河源市源城區(qū)2 468例兒童呼吸道感染病原體核酸檢測(cè)結(jié)果分析

陳運(yùn)恒 邱 莉 廖翠芳 駱 紅

廣東省河源市婦幼保健院（河源 517000）

呼吸道感染是河源地區(qū)住院患兒最常見(jiàn)的疾病之一，急性呼吸道感染是兒童最常見(jiàn)的感染性疾病，急性下呼吸道感染是5歲以下兒童死亡的主要原因［1］，嚴(yán)重威脅兒童生命健康，給家庭和社會(huì)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)及疾病負(fù)擔(dān)。近三年來(lái)，新型冠狀病毒的全面爆發(fā)，嚴(yán)重威脅著人民生命健康，特別是免疫功能低下的老年人及兒童，事實(shí)證明呼吸道核酸檢測(cè)對(duì)呼吸道疾病的早發(fā)現(xiàn)、早診斷發(fā)揮著重要作用［2］。因此，盡早地明確呼吸道感染的病原體對(duì)臨床診斷、疾病的防控、抗生素的合理應(yīng)用具有重要意義，本次研究使用PCR技術(shù)和多重微球雜交技術(shù)，對(duì)廣東省河源市源城區(qū)長(zhǎng)安街河源市婦幼保健院2020年3月—2022年2月因呼吸道感染住院患兒呼吸道分泌物進(jìn)行6種常見(jiàn)病原體檢測(cè)，現(xiàn)分析報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2020年3月—2022年2月在河源市婦幼保健院兒科因呼吸道感染住院的2 468例患兒。男1 493例，女975例，年齡29日～12歲，按《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》［3］診斷標(biāo)準(zhǔn)確診為呼吸道感染。本研究所涉及患兒均匿名報(bào)道，研究方案經(jīng)河源市婦幼保健院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批件號(hào)：YXLL-202304）。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本的采集、保存和運(yùn)送 患兒入院時(shí)由兒科住院部經(jīng)專業(yè)培訓(xùn)的護(hù)士用一次性無(wú)菌拭子擦拭兩側(cè)腭弓、咽及扁桃體，將咽拭子置入無(wú)菌管中，密封送檢。標(biāo)本采集后2小時(shí)內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室，如無(wú)法送到可4 ℃暫存48小時(shí)以內(nèi)，超過(guò)48小時(shí)則需-20 ℃低溫冷凍保藏。避免反復(fù)凍融，造成假陰性。

1.2.2 標(biāo)本檢測(cè) 采用廣州市達(dá)安臨床檢驗(yàn)中心提供的呼吸道病原體核酸檢測(cè)試劑盒，本試劑盒使用PCR技術(shù)和多重微球雜交技術(shù)，針對(duì)呼吸道病原體設(shè)計(jì)PCR引物探針，PCR擴(kuò)增分兩管進(jìn)行。通過(guò)PCR獲得標(biāo)記的產(chǎn)物后與微球上探針雜交，加入顯色劑，上機(jī)檢測(cè)。根據(jù)病原體對(duì)應(yīng)探針的信號(hào)的高低對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行判斷。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSSAU軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。定性資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 呼吸道病原體檢出的總體情況

2 468 例標(biāo)本中檢測(cè)出1 302例陽(yáng)性，檢出率為52.8%。單一病原體感染檢出率有高至低依次為：呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）、肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae，Sp）、流感嗜血桿菌（Haemophilus influenzae，Hi）、他莫拉菌（Moraxella catarrhalis，MC）、肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae，MP）、腺病毒（adenovirus，ADV），混合感染檢出率為12.4%（307/2 468），二種病原體混合感染多見(jiàn)，其中以Sp合并RSV感染最多見(jiàn)，占混合感染中43.3%（133/307）。三種病原體同時(shí)感染檢出41例，排在前三位的病原體分別是：Sp、MC、RSV16例，Hi、Sp、RSV 10例，Hi、Sp、MC10例。兩例為四種病原體混合感染，分別為Hi、Sp、MC、RSV，Hi、Sp、MC、MP。其他混合感染組合樣式多樣，無(wú)明顯規(guī)律。見(jiàn)表1。

表1 6種呼吸道病原體核酸檢測(cè)結(jié)果

2.2 呼吸道病原體檢出情況

嬰兒組（29日～1歲）、幼兒組（1～3歲）、學(xué)齡前組（3～6歲）、學(xué)齡組（6～12歲）。嬰兒組和幼兒組中RSV檢出率最高，但幼兒組Sp檢出率較嬰兒組明顯增高。學(xué)齡前組則以Sp檢出率最高，RSV較前兩組明顯減少，Hi檢出率在這個(gè)年齡組較其他組高。學(xué)齡組Sp檢出率在4個(gè)年齡組中占比最高，混合感染在各年齡組均排在前三。不同年齡組呼吸道病原體檢出率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在呼吸道感染住院患兒中，年齡29日～3歲共1 829例，嬰兒組和幼兒組中以病毒感染為主，其中RSV檢出率最高，混合感染次之，而年長(zhǎng)兒以細(xì)菌感染為主。ADV、MP在各年齡組差異不大。見(jiàn)表2 。

表2 不同年齡組呼吸道核酸6項(xiàng)檢出情況 ［例（%）］

2.3 各季節(jié)呼吸道病原體檢出情況

按季節(jié)分；春季（3～5月）、夏季（6～8月）、秋季（9～11月）、冬季（12～次年2月）。春季混合感染的檢出率最高，單一病原體感染春季Sp檢出率稍高于RSV，Hi在春季檢出率占比較其他季節(jié)高。夏季則RSV檢出率高于Sp，該季節(jié)MC、ADV的檢出率占比均高于其他季節(jié)。秋季和冬季均是RSV檢出率最高，冬季Sp檢出率僅次RSV，MP全年散發(fā)，占比均較低。我院呼吸道感染住院患兒多集中在秋冬季節(jié)，不同季節(jié)呼吸道病原體的檢出率不同，RSV在秋季節(jié)檢出率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他病原體。不同季節(jié)樣本的病原體分布比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 不同季節(jié)呼吸核酸6項(xiàng)檢出情況 ［例（%）］

2.4 呼吸道病原體在不同性別的分布情況

2 468 例呼吸道感染患兒中，男1 493例，檢出率54.0%，女975例，檢出率50.8%，不同性別組的各病原體檢出率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表4。

表4 不同性別的呼吸道核酸6項(xiàng)的檢出情況 ［例（%）］

3 討 論

呼吸道疾病感染病原體多種多樣，主要有細(xì)菌、病毒、支原體、衣原體等，病原學(xué)檢測(cè)方法也有很多種，包括分離培養(yǎng)、抗原檢測(cè)、抗體檢測(cè)和核酸檢測(cè)等［2］。分離培養(yǎng)為呼吸道感染病原體檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”［4］，但耗時(shí)長(zhǎng)、敏感性低，不能及時(shí)為臨床診療提供依據(jù)；抗體檢測(cè)因存在窗口期易導(dǎo)致假陰性結(jié)果；抗原檢測(cè)常采用直接免疫熒光法，特異性較高，但靈敏度偏低，并且容易引起假陽(yáng)性結(jié)果［5］。呼吸道核酸檢測(cè)是對(duì)病原體的DNA或RNA進(jìn)行檢測(cè)，這種基于分子生物學(xué)的技術(shù)，具有更高的靈敏度、特異度［2］。

本次回顧性研究河源市婦幼保健院兒科住院部2020年3月—2022年2月因呼吸道感染住院的患兒2 468例，呼吸道病原體檢出率為52.8%，稍高于國(guó)內(nèi)不同地區(qū)多位學(xué)者報(bào)道的呼吸道病原檢測(cè)陽(yáng)性率，如福建為43.26%［6］，蘇州為30.74%［7］，北京為50.45%［8］，可能與不同地區(qū)在收集病例、采樣、檢測(cè)方法、氣候、病原學(xué)流行特點(diǎn)等方面存在差異有關(guān)。結(jié)果顯示，兒童呼吸道感染最主要病原體是病毒，檢出率為21.3%，這與國(guó)內(nèi)張曉麗［9］、黃艷智［10］報(bào)道一致。而RSV檢出率最高，占所有陽(yáng)性病例的40.4%（526/1 302），研究顯示河源市源城區(qū)住院兒童呼吸道感染的主要病毒是RSV。全球每年5歲以下因RSV感染住院的兒童大約有270萬(wàn)～380萬(wàn)，其中約4.8萬(wàn)～7.5萬(wàn)人死亡［11］。其次是細(xì)菌感染，以Sp病原體檢出率最高，MP感染的呼吸道疾病呈散發(fā)發(fā)病。

研究顯示在2 468例中有1 829例為29日～3歲的患兒，嬰幼兒為呼吸道感染疾病的主要人群，這與該年齡組患兒的自身免疫、呼吸系統(tǒng)發(fā)育不完善、對(duì)病原體的抵抗力差有很大關(guān)系。不同年齡組呼吸道感染的病原體檢出率不同，嬰兒組和幼兒組病原體檢出率最高的是RSV，分別為57.45%、32.86%，提示在我院呼吸道感染的嬰幼兒以RSV感染為主。混合感染在嬰兒組、幼兒組、學(xué)齡前組、學(xué)齡組陽(yáng)性率依次為20.92%、28.13%、24.90%、9.26%，混合感染有多種模式，有一種細(xì)菌+一種病毒、二種細(xì)菌+一種病毒、三種細(xì)菌+一種病毒、一種細(xì)菌+MP+一種病毒等等，最多見(jiàn)的是Sp+RSV。混合感染的增多與模式多樣化是否與河源市源城地區(qū)的流行病學(xué)、生活環(huán)境、臨床習(xí)慣性用藥等有關(guān)聯(lián)？目前對(duì)混合感染和疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性的研究有限，一些報(bào)道顯示多病原體合并感染可能增加疾病的嚴(yán)重程度［12-14］，而有些研究卻表示多種病原體合并感染的臨床癥狀之間沒(méi)有顯著性差異［15］，由于本檢測(cè)采集標(biāo)本為口咽部拭子，故對(duì)細(xì)菌陽(yáng)性結(jié)果的判斷還需臨床醫(yī)師根據(jù)患兒臨床表現(xiàn)進(jìn)行綜合評(píng)估。判斷是定植菌或致病菌，謹(jǐn)慎選擇抗生素治療。

結(jié)果表明，因呼吸道感染住院的患兒多集中在秋冬季節(jié)，其中秋季6種呼吸道病原體檢出率均高于其他三季，提示該季節(jié)為呼吸道感染的高發(fā)季節(jié)，應(yīng)做好防控工作。RSV在秋冬季節(jié)檢出率明顯高于春夏季，與池細(xì)俤等［16］報(bào)道一致，春季混合感染的檢出率最高，ADV在夏季中檢出率最高，占全年80%，其他病原體全年呈散發(fā)流行。

綜上所述，秋冬季節(jié)是河源市源城區(qū)呼吸道感染的高發(fā)季，多見(jiàn)于嬰幼兒群體，而RSV為秋冬季節(jié)嬰幼兒的主要病原體，Sp次之。呼吸道核酸檢測(cè)為我們進(jìn)一步了解本地區(qū)呼吸道感染患兒的流行病學(xué)情況提供了可靠的依據(jù)，促進(jìn)了我院提高臨床診療水平，規(guī)范抗生素的合理應(yīng)用，有助相關(guān)疾病的防控工作。