)and Bashuang sha(B)

3.2 顯微鑒別

3.2.1 橫切面顯微特征 文山陽春砂種子橫切面：假種皮薄壁細胞皺縮呈條形，或膨脹呈類圓形，常含方晶；種皮表皮細胞1列，斜徑向類方形，壁略厚，胞腔斜類方形；下皮細胞1 列，內含黃棕色色素，偶見向種皮表皮細胞層乳狀凸起，凸起處種皮細胞小而不規則；油細胞1 列，橫向或徑向，長方形或類方形，長短不一，長至78 μm；色素層3～5列細胞，大小長短不一，不規則狀，淺黃棕色；內種皮細胞1列，紅棕色，中間內凹略成杯狀，內壁極厚，外壁薄，胞腔極小，內含細小硅質塊；外胚乳細胞大，徑向延長的長條形，內含淀粉粒、草酸鈣方晶等；內胚乳細胞小，多角形，內含糊粉粒。

巴雙砂種子橫切面：假種皮薄壁細胞皺縮呈條形，或膨脹呈類圓形，含方晶；種皮表皮細胞1列，斜徑向扭曲，側壁及內壁均勻增厚，外壁極厚，達49 μm，層紋不明顯，胞腔小或不明顯，扭曲；下皮細胞1～2 列，極扁小，內含黃棕色色素，偶見向種皮表皮細胞層乳狀凸起，凸起處種皮細胞小而不規則；油細胞1 列，橫向長方形或類方形，長至118 μm；色素層4～5 列細胞，不規則瘦長橢圓形，淺黃棕色；內種皮細胞1 列，黃棕至紅棕色，中間內凹略成杯狀，內壁極厚，外壁薄，胞腔極小，內含細小硅質塊；外胚乳細胞大，徑向延長的長條形，內含淀粉粒、草酸鈣方晶等；內胚乳細胞小，多角形，內含糊粉粒。見圖2。

圖2 文山陽春砂（A）和巴雙砂（B）種子的橫切面顯微特征Figure 2 Micrographs of seeds of A. villosum Lour. from Wenshan(A)and Bashuang sha(B)

3.2.2 粉末顯微特征 文山陽春砂粉末：假種皮無色或淡黃色，成團散在，壁極薄，常皺縮呈不規則形狀，內含方晶；種皮表皮細胞淡黃色，表面觀長條形，末端漸尖或鈍圓，常斷裂，斷面觀方形、類方形或多邊形，常與下皮細胞上下層垂直排列；下皮細胞黃棕色或紅棕色，表面觀呈類長方形或類長圓形略規則排列，斷面觀不規則細長條形；油細胞無色或淡黃色，表面觀呈類方形或類圓形，斷面觀類長方形，多破碎，有的胞腔內可見油滴；色素塊紅棕色或深棕色，常破碎成不規則狀；內種皮細胞黃棕色或棕色，邊緣不規則破碎，成片，表面觀呈多角形，壁厚，內含硅質塊，斷面觀少見，1 列，柵狀排列；外胚乳細胞呈類長方形，內含大量細小淀粉粒聚集形成的淀粉團，有的淀粉團中可見細小散在的方晶；草酸鈣方晶存在于假種皮、外胚乳中。

巴雙砂粉末顯微特征與陽春砂粉末相似，難以準確區別。見圖3。

圖3 文山陽春砂（A）和巴雙砂（B）的種子粉末顯微特征Figure 3 Microscopic characteristics of seed powder of A.villosum Lour.from Wenshan(A)and Bashuang sha(B)

3.3 揮發性成分分析

二者揮發性成分總離子流圖見圖4、圖5，主要成分見表1。可見二者主要含烯類、酯類、醇類等成分，主成分均為左旋乙酸冰片酯、左旋樟腦、右旋萜二烯、莰烯、（1S，2E，6E，10R）-3，7，11，11-四甲基雙環[8.1.0]十一碳-2，6-二烯、合成右旋龍腦等。其中τ-Muurolol（0.60%）、（-）-1，7-二甲基-7-（4-甲基-3-戊烯基）-三環[2.2.1.0（2，6）]庚烷（0.58%）等為文山陽春砂特有成分；Neointermedeol（5.26%）、[S-（R*，S*）]-3-（1，5-二甲基-4-己烯基）-6-亞甲基-環己烯（0.76%）、g-硒烯（0.72%）等為巴雙砂特有成分；此外，文山陽春砂左旋乙酸冰片酯含量明顯比巴雙砂高，左旋樟腦含量略低，而巴雙砂中1-石竹烯明顯比文山陽春砂高，可據此鑒別。

表1 文山陽春砂與巴雙砂揮發油的化學成分及相對質量分數Table 1 Volatile components and relative contents of A.villosum Lour.from Wenshan and Bashuang sha

圖4 文山陽春砂總離子流圖Figure 4 TIC of A.villosum Lour.from Wenshan

圖5 巴雙砂總離子流圖Figure 5 TIC of Bashuang sha

4 討論

實驗結果表明，文山陽春砂在果實形狀、顏色、表面紋理及氣味等性狀特征與巴雙砂存在差異；顯微特征中，兩者橫切面種皮表皮細胞形狀和細胞壁差異最明顯，其次是種皮下皮細胞及色素細胞的列數等，兩者粉末顯微特征不明顯，故陽春砂正偽品顯微鑒定中橫切面特征鑒別更有意義；揮發油化學成分對比表明，兩者雖均含有乙酸冰片酯、左旋樟腦、右旋萜二烯、莰烯等共有成分，但文山陽春砂有效成分乙酸冰片酯含量明顯高于巴雙砂，且兩者各自均含特有成分。據此可有效鑒別文山陽春砂正偽品。

以上差異除與加工方式、生態環境不同有關外，還與兩者種源不同更為密切相關。云南地區過往多采用全程曬干方式加工陽春砂，果實色澤淺且質地疏松不緊實，容易散團散氣變質，不易運輸與保存，質差。近10 年來，云南砂仁種植戶在政府和專家大力推廣陽春砂科學種植和加工技術指導下，采取延遲采收的方法提高砂仁成熟度。加工技術方面，云南文山州多采用自動化或半自動化電烘箱烘烤技術，有時全程電烘烤至干燥，有時電烘烤中間過程增加了堆悶發汗步驟再繼續烘干的操作，全程電烘烤者砂仁表面淺黃棕、黃棕色或紫紅色，電烘烤中途發汗者表面顏色加深，黃褐色、紫棕色或棕褐色，電烘烤加發汗的砂仁果殼更加緊實不易爆裂，種子緊縮不易散團，更利于運輸和存放，果實多數圓球形，有效成分轉化、香氣更加醇香，砂仁質量提高，市場占有度逐年上升[2]。相比之下，老撾陽春砂及其偽品巴色砂和巴雙砂均采用柴火烘烤方法進行干燥加工處理，故果實表面色澤深，常呈棕褐或黑褐色，同時果殼稍具煙熏氣。

本文對文山陽春砂與其常見偽品巴雙砂從性狀、橫切面及粉末顯微、揮發油成分等進行對比分析鑒別，結果顯示二者在藥材性狀、橫切面顯微、揮發油成分均存在差異，特別是巴雙砂果殼表面毛絨稀少，縱棱清晰而多，口嘗香氣特異似山姜果，兩者揮發油雖然絕大多數成分相似，但各自均具獨有成分，據此可有效鑒別文山陽春砂及老撾巴雙砂。本研究為文山陽春砂真偽鑒別提供科學數據，對陽春砂進一步正本清源、提高質量、確保臨床安全用藥具有重要意義。