超聲造影聯合血清CA125 VEGF miR-125a miR-200a對早期診斷子宮內膜癌的診斷價值觀察

孫宏偉, 李麗娟, 龔 雪

(1.河北省承德市第三醫院, 河北 承德 067000 2.承德醫學院附屬醫院, 河北 承德 067000)

子宮內膜癌(Endometrial carcinoma,EC)主要表現為陰道不規則出血、排液癥狀,在晚期可出現惡病質表現,雖然現代醫療技術的發展使得子宮內膜癌的預后有一定的改善,但其發病率依然處于增長趨勢,及早診治是提高患者預后的關鍵[1]。目前臨床診斷EC的方式有細胞學檢查、刮診、陰道超聲及血清腫瘤標志物,其中刮診能夠通過病理學確診病理類型,但由于其屬于有創性操作,受檢者往往存在抗拒心理而推遲檢查,耽誤診治時機[2];隨著影像學技術的發展,經陰道超聲造影(transvaginal sonography contrast-enhanced ultrasonography,TVS-CEUS)技術憑借其安全性高及動態觀察病灶等優勢在臨床得到了廣泛應用[3]。糖類抗原125(carbohydrate antigen 125,CA125)、血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VAGF)等血清腫瘤標志物對EC的早期診斷有一定的臨床價值,但其效能均不夠理想,而血清微小RNA(micro-RNA,miRNA)作為一種新的生物標記,盡管迄今為止尚未將其包括在臨床應用規范中,但一些臨床研究指出,miRNA為疾病的早期臨床監測和確定治療方案提供了方向[4]。基于此本次研究旨在探究超聲造影聯合血清腫瘤標記物早期診斷EC的臨床價值,以期為臨床診治提供參考依據。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取我院2021年10月至2022年2月診治的120例早期EC患者為研究對象。納入標準:①符合EC相關診斷標準,且經診斷性刮宮后病理診確診為早期EC;②無放、化療病史或對造影劑過敏;③于本院完成TVS-CEUS檢查;④無手術禁忌證。排除標準:①宮腔手術史;②其他部位惡性腫瘤或嚴重內分泌疾病;③影像學資料異常。另選取同期120例接受手術切除的子宮肌瘤患者為對照組,入組患者均經術后病理診斷。EC組患者中年齡38～79歲,平均(56.15±9.67)歲,絕經前18例,圍絕經39例,絕經后63例,術后病理:內膜樣癌106例,漿液性癌14例。對照組患者中年齡36～78歲,平均(57.39±10.24)歲,絕經前20例,圍絕經35例,絕經后65例。兩組患者年齡及絕經狀態比較具有可比性(P>0.05)。

1.2方 法

1.2.1TVS-CEUS:取膀胱截石位,使用GE公司LOGIQ E8彩色多普勒成像儀和RIC 5-9-D陰道探頭,頻率 5 ～ 9MHz行常規彩超檢查,完成后將儀器調到超聲造影模式,經肘部靜脈團注射2.0mL的Sonovue(意大利Brocca),持續性觀察180s,記錄好病灶組織的顯影過程,并將獲得的造影劑灌注圖像進行編碼,觀察不同區域造影劑灌注的先后時間。由2名經驗豐富的婦科超聲醫師進行圖像分析并行診斷。

1.2.2血清CA125、VAGF水平檢測:治療前采集空腹靜脈血,經離心處理獲得血清,2h內完成檢測,電化學發光法檢測血清CA125、VEGF水平。

1.2.3血清miR-125a、miR-200a表達水平的檢測:使用3mL惰性分離凝膠凝結管采集患者全血,室溫下以4000g離心10min以去除血細胞并收集血清,然后將收集到的血清以16000g離心3min,進一步除去剩余的血細胞,離心后收集血清,并保存在-80℃的冰箱中。將100μL樣品加到300μL水中,充分混合后,加入200μL(pH=4.7-5.5)酸性苯酚。劇烈渦旋后,加入200μL氯仿。再次搖勻后,將混合物在室溫下以16000g離心15min。將上清液(約400μL)小心地移入800μL異丙醇中,并加入40μL、3M(pH=5.2)乙酸鈉。充分混合后,將混合物在-20℃下放置1h,然后在4℃下以16000g離心20min,完全棄掉上清液后,加入1mL的75%乙醇,輕輕顛倒幾次,并在4℃下以16000g離心20min。將上清液完全丟棄并在室溫下干燥。加入20μL DEPC后,沉淀物溶解并儲存在-80℃的冰箱中。按照下列RT-qPCR反應體系進行qRT-PCR檢測:TaqMan@SmallRNAAssay(20×)1.0μL,ProductfromRTreaction 2.0μL,TaqMan@UnibersalPCRMasterMixⅡ(2×)10μL,H2O 7μL,cDNA 2μL,共計20μL。反應條件:2min,50℃;95min,10℃;15min,95℃;60min,60℃。擴增條件:10min,95℃;15s,95℃;60s,60℃;40個循環。U6為內參,2-△△Ct法計算miR-125a、miR-200a的相對表達水平。

1.3觀察指標:①根據國際婦產科聯盟的標準進行術后病理評估并作為金標準,分析TVS-CEUS診斷早期EC的靈敏度、特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值及kappa一致性;②比較兩組患者血清CA125、VAGF水平;③比較兩組患者血清miR-125a、miR-200a相對表達水平。

2 結 果

2.1TVS-CEUS診斷早期EC與術后病理的一致性分析:以術后病理為金標準,TVS-CEUS診斷早期EC的靈敏度、特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值及kappa分別為81.67%、71.67%、76.67%、74.24%、79.63%和0.533。見表1。

表1 TVS-CEUS診斷早期EC的效能

2.2兩組患者血清CA125、VEGF水平的比較:EC組患者血清CA125、VEGF水平均顯著高于對照組患者(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者血清CA125 VEGF水平的比較

2.3兩組患者血清miR-125a、miR-200a的相對表達比較:EC組患者血清miR-125a相對表達水平低于對照組患者,miR-200a的相對表達水平高于對照組患者(P<0.05)。見表3。

表3 兩組患者清miR-125a miR-200a的相對表達水平的比較

2.4血清CA125、VEGF水平與miR-125a、miR-200a相對表達水平的相關性分析:Pearson相關性分析:結果顯示,患者血清CA125、VEGF水平與miR-125a相對表達水平呈負相關(P<0.05),與miR-200a相對表達水平呈正相關(P<0.05),見表4。

表4 血清CA125 VEGF與miR-125a miR-200a相對表達水平的相關性分析

2.5TVS-CEUS聯合血清腫瘤標志物預測模型構建:以病理診斷結果為因變量(“EC”=1,“子宮肌瘤”=0),以TVS-CEUS(“陽性”=1,“陰性”=0)、CA125、VEGF、miR-125a、miR-200a為自變量,納入二元Logistic回歸分析,預測模型為Logit(y)=-3.202+0.489X(TVS-CEUS)+0.547X(CA125)+0.424X(VEGF)-0.580X(miR-125a)+0.658(miR-200a),X表示回歸系數,見表5。

表5 VS-CEUS聯合血清腫瘤標志物預測模型構建二元Logistic回歸分析

2.6TVS-CEUS聯合血清腫瘤標志物早期診斷EC的ROC分析:以預測模型所得值、CA125、VEGF、miR-125a、miR-200a為檢驗變量,以病理診斷結果為狀態變量,納入ROC分析,ROC結果顯示:TVS-CEUS聯合CA125、VEGF、miR-125a、miR-200a早期診斷EC的AUC顯著高于CA125、VEGF、miR-125a、miR-200a單獨診斷的AUC(P<0.05),見表6、圖1。

圖1 TVS-CEUS聯合血清腫瘤標志物早期診斷EC的ROC曲線

表6 TVS-CEUS聯合血清腫瘤標志物早期診斷EC的效能

3 討 論

超聲造影作為臨床使用比較常見的聲學造影檢查方法,能夠在造影劑的作用下測定病灶部位的散射回聲、造影參數及血供情況,因而在多種疾病的診斷中均發揮著重要的作用[5]。50%確診EC的患者處于I期,準確的評估病變的大小、肌層浸潤的深度對患者的預后至關重要。目前臨床常用的診斷方式雖然能夠對EC有明確的診斷,但對肌層侵犯的深度無法做出準確判斷,而超聲造影則可以有效的展示病灶與子宮肌層的微循環灌注,對病灶良惡性進行評估并通過病灶與子宮肌層微循環的差異為早期EC分期提供依據。本研究結果顯示,TVS-CEUS診斷早期EC的靈敏度、特異度、準確度分別為81.67%、71.67%、76.67%,kappa一致性有0.533,具有中度一致性,這主要因為對于不典型的病例患者,即使是超聲造影也沒法顯示出正常肌層與腫瘤侵襲肌層的邊界,但相較于一般的超聲檢查,其診斷效能還是顯著提高了,與廖濤等[6]研究結果一致。

除了影像學及病理檢查外,分子生物學技術的不斷發展促進了血液學診斷方式在惡性腫瘤診斷中的應用,通過一種及多種血清因子輔助疾病篩查在疾病診斷鑒別中具有重要價值。CA125在女性卵巢組織、輸卵管及子宮內膜上均有表達,是一種廣譜的惡性腫瘤標志物,但其單獨診斷的意義不大;VEGF作為影響細胞外基質變形及血管生成的作用因子,目前對于EC的機理研究認為,子宮內膜異常增生后引起細胞間連接受損是CA125釋放進入血液,而VEGF則通過增強血管通透性促進血管生成加速癌細胞增殖[7]。本研究結果顯示,EC組患者血清CA125、VEGF水平均明顯高于對照組患者,但通過ROC分析結果顯示,CA125、VEGF用于早期診斷EC的AUC分別為0.651、0.664,效能較低,但李柯[8]的研究認為兩者聯合診斷EC可在一定程度上彌補單獨CA125檢測的準確性。血清miRNA將成為一種新的生物標記,已發現在不同體液之間具有不同豐度的miRNA。最近的研究發現,血液循環和其他體液中存在大量穩定的miRNA,血清miRNA可以抵抗核酸酶降解[9]。血清miRNA可以保存很長時間,血清miRNA具有良好的重復性和再現性,在某些疾病狀態下,尤其是在腫瘤患者的體液中,某些miRNA的表達會發生特異性變化,并且這些表達譜的特征變化可以被深入研究,體液miRNA將為疾病提供一種新的非侵入性生物標志物,具有良好的臨床應用潛力和前景。一項基礎研究發現,過表達miR-125a能夠促進EC RD95-2細胞凋亡,抑制細胞增殖,但目前臨床研究尚未明確miR-125a在血清中的表達水平[10];國外的一項回顧性隊列研究結果顯示,miR-200a在EC患者中表達明顯高于健康對照組,并且與多種miR共同診斷EC的AUC達到了0.958[11]。本研究結果顯示,EC組患者血清miR-125a相對表達水平顯著低于對照組患者,而miR-200a相對表達水平顯著高于對照組,并且相關性分析結果顯示,CA125、VEGF水平與miR-125a相對表達水平呈負相關,與miR-200a相對表達水平呈正相關。ROC結果顯示,與CA125、VEGF水平的AUC相比,miR-125a與miR-200a早期診斷EC的AUC為0.827、0.851,具有較高的診斷效能,而聯合超聲造影與4個血清指標后的AUC為0.945,敏感度為90.00%,特異度為94.17%,具有極高的診斷價值。綜上所述,TVS-CEUS在輔助早期EC診斷具有一定的價值,單獨使用血清腫瘤標志物的效能較低,但聯合診斷后的效能較高,可用于早期EC的篩查。