探究膠體金法在檢測糞便隱血中的應用

洪明鳳

（廈門科威生物技術(shù)有限公司，福建 廈門 361000）

糞便隱血試驗是臨床消化道出血性疾病常用診斷方法，可將消化道腫瘤等疾病有效篩查，當上消化道出血量較少時，外觀表現(xiàn)無異常改變，且肉眼不能辨認，因此對于疑似上消化道出血患者需要予以糞便隱血檢查。通常情況下，將聯(lián)苯胺作為檢測試劑，由于血紅蛋白中的鐵具有過氧化酶作用，可對過氧化氫中進行分解，并釋放出氧，將聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍，并形成藍色特征，即可檢測為陽性。并可根據(jù)顏色變化速度及深度將陽性結(jié)果進行區(qū)分，包括弱陽性、陽性、強陽性。

但是此種檢測方法缺乏特異性，且假陽性率較高，會受到多種因素的干擾，影響最終檢測結(jié)果，因此現(xiàn)階段該種檢測方法未得到廣泛應用。免疫學方法中包括多種方法，如膠體金法、免疫斑點法、酶聯(lián)免疫法等，其中膠體金法的應用優(yōu)勢較為突出，具有快速、便捷、經(jīng)濟、干擾少、靈敏度高等優(yōu)點，被各大醫(yī)院廣泛應用。但在實際應用中，會存在假陰性結(jié)果，需要對其綜合分析，判斷該檢測方法的診斷效能及應用價值?；诖?，以200例住院患者為研究觀察對象，意在分析膠體金法在檢測糞便隱血中的應用效果，具體報告下述。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取某院收治的住院患者200例，收治時間（2021年4月～2022年5月）。其中包括消化道出血者50例、潰瘍性結(jié)腸炎患者50例、胃潰瘍患者50例、胃炎患者50例，其中男性患者為120例，女性患者為80例，其年齡集中在37～74歲，均值（61.52±1.65）歲。此次研究不違背醫(yī)學倫理委員會批準標準，納入患者均對研究內(nèi)容知情。

納入標準：①患者接受醫(yī)學診斷；②患者資料完整；③同意醫(yī)學觀察。

排除標準：①合并肝腎功能障礙者；②合并凝血功能障礙者；③認知/交流/精神障礙；④傳染性疾??；⑤合并腫瘤/癌癥；⑥資料缺失。

1.2 方法

對所有受檢者行糞便隱血檢測。

聯(lián)苯胺法檢測：選擇1%聯(lián)苯胺冰醋酸試劑，其中將110 g聯(lián)苯胺與50%冰醋酸混合，至10 mL，待其充分溶解，并置入棕色瓶中保存。另選擇3%過氧化氫溶液，其制備方法為將10 mL30%過氧化氫溶液與蒸餾水混合，至100 mL，并置入棕色瓶中保存。在鄰甲苯胺法檢測操作中需按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》中的相關(guān)要求進行實施，并注意檢測相關(guān)注意事項。

膠體金法檢測：選擇檢測試劑由艾博生物醫(yī)藥（杭州）有限公司提供，產(chǎn)品標準編號為 YZB/浙2476-2012，確保試驗在試劑有效期內(nèi)使用。檢測原理為：利用雙抗體夾心法，試劑含有被事先固定于膜上檢測區(qū)（T）的抗人血紅蛋白和質(zhì)量控制區(qū)（C ）的相應抗體。試劑測試中，需將試劑插入樣本中，并在毛細效應作用下向上層析，若樣本中含人血紅蛋白則判定為陽性，其檢測區(qū)中出現(xiàn)一條紫紅色條帶。若樣本中無人血紅蛋白則為陰性，其檢測區(qū)（T）內(nèi)無紫紅色條帶。但無論人血紅蛋白是否處于樣本中，質(zhì)量控制區(qū)（C）中均會呈現(xiàn)出一條紫紅色帶。質(zhì)量控制區(qū)中呈現(xiàn)出的紫紅色條帶可用于判斷樣本是否充足，在層析過程中是否為正常的標準。同時，也可作為試劑中內(nèi)控標準。在操作方法中，需要向檢測管中加入0.5 mL蒸餾水，并用試管在糞便樣本的不同部位取出糞便（火柴頭大小），放置于檢測管中充分混合均勻，并將試紙條插入試管中，維持5 s，在5 min后讀取結(jié)果。

1.3 觀察指標

觀察聯(lián)苯胺法及膠體金法的陽性檢出率，并對比兩組檢查方式的診斷效能。

2 結(jié)果

2.1 臨床診斷結(jié)果

200例住院患者中，經(jīng)臨床檢驗診斷確診陽性為135例，占比67.50%。

2.2 聯(lián)苯胺法及膠體金法的陽性檢出率

鄰甲聯(lián)苯胺化學法陽性檢出率為55.00%，免疫膠體金法陽性檢出率為66.00%，免疫膠體金法陽性檢出率高于鄰甲聯(lián)苯胺化學法，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 聯(lián)苯胺法及膠體金法的陽性檢出率比較[n（%）]

2.3 陽性患者疾病分布

聯(lián)苯胺法陽性檢查中，包括消化道出血38例，占比76.00%；潰瘍性結(jié)腸炎35例，占比55.00%；胃潰瘍22例，占比44.00%；胃炎15例，占比30.00%。聯(lián)苯胺法陽性檢查中，包括消化道出血42例，占比84.00%；潰瘍性結(jié)腸炎37例，占比74.00%；胃潰瘍30例，占比60.00%；胃炎23例，占比54.00%。見表2。

表2 聯(lián)苯胺法及膠體金法的陽性檢出率比較[n（%）]

2.4 診斷效能比較

靈敏度、特異度、診斷符合率數(shù)據(jù)比較，鄰甲聯(lián)苯胺化學法檢查效能81.48%、86.15%、83.00%；免疫膠體金法檢查效能：97.78%、95.38%、97.00%，靈敏度、特異度、診斷符合率均是免疫膠體金法檢出效能更加理想（P＜0.05）。見表3，表4，表5。

表3 鄰甲聯(lián)苯胺化學法檢出情況

表4 免疫膠體金法檢出情況

表5 兩種檢查方式診斷靈敏度、特異度、準確度比較

3 討論

糞便隱血檢查也稱為便潛血試驗，對于上消化道出血等疾病患者來說，可通過糞便隱血檢查明確疾病，并對消化道惡性腫瘤進行篩查，具有重要的臨床參考價值。且在相關(guān)數(shù)據(jù)研究統(tǒng)計中，消化性潰瘍的陽性率在40%～70%范圍內(nèi)，并呈現(xiàn)出間斷陽性。而一些消化道癌癥如肺癌的糞便隱血陽性檢出率可高達95%，同時對于其他多種疾病導致的消化道出血患者來說，在糞便隱血檢查中，均會呈現(xiàn)出陽性反應。因此，糞便隱血檢查在臨床診療中具有重要意義，需要提高該檢查結(jié)果準確性，為患者治療提供有力依據(jù)。需要找到一種敏感性高，特異性強的檢驗方法，在糞便隱血檢驗中發(fā)揮作用。其中包括鄰甲聯(lián)苯胺化學法及免疫膠體金法等，不同檢測方法的操作要求及注意事項均有所不同，且得到的檢驗結(jié)果也存在差異。

膠體金法是一種常用的標記技術(shù)，其示蹤標志物為膠體金，將其應用于抗原抗體檢測中，是一種新型的免疫標記技術(shù)。其優(yōu)勢明顯，特點顯著，近年來在各種生物學中被廣泛應用，臨床利用免疫印跡技術(shù)均會使用膠體金標記，并且會用于流式、電鏡、免疫、分子生物學及生物芯片中。需要將特異的抗體固定于酸類纖維素膜的某區(qū)帶中，并在干燥的酸類纖維素一端浸入樣品后，受到毛細管的作用，使得樣品沿著該膜向前移動，在移動至固定抗體區(qū)域后，樣品中相應抗原會與該抗體發(fā)生特異性結(jié)合。同時，利用金粒的高電子密度的特性，可在金標蛋白結(jié)合位置，當標志物在相應配體位置大量聚集時，會出現(xiàn)明顯的斑點，斑點呈現(xiàn)紅色，肉眼清晰可見，如圖1。

圖1 膠體金法檢測

在試劑制備中，需要確保其生產(chǎn)快速且精確，其要點在于運用到的單克隆抗體、多元克隆抗體、抗原、半抗原、蛋白嵌合物及膠體金等原料的靈敏性及特異性等是否會達到最高標準。而鄰甲聯(lián)苯胺化學法的檢測原理則不同，主要基于一些過氧化物活性的亞鐵血紅素中，可將過氧化氫進行還原，并形成水，將無色的供氧體鄰-甲苯胺氧化成藍色的鄰-甲偶氮苯，但是會受到多種藥物、食品等因素的影響產(chǎn)生假陽性的檢測結(jié)果，并影響最終檢驗結(jié)果的準確性。而免疫膠體金法則不會受到相關(guān)因素的干擾。

研究對200例住院患者進行糞便隱血檢測，分別實施鄰甲聯(lián)苯胺化學法和免疫膠體金法，免疫膠體金法陽性檢出率高于鄰甲聯(lián)苯胺化學法（P＜0.05）；靈敏度、特異度、診斷符合率均是免疫膠體金法檢出效能更加理想（P＜0.05）。結(jié)果提示，在糞便隱血樣本檢測中，選用免疫膠體金法檢測具有較高的診斷效能。但是在實際操作中也需明確細節(jié)標準及注意事項，在實驗操作時需要注意，將原包裝袋中取出的試條需在1小時之內(nèi)盡快使用，并在使用時將試紙條與樣品稀釋液恢復至室溫20～30 ℃，而對于收集到的糞便樣本也需在30 min內(nèi)檢測。同時，在試紙條箭頭指向的一端浸入標本溶液中，要避免超過標記線，并當紫紅色條帶顯現(xiàn)時，測試結(jié)果需在5 min內(nèi)讀取，而10 min后再讀取結(jié)果則無效。

4 結(jié)束語

免疫膠體金法在糞便隱血檢測中具有諸多優(yōu)勢，其靈敏度高、特異性強，不易受到多因素的干擾，操作簡單、快捷，整體檢查效能較佳，值得臨床推廣應用。