濰坊地區(qū)肉雞場(chǎng)料袋和料線中微生物污染的調(diào)查分析

袁東芳

（山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院，山東 濰坊 261061）

飼料的安全和衛(wèi)生狀況直接影響雞群的健康，隨著養(yǎng)雞業(yè)規(guī)模化、標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)展，飼料污染問(wèn)題日益受到養(yǎng)殖者的重視。但受現(xiàn)有認(rèn)知水平和技術(shù)的局限，飼料的微生物污染現(xiàn)象仍然普遍存在[1]。致病微生物污染飼料是影響飼料質(zhì)量安全的重要因素[2]，微生物污染會(huì)使飼料形狀發(fā)生變化，降低雞群的采食量，減緩雞群的生長(zhǎng)速度，還會(huì)破壞雞體的腸道菌群平衡，致使有害菌損害腸道黏膜發(fā)育，引起雞體免疫功能下降，甚至?xí)?dǎo)致雞體發(fā)生腹瀉和免疫低下，誘發(fā)雞群發(fā)生疾病，嚴(yán)重者直接引起雞只死亡[3]。已有學(xué)者和機(jī)構(gòu)對(duì)飼料原料、動(dòng)物飼料霉菌毒素的污染現(xiàn)狀作了研究[1-5]，本研究針對(duì)采集于濰坊不同地區(qū)的商品肉雞場(chǎng)料袋和料線中480 份飼料樣品的細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌以及黃曲霉毒素B1、伏馬毒素、嘔吐毒素、玉米赤酶烯酮含量進(jìn)行系統(tǒng)分析，闡明料袋和料線中飼料微生物污染與飼料儲(chǔ)存時(shí)間、儲(chǔ)存條件及料線管理的關(guān)系，以引起肉雞場(chǎng)對(duì)雞飼料質(zhì)量安全的關(guān)注。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)雞場(chǎng)情況 在濰坊高密、寒亭、安丘地區(qū)的3 個(gè)肉雞場(chǎng)了解雞場(chǎng)規(guī)模、雞的品種、飼料類型、用料方式、飼料管理、料線管理及是否做過(guò)飼料衛(wèi)生監(jiān)測(cè)等情況（表1），高密雞場(chǎng)記為1 場(chǎng)、寒亭雞場(chǎng)記為2 場(chǎng)、安丘雞場(chǎng)記為3 場(chǎng)，分別對(duì)每個(gè)雞場(chǎng)在進(jìn)雞后的第1 天、第30 天進(jìn)行料袋和料線中飼料樣品的采集。

表1 雞場(chǎng)基本情況

1.1.2 主要試劑及儀器 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、察氏瓊脂培養(yǎng)基、緩沖蛋白胨水（BPW）、亞硒酸鹽胱氨酸（SC）增菌液、氯化鎂孔雀綠（RV）增菌液、沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基，均購(gòu)自北京陸橋有限責(zé)任公司；AgraQuant 真菌毒素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自Romer Labs；DHP-9272B 恒溫培養(yǎng)箱，購(gòu)自上海一恒科學(xué)儀器有限公司；SPX-150B-Z 生化培養(yǎng)箱，購(gòu)自上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司；iDplus Confidence 基質(zhì)輔助激光電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀，購(gòu)自日本島津；Multiskan Fc 酶標(biāo)分析儀，購(gòu)自賽默飛世爾科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集及檢測(cè)試驗(yàn)設(shè)計(jì) 隨機(jī)采樣，每次每場(chǎng)料袋樣品20 份、料線樣品60 份，共計(jì)采集樣品480 份；其中對(duì)所有樣品均進(jìn)行細(xì)菌、霉菌檢測(cè)，料袋樣品再進(jìn)行霉菌毒素檢測(cè)。

1.2.2 樣品的采集及處理 飼料樣品按照GB/T 14699.1[6]標(biāo)準(zhǔn)采集，避免樣品污染。進(jìn)行細(xì)菌、霉菌數(shù)目檢測(cè)的樣品按照GB/T 20195-2006[7]標(biāo)準(zhǔn)處理；進(jìn)行霉菌毒素檢測(cè)的樣品按照AgraQuant真菌毒素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒的要求處理。

1.2.3 飼料細(xì)菌、霉菌數(shù)目的測(cè)定 按照GB/T 13093、GB/T 13092、GB 4789.10[8-10]標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)飼料中細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)和金黃色葡萄球菌；按照GB/T 13091[11]進(jìn)行沙門(mén)氏菌檢測(cè)的前期增菌和初步鑒定，利用基質(zhì)輔助激光電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀進(jìn)一步鑒定沙門(mén)氏菌。

1.2.4 霉菌毒素含量的測(cè)定 利用AgraQuant 真菌毒素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒檢測(cè)飼料中黃曲霉毒素B1、伏馬毒素、嘔吐毒素、玉米赤酶烯酮的含量。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)分析 利用SPSS Statistics 19.0 統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，多重比較用LSD 法進(jìn)行，試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值表示，并進(jìn)行差異性分析。

2 結(jié)果

2.1 飼料中細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌的檢測(cè)

同一雞場(chǎng)同一類同一次樣品中的細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。分析可知，1 場(chǎng)30 d 料袋樣品中細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)明顯高于1 d 料袋樣品；1 d 料袋樣品中沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌均未檢出，30 d料袋樣品中檢出金黃色葡萄球菌1 CFU/g。30 d料袋樣品2 場(chǎng)細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)明顯低于1、3場(chǎng)。1、2、3 場(chǎng)30 d 料線樣品中細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)明顯高于1 d 料線樣品，并且1 d、30 d 料線樣品中細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)均明顯高于料袋樣品；2 場(chǎng)1 d、30 d 料線樣品的細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)均明顯低于1、3 場(chǎng)。

表2 不同雞場(chǎng)飼料中細(xì)菌、霉菌檢測(cè)結(jié)果（CFU/g）

2.2 飼料中黃曲霉毒素B1、伏馬毒素、嘔吐毒素、玉米赤酶烯酮的含量

同一雞場(chǎng)同一次樣品中的黃曲霉毒素B1、伏馬毒素、嘔吐毒素、玉米赤酶烯酮的含量檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果顯示，1、3 場(chǎng)30 d 黃曲霉毒素B1、伏馬毒素、嘔吐毒素和玉米赤酶烯酮含量均明顯高于1 d；2 場(chǎng)30 d 樣品中4 種毒素含量與其1 d 樣品無(wú)差異；1 d 樣品2 場(chǎng)黃曲霉毒素B1、玉米赤酶烯酮含量明顯低于1、3 場(chǎng)，30 d樣品2、3 場(chǎng)4 種毒素含量均明顯低于1 場(chǎng)，30 d樣品2 場(chǎng)4 種毒素含量均明顯低于3 場(chǎng)。

表3 飼料中霉菌毒素含量

3 討論

目前對(duì)肉雞場(chǎng)全價(jià)飼料中細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)和沙門(mén)氏菌含量沒(méi)有明確的規(guī)定，但是GB 13078-2017[12]飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料原料中細(xì)菌總數(shù)要小于2×106CFU/g，霉菌總數(shù)小于2×104CFU/g，飼料中沙門(mén)氏菌不得檢出。1、2、3 場(chǎng)料袋飼料細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)均符合標(biāo)準(zhǔn)，但料線30 d 樣品細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)均超過(guò)此標(biāo)準(zhǔn)；1 場(chǎng)30 d 料袋樣品，1、3 場(chǎng)1 d 料線樣品，3 個(gè)場(chǎng)30 d 料線樣品中沙門(mén)氏菌均超標(biāo)；對(duì)于細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)沒(méi)有超標(biāo)的樣品，其檢測(cè)結(jié)果還是需要引起養(yǎng)殖場(chǎng)的高度注意，因?yàn)榧?xì)菌、霉菌的大量繁殖會(huì)分泌多種毒素協(xié)同加劇對(duì)畜禽消化系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)等的危害[13]，影響畜禽健康，給畜禽業(yè)造成巨大損失[14]。

1 場(chǎng)30 d 料袋樣品中細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)明顯高于1 d 樣品，2、3 場(chǎng)差異不明顯，可能與1場(chǎng)料袋飼料一直在場(chǎng)內(nèi)儲(chǔ)存，沒(méi)有經(jīng)過(guò)定期衛(wèi)生監(jiān)測(cè)，2、3 場(chǎng)飼料是定期運(yùn)送進(jìn)場(chǎng)的，未經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存有關(guān)；2 場(chǎng)30 d 料袋樣品中的細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)明顯低于3 場(chǎng)，是因?yàn)? 場(chǎng)非常重視飼料的管理，飼料儲(chǔ)存在通風(fēng)良好、不潮濕、不漏雨的倉(cāng)庫(kù)內(nèi)[3,15-16]，定期進(jìn)行飼料衛(wèi)生監(jiān)測(cè)，3 場(chǎng)飼料儲(chǔ)存條件相對(duì)較差，儲(chǔ)存環(huán)境潮濕、易結(jié)塊；1、2、3 料線樣品中細(xì)菌總數(shù)均明顯高于其料袋中的樣品，由于舍內(nèi)料線清潔消毒不徹底，造成飼料污染，1、2、3 場(chǎng)30 d 料線樣品中細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)分別明顯高于1 d 料線樣品，是由于在養(yǎng)殖過(guò)程中料線未定期及時(shí)清潔、消毒處理，所以隨著養(yǎng)殖時(shí)間的延長(zhǎng)，微生物污染更為嚴(yán)重；2 場(chǎng)1 d 料線樣品細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)明顯低于1、3 場(chǎng)，是由于2 場(chǎng)對(duì)料線的管理嚴(yán)格，上雞前料線清潔消毒徹底，并進(jìn)行嚴(yán)格的飼料管理[15-16]；2 場(chǎng)30 d 料線樣品細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)明顯低于1、3 場(chǎng)，由于1 場(chǎng)飼料已儲(chǔ)存較長(zhǎng)時(shí)間、飼料本身已被污染，加之養(yǎng)殖期間1、3 場(chǎng)不定期清潔料線，而2 場(chǎng)定期進(jìn)行飼料衛(wèi)生監(jiān)測(cè)，定期清潔料線，從而減少了料線對(duì)飼料的污染。

GB 13078-2017 飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)對(duì)飼料中霉菌毒素的含量作了明確規(guī)定，1、2、3 場(chǎng)1 d 樣品中4 種霉菌毒素均不超標(biāo)，1 場(chǎng)30 d 樣品中4 種霉菌毒素均超標(biāo)，3 場(chǎng)30 d 樣品中玉米赤酶烯酮含量超標(biāo)；1 場(chǎng)30 d 樣品中4 種霉菌毒素含量明顯高于1 d，由于飼料貯存時(shí)間太久，霉菌大量繁殖，產(chǎn)生大量霉菌毒素；3 場(chǎng)30 d 樣品中4 種霉菌毒素含量明顯高于1 d，由于場(chǎng)區(qū)對(duì)飼料管理不重視，飼料儲(chǔ)存在較潮濕的環(huán)境下，在貯存使用過(guò)程中，加重了霉菌的污染[3]；2 場(chǎng)1 d 樣品黃曲霉毒素B1、玉米赤酶烯酮含量明顯低于3場(chǎng)，與2 場(chǎng)對(duì)飼料管理的高度重視、飼料的儲(chǔ)存條件密切相關(guān)[3,15-16]。

4 結(jié)論

1 場(chǎng)飼料儲(chǔ)存30 d 微生物污染情況比2、3場(chǎng)飼料儲(chǔ)存10 d 嚴(yán)重，說(shuō)明肉雞場(chǎng)飼料儲(chǔ)存時(shí)間過(guò)久，嚴(yán)重增加了微生物對(duì)飼料的污染；1、3 場(chǎng)比2 場(chǎng)飼料微生物污染嚴(yán)重，說(shuō)明對(duì)飼料管理的重視程度、飼料的儲(chǔ)存條件非常重要，要定期開(kāi)展飼料衛(wèi)生監(jiān)測(cè)，選擇通風(fēng)良好、不潮濕、不漏雨、不滲水的倉(cāng)庫(kù)儲(chǔ)存，避免飼料受潮發(fā)生霉變；3 個(gè)場(chǎng)料線隨著養(yǎng)殖時(shí)間的延長(zhǎng)，對(duì)飼料的污染加重，2 場(chǎng)料線飼料微生物污染情況明顯低于1、3 場(chǎng)，說(shuō)明在養(yǎng)殖過(guò)程中不能忽視料線的管理，定期對(duì)料線進(jìn)行清潔消毒非常重要。