圍手術(shù)期外周靜脈血中長(zhǎng)鏈非編碼RNA PAX8-AS1與微RNA-1252-5p表達(dá)水平對(duì)脛骨骨折內(nèi)固定術(shù)后骨折愈合的影響

翟晨駿,劉磊,周鳴,賀健,陳俊

(宜興市人民醫(yī)院,江蘇 宜興 214200)

脛骨骨折是成年人常見(jiàn)的骨折類(lèi)型,臨床主要采用手術(shù)治療。小腿前方軟組織薄弱、血供較差,脛骨骨折術(shù)后發(fā)生骨折延遲愈合或不愈合的風(fēng)險(xiǎn)較高[1-3]。成骨細(xì)胞的分化成熟對(duì)新骨形成、骨折愈合至關(guān)重要,調(diào)控成骨細(xì)胞的分化是目前研究骨折延遲愈合發(fā)生機(jī)制及篩查標(biāo)志物的主要切入點(diǎn)。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)及微RNA(microRNA,miRNA)是近年來(lái)在骨代謝領(lǐng)域受到廣泛關(guān)注的兩種非編碼RNA。二者通過(guò)調(diào)節(jié)基因表達(dá)的方式調(diào)控成骨分化,不僅可作為研究骨折、骨質(zhì)疏松等疾病發(fā)病機(jī)制的靶向分子,還可作為評(píng)估病情的標(biāo)志物[4-5]。為探討圍手術(shù)期外周靜脈血中l(wèi)ncRNA PAX8-AS1、miRNA-1252-5p表達(dá)水平對(duì)脛骨骨折內(nèi)固定術(shù)后骨折愈合的影響,我們進(jìn)行了本研究,現(xiàn)總結(jié)報(bào)告如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料以2018年1月至2020年12月在宜興市人民醫(yī)院接受內(nèi)固定手術(shù)治療的脛骨骨折患者為研究對(duì)象。試驗(yàn)方案經(jīng)宜興市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查通過(guò),倫理批件號(hào):[2014]倫審批第005號(hào)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)①創(chuàng)傷性脛骨骨折;②單側(cè)骨折;③符合鋼板內(nèi)固定或髓內(nèi)釘內(nèi)固定的適應(yīng)證;④對(duì)本研究方案知情同意,并簽署知情同意書(shū)。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)①既往有骨折、骨結(jié)核病史者;②合并骨質(zhì)疏松、自身免疫性疾病或惡性腫瘤者;③有長(zhǎng)期應(yīng)用激素史者;④合并其他部位骨折者。

1.4 退出標(biāo)準(zhǔn)①手術(shù)非同一組醫(yī)生完成者;②采用了鋼板內(nèi)固定或髓內(nèi)釘內(nèi)固定以外的內(nèi)固定方式者;③依從性差,未完成隨訪(fǎng)者。

2 方 法

2.1 數(shù)據(jù)收集方法收集患者的性別、年齡、骨折類(lèi)型、損傷類(lèi)型、手術(shù)方式、吸煙史、飲酒史、高血壓史、糖尿病史等資料,隨訪(fǎng)觀(guān)察骨折愈合情況。骨折類(lèi)型分為開(kāi)放性骨折和閉合性骨折。損傷類(lèi)型中交通事故傷、高處墜落傷等為高能量損傷,摔傷等為低能量損傷。骨折愈合情況判定標(biāo)準(zhǔn)[6]：術(shù)后4個(gè)月時(shí),骨折達(dá)到臨床愈合,X線(xiàn)表現(xiàn)為骨折斷端有連續(xù)性骨痂通過(guò),骨折線(xiàn)消失,為正常愈合;X線(xiàn)表現(xiàn)為骨折斷端存在明顯間隙,無(wú)連續(xù)骨痂,且髓腔內(nèi)存在較多致密硬化骨質(zhì),為延遲愈合。熒光定量PCR檢測(cè)術(shù)前及術(shù)后1周、2周、4周、8周時(shí)患者外周靜脈血中l(wèi)ncRNA PAX8-AS1、miRNA-1252-5p的表達(dá)水平。

2.2 分組及評(píng)價(jià)分析方法根據(jù)術(shù)后4個(gè)月時(shí)的骨折愈合情況將患者分為正常愈合組和延遲愈合組。比較2組患者的一般資料及手術(shù)前后外周靜脈血中l(wèi)ncRNA PAX8-AS1、miRNA-1252-5p表達(dá)水平,分析影響骨折愈合的因素,評(píng)價(jià)外周靜脈血中l(wèi)ncRNA PAX8-AS1、miRNA-1252-5p表達(dá)水平對(duì)骨折延遲愈合的預(yù)測(cè)價(jià)值。

2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。2組患者性別、骨折類(lèi)型、損傷類(lèi)型、手術(shù)方式、吸煙比例、飲酒比例,以及合并高血壓、糖尿病比例的組間比較均采用χ2檢驗(yàn);年齡的組間比較采用t檢驗(yàn);手術(shù)前后不同時(shí)間點(diǎn)2組患者外周靜脈血中l(wèi)ncRNA PAX8-AS1、miRNA-1252-5p表達(dá)水平的比較采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析。采用廣義估計(jì)方程分析影響骨折愈合的因素。采用受試者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲線(xiàn)評(píng)價(jià)患者外周靜脈血中l(wèi)ncRNA PAX8-AS1、miRNA-1252-5p表達(dá)水平對(duì)骨折延遲愈合的預(yù)測(cè)價(jià)值。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

3 結(jié) 果

3.1 一般結(jié)果共納入250例患者,正常愈合組210例、延遲愈合組40例。2組患者年齡、性別、內(nèi)固定方式、吸煙比例、飲酒比例及合并高血壓比例的組間比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;延遲愈合組合并糖尿病比例、開(kāi)放性骨折比例、高能量損傷比例均高于正常愈合組。見(jiàn)表1。

表1 2組脛骨骨折患者一般資料

3.2 外周靜脈血中l(wèi)ncRNA PAX8-AS1、miRNA-1252-5p表達(dá)水平檢測(cè)結(jié)果時(shí)間因素和分組因素均存在交互效應(yīng);手術(shù)前后不同時(shí)間點(diǎn)間2組患者外周靜脈血中l(wèi)ncRNA PAX8-AS1、miRNA-1252-5p表達(dá)水平的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,即均存在時(shí)間效應(yīng);術(shù)后2組患者外周靜脈血中l(wèi)ncRNA PAX8-AS1表達(dá)水平均呈先降低、后升高的趨勢(shì),miRNA-1252-5p表達(dá)水平均呈先升高、后降低的趨勢(shì),但2組的變化趨勢(shì)均不一致;2組患者外周血中l(wèi)ncRNA PAX8-AS1、miRNA-1252-5p表達(dá)水平組間總體比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,即均存在分組效應(yīng);術(shù)后2周和術(shù)后4周時(shí),延遲愈合組外周血中l(wèi)ncRNA PAX8-AS1表達(dá)水平均高于正常愈合組,miRNA-1252-5p表達(dá)水平均低于正常愈合組。見(jiàn)表2、表3。

表2 2組脛骨骨折患者手術(shù)前后外周靜脈血中長(zhǎng)鏈非編碼RNA PAX8-AS1表達(dá)水平

表3 2組脛骨骨折患者手術(shù)前后外周靜脈血中微RNA-1252-5p表達(dá)水平

3.3 脛骨骨折內(nèi)固定術(shù)后骨折愈合影響因素分析結(jié)果廣義估計(jì)方程分析結(jié)果顯示,開(kāi)放性骨折、高能量損傷及術(shù)后2周時(shí)外周靜脈血中l(wèi)ncRNA PAX8-AS1表達(dá)水平升高和miRNA-1252-5p表達(dá)水平降低是脛骨骨折內(nèi)固定術(shù)后骨折愈合的影響因素。見(jiàn)表4。

表4 脛骨骨折內(nèi)固定術(shù)后骨折愈合影響因素分析結(jié)果

3.4 外周靜脈血中l(wèi)ncRNA PAX8-AS1、miRNA-1252-5p表達(dá)水平對(duì)脛骨骨折內(nèi)固定術(shù)后骨折延遲愈合的預(yù)測(cè)價(jià)值評(píng)價(jià)結(jié)果ROC分析結(jié)果顯示,術(shù)后2周時(shí)外周靜脈血中l(wèi)ncRNA PAX8-AS1、miRNA-1252-5p表達(dá)水平預(yù)測(cè)脛骨骨折內(nèi)固定術(shù)后骨折延遲愈合的ROC曲線(xiàn)下面積分別為0.728(P=0.000)和0.679(P=0.000),靈敏度分別為74.76%和 53.33%,特異度分別為62.50%和75.00%。見(jiàn)圖1。

圖1 外周靜脈血中長(zhǎng)鏈非編碼RNA PAX8-AS1、微RNA-1252-5p表達(dá)水平預(yù)測(cè)骨折延遲愈合的受試者操作特征曲線(xiàn)圖

3.5 典型病例典型病例圖片見(jiàn)圖2、圖3。

4 討 論

切開(kāi)復(fù)位內(nèi)固定手術(shù)是臨床治療脛骨骨折的常用方法,受到小腿前方軟組織薄弱、血供欠佳等解剖因素,外傷、手術(shù)破壞軟組織和血供等創(chuàng)傷因素,以及合并糖尿病、開(kāi)放性骨折等其他因素的影響[7-9],脛骨骨折內(nèi)固定術(shù)后發(fā)生骨折延遲愈合或不愈合的風(fēng)險(xiǎn)較高[10-12]。因此,對(duì)于脛骨骨折內(nèi)固定術(shù)后患者需要早期評(píng)估骨折延遲愈合的風(fēng)險(xiǎn),以制定個(gè)體化的術(shù)后處理方案,保障手術(shù)療效。

成骨細(xì)胞在骨折局部的增殖、分化有利于新骨生成和骨痂形成,進(jìn)而促進(jìn)骨折愈合[13-16]。LncRNA是一種長(zhǎng)度200 nt以上的非編碼RNA,在體內(nèi)通過(guò)“分子海綿”作用吸附miRNA并發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。Huang等[17]的研究發(fā)現(xiàn),骨質(zhì)疏松大鼠骨組織中LncRNA PAX8-AS1表達(dá)水平增加,miRNA-1252-5p表達(dá)水平降低,敲除LncRNA PAX8-AS1能夠靶向上調(diào)miRNA-1252-5p表達(dá)水平,促進(jìn)成骨細(xì)胞分化,改善骨質(zhì)疏松;提示LncRNA PAX8-AS1/miRNA-1252-5p軸參與成骨細(xì)胞分化的調(diào)控。研究[18-20]發(fā)現(xiàn),骨折后4周或6周時(shí)血清骨代謝標(biāo)志物Ⅰ型膠原羧基端肽β特殊序列及多種生長(zhǎng)因子、黏附分子含量的變化對(duì)骨折延遲愈合具有預(yù)測(cè)價(jià)值。但血清標(biāo)志物的檢測(cè)時(shí)間過(guò)晚不利于早期風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和干預(yù)。

本研究結(jié)果表明,脛骨骨折內(nèi)固定術(shù)后2周時(shí),外周靜脈血中l(wèi)ncRNA PAX8-AS1表達(dá)水平升高和miRNA-1252-5p表達(dá)水平降低對(duì)預(yù)測(cè)脛骨骨折內(nèi)固定術(shù)后骨折延遲愈合具有一定的價(jià)值。本研究的結(jié)果為發(fā)現(xiàn)預(yù)測(cè)脛骨骨折內(nèi)固定術(shù)后骨折延遲愈合的生物標(biāo)志物提供了依據(jù),也為研究骨折延遲愈合的發(fā)生機(jī)制提供了新靶點(diǎn)。但關(guān)于LncRNA PAX8-AS1/miRNA-1252-5p生物軸的上下游調(diào)控機(jī)制仍需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。