無花果采后炭疽病原菌鑒定及貝萊斯芽孢桿菌防治效果

楊婉藝，姜 毅，湯 靜，席 飛，孫佩馨，肖紅梅*

（南京農業大學食品科學技術學院，江蘇 南京 210095）

無花果（Ficus caricaL.）風味獨特、肉質鮮美，富含糖類、纖維素、維生素、礦物質和多種氨基酸[1]，是酚類物質的良好來源，具有優秀的抗氧化能力[2]。但無花果皮薄多汁，采后呼吸代謝旺盛，其果目結構又極易遭受病原微生物的侵染，因此會造成嚴重的采后病害。炭疽病是無花果采后主要病害之一[3]，病狀為褐色的圓形病斑，隨著病害程度加重，病斑面積不斷擴大，使果實軟化腐爛，失去食用價值。炭疽菌侵染寄主類型的范圍甚為廣泛，不同的寄主中均具有1 種或多種優勢炭疽菌株[4]，明確無花果炭疽病原體的種屬對無花果炭疽病的防控具有重要的意義。由于炭疽菌的分生孢子、附著胞、菌落形態等特征穩定性差，且利用單一的內源轉錄間隔區（internally transcribed spacer，ITS）基因序列鑒定往往難以準確劃分炭疽菌歸屬復合種下的生理小種[5]，而多基因聯合鑒定能夠很好地區分親緣關系較近的小種，多基因序列聯合鑒定的物種進化研究方法逐漸成為植物病菌菌株鑒定常用的有效方法之一[6]。

炭疽病的頻發限制了無花果產業的發展，尋找一種合適的防控技術迫在眉睫。目前，農業上主要采用傳統的化學方法防控無花果的炭疽病害，但化學物質的長期超量使用容易造成藥物殘留、環境嚴重污染、病菌耐藥性增強等問題[3,7]。生防菌的應用可以有效規避或減輕化學藥劑所帶來的問題[8]，綠色安全健康的生物防治成為國內外的研究熱點。芽孢桿菌屬（Bacillusspp.）是生防菌的主要微生物之一，許多種[9-11]都對炭疽菌的生長具有抑制能力，且對果蔬炭疽病的防治應用效果往往優于假單胞桿菌屬（Pseudomonassp.）[12-13]、木霉屬（Trichodermasp.）[14-15]等拮抗微生物。其中，貝萊斯芽孢桿菌（Bacillus velezensis）已被證實可以有效控制多種果蔬真菌病害如番茄早疫病[16]、蘋果灰霉病[17]、芒果炭疽病[18]和細菌病害如柑橘細菌性潰瘍病[19]、香蕉軟腐病[20]，具有優秀的生防應用潛力。芽孢桿菌一方面可以產生對病原菌有直接殺傷作用的抑菌物質[21]；另一方面，芽孢桿菌還可以通過誘導寄主抗病基因的表達增強果實的抗病性[22]，從而減少采后病害的發生。目前鮮見貝萊斯芽孢桿菌防控無花果炭疽病相關研究與報道。

2022年中央一號文件強調“推進農業農村綠色發展”“深入推進農業投入品減量化”。病原菌的分離、鑒定是分析無花果病害流行規律的前提。本課題組從具有典型炭疽病發病癥狀的無花果病果上獲得一株炭疽病菌FC.006（以下簡稱FC.006），前期研究發現，生防菌B.velezensisRD.006（以下簡稱RD.006）對FC.006菌絲生長具有顯著抑制作用；果實異孔接種實驗證明RD.006可以誘導提高果實對FC.006的抵御能力；RD.006處理能夠降低采后‘布蘭瑞克’無花果的病情指數，有效保持果實品質。在此基礎上，本實驗采用多基因序列聯合鑒定FC.006的基因序列，同時進一步探究RD.006對其的防治效果，以期為無花果采后病害的鑒定和生物防治提供理論基礎，為我國農林產業“兩減一增”戰略實施和相關技術提供理論支撐。

1 材料與方法

1.1 菌株、材料與試劑

貝萊斯芽孢桿菌（Bacillus velezensisRD.006）保存于LB培養基（4 ℃）。

‘布蘭瑞克’無花果果實，采摘于江蘇省句容市虎耳山無花果專業合作社，采后2 h內運回實驗室。挑選具有明顯炭疽病發病癥狀的果實用于病原菌的分離；挑選色澤統一、大小一致、無機械損傷、無病蟲害的健康果實用于貯藏保鮮實驗。

1.2 儀器與設備

HVE-50自動蒸汽滅菌鍋 日本Hirayama有限公司；HP-2136便攜式色差儀 上海譜熙光電科技有限公司；UV BlueStar A紫外-可見分光光度計 北京萊伯泰科儀器有限公司；TGL20M臺式高速冷凍離心機 湘潭湘儀儀器有限公司；WYT-4型手持糖量儀 紹興市億納儀器制造有限公司；102光學顯微鏡 日本尼康公司；恒溫恒濕培養箱 寧波海曙賽富實驗儀器廠；XB-K-25血球計數板 上海醫用光學儀器廠；HH-6恒溫水浴鍋常州國華電器有限公司；NanoDrop2000分光光度計、QuantStudioTM6 Flex實時熒光定量聚合酶鏈式反應（quantitative real-time polymerase chain reaction，qPCR）系統 美國賽默飛世爾科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 無花果采后病原菌的分離與鑒定

1.3.1.1 病原菌株的分離與純化

選取‘布蘭瑞克’典型病果，采用組織分離法進行病原菌株的分離。切取病果病健交界處組織塊，依次放入體積分數75%乙醇10 s、質量分數1%次氯酸鈉溶液20 s，隨后用無菌水漂洗3 次，切取組織塊中央的部分（約5 mm×5 mm）于無菌濾紙上吸干組織表面水分，用無菌鑷子將組織塊置于PDA培養基上，倒置培養皿于25 ℃恒溫培養箱中黑暗培養3～5 d，用無菌接種針挑取單菌落邊緣菌絲于新的PDA培養基上進行純化，重復2～3 次直至得到純化的菌株，觀察菌株的菌落形態、菌絲和孢子的形態特征。結合《真菌鑒定手冊》[23]對病原菌進行初步鑒定。將分離純化的菌株回接于健康的‘布蘭瑞克’果實，根據科赫法則驗證分離菌株的致病性，獲得致病菌株。

1.3.1.2 病原菌株多基因聯合生物學鑒定

利用十六烷基三甲基溴化銨（c e t y l t r i m e t h y l ammonium bromide，CTAB）法[5]提取25 ℃培養7 d的菌絲體DNA。取100 mg菌絲體于裝有500 μL CTAB裂解液（提前65 ℃預熱）的離心管中，65 ℃水浴1 h，水浴期間每隔 10 min振蕩一次，水浴結束后室溫冷卻，加入500 mL氯仿-異戊醇溶液（體積比24∶1，下同），翻轉混勻，4 ℃、12 000 r/min離心10 min，吸取上清液轉移至新的離心管中，加入等體積氯仿-異戊醇溶液，重復抽提一次。向上清液中加入2 倍體積的無水乙醇，置于4 ℃冰箱過夜沉淀DNA，在4 ℃、12 000 r/min條件下離心15 min，棄去上清液。用體積分數70%乙醇洗滌沉淀2 次，棄上清液。待殘余乙醇揮發之后加入適量1×TE緩沖液溶解。取部分樣品分別用于1%的瓊脂糖凝膠電泳和濃度檢測，質量合格的樣品置于－20 ℃冰箱中保存待用。

基于各基因序列引物（表1）進行PCR擴增反應，反應程序為：預變性4 min，95 ℃變性30 s，59 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，35 個循環；72 ℃延伸7 min。擴增產物使用1%瓊脂糖凝膠電泳進行檢測，有清晰條帶的PCR產物送北京擎科生物科技有限公司進行測序，將所得結果在GenBank數據庫中與己知同源序列進行同源性比較，利用MEGA-X軟件通過鄰近法構建系統發育樹。

表1 病原菌株多基因序列引物Table 1 Primers used for amplification of multiple gene sequences of pathogenic strains

1.3.2 FC.006的致病孢子濃度篩選

取健康的無花果果實，體積分數75%乙醇消毒20 s，用無菌水沖洗3 次，自然晾干后，在果實腰部用滅菌打孔器形成1 個直徑3 mm、深4 mm的圓孔，在圓孔處分別接種20 μL FC.006孢子懸液：1×103、1×104、1×105、1×106、1×107個/mL，并設置FC.006菌碟貼于果實傷口處（菌碟菌絲朝向果肉）陽性對照和無菌水陰性對照。自然晾干后，用聚乙烯保鮮袋單果包裝，置于25℃、相對濕度85%～95%的恒溫培養箱中存放，分別于3 d和5 d時采用十字交叉法測定果實發病直徑，以篩選后續實驗中孢子使用濃度。

1.3.3 貝萊斯芽孢桿菌RD.006對FC.006的離體抑制效果測定

在P DA 平板中央打孔，接入培養7 d 的病原菌FC.006，用無菌接種針在病原菌兩側平行劃線接入RD.006（距平板中央大約2.5 cm），在28 ℃、相對濕度90%～95%的條件下培養4～12 d。以僅接種病原菌的平板作為對照，從平板背面采用十字交叉法測量病原菌菌落的直徑大小，并根據以下公式計算抑菌率。

1.3.4 貝萊斯芽孢桿菌RD.006對無花果果實炭疽防治效果檢測

果實消毒和打孔處理同1.3.2節，對果實接種以下處理液20 mL：1）FC組：1×105個/mL FC.006孢子懸液；2）RD組：1×108個/mL RD.006菌懸液；3）FC-RD組：先接種1×105個/mL FC.006孢子懸液，24 h后接種1×108個/mL RD.006菌懸液；4）RD-FC組：先接種1×108個/mL RD.006菌懸液，24 h后接種1×105個/mL FC.006孢子懸液。

接種完畢室溫自然晾干后，用聚乙烯保鮮袋單果包裝，置于25 ℃、相對濕度85%～95%的恒溫培養箱中貯藏。每組處理3 個平行，每平行15 個果實。貯藏5、7 d時測量果實的病斑直徑。

1.3.5 無花果果實抗性基因表達量的測定

果實處理方式同1.3.4節中FC組和RD-FC組接種方式，每組設置3 個平行，每平行75 個果實。在第二次接種完成后的0、12、24、48、54、72 h后，用滅菌的手術刀取果實傷口周圍1 cm寬的組織，放入液氮中速凍，再置于－80 ℃冰箱中保存備用，提取果實組織樣品RNA進行相關基因表達量測定。

采用改良CTAB法[28]提取無花果總RNA，反轉錄和去除基因組DNA采用Takara RR047A試劑盒方法操作，通過1%瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測上述提取RNA樣品的質量和濃度，合格樣品用于后續的qPCR反應。基因表達水平的測定采用Takara RR420A試劑盒的方法操作，采用ABI 7500 system qPCR儀器研究無花果果實6 個抗病相關基因的表達。相關引物如表2所示。上機反應條件為：95 ℃、30 s，95 ℃、5 s，60 ℃、34 s，共40 個循環。將反應結果用閾值周期（CT值）進行歸一化處理，用2?ΔΔCT法表示目標基因相對于管家基因（Actin）的相對表達水平。

表2 無花果相關抗病基因引物Table 2 Primers for amplification of disease resistance genes in fig fruits

1.4 數據分析

采用SAS 8.2軟件進行Duncan’s多重比較，P＜0.05表示差異顯著；圖表用Excel、Graphpad軟件進行繪制。

2 結果與分析

2.1 無花果采后病原菌株FC.006的分離與鑒定

2.1.1 病原菌FC.006形態鑒定結果

從無花果病果上分離得到一株病原菌株（圖1A）。依據科赫法則，將其接種至無花果上進行回接驗證致病性并再次分離，得到再分離菌株FC.006（圖1B），顯微鏡下觀察其菌絲細長，表面較平滑，存在部分分支（圖1C）。FC.006在PDA培養基上形成的菌落邊緣規則，顏色由中央黑褐色向外擴至四周顏色變淡至邊緣帶呈白色，在培養后期菌落背面處可以觀察到黑色附著胞形成的輪紋狀特征，易產生橙色分生孢子堆，分生孢子呈柱形，兩端鈍圓（圖1D）。

圖1 病原菌株FC.006的形態特征Fig.1 Morphological characteristics of FC.006

2.1.2 病原菌FC.006的多基因序列分析鑒定

無花果病原菌株FC.006經rDNA-ITS序列初步鑒定為膠孢刺盤孢復合種（Colletotrichum gloeosporioides），對ITS-GAPDH-TUB-CHS-ACT-CAL6 個基因聯合序列與表3所示的模式菌株序列進行同源性比較，并構建系統發育樹（圖2），FC.006鑒定為膠孢刺盤孢下的小種哈銳炭疽菌（C.Horii）。

圖2 FC.006的多基因序列聯合構建的系統發育樹Fig.2 Phylogenetic tree of FC.006 based on multigene sequence combination

表3 多基因聯合鑒定分離菌株FC.006膠孢刺盤孢復合種系統發育樹分析中相關模式菌株信息Table 3 Information about type strains used for multi-gene phylogenetic analysis for identification of Colletotrichum gloeosporioides FC.006

2.1.3 FC.006的致病孢子濃度篩選結果

哈銳炭疽菌FC.006的孢子能夠有效引起無花果炭疽病的發生。無花果果實炭疽病害發病初期傷口周圍發黑，后期黑色病斑逐漸擴大，呈輪紋狀且向內凹陷，并伴有白色菌絲和橙色孢子產生，果實軟爛且果目滲有腐爛汁水。由圖3可知，在設置的接種范圍（1×103～1×107個/mL）內，隨著孢子接種濃度的增高，果實的病斑直徑增加，果實炭疽病發病情況嚴重程度加大。接種孢子濃度1×105個/mL和1×106個/mL果實的病斑直徑接近，在接種3 d和5 d時，病斑直徑分別約為1.5 cm和2.4 cm；接種5 d時，接種孢子濃度1×107個/mL的果實完全腐爛。感染低孢子濃度（1×103個/mL）的果實顯現較為輕微的病狀，果實組織對病原菌侵染具有一定的抵御能力；接種高孢子濃度（1×106個/mL和1×107個/mL）的果實發病嚴重，果實組織快速進入死亡狀態；孢子中間濃度（1×104個/mL和1×105個/mL）侵染引起果實較為嚴重的炭疽病，果實發病進程適中，因而接種1×105個/mL孢子濃度果實的生理狀態可用于本實驗后續研究。

圖3 接種FC.006不同孢子濃度的無花果果實5 d時發病情況（A）和病斑直徑（B）Fig.3 Disease symptom (A) and lesion diameter (B) of fig fruits at 5 days after inoculation with different spore concentrations of FC.006

2.2 貝萊斯芽孢桿菌RD.006對炭疽菌FC.006的抑制作用

在RD.006和FC.006對峙平板上發現，RD.006對FC.006具有明顯的抑制作用，加入RD.006后，FC.006的生長直徑明顯變小，菌落呈現規則的梭形；在RD.006的生物脅迫下，FC.006已顯示出逆境下的特殊生理形態，菌落中央提前生成了橙色的孢子（圖4B）。培養至8 d時，對照組FC.006菌落已生長至整個平板（圖4A），此時RD.006的抑菌率達到85%（圖5），對峙平板中FC.006菌落停止擴展且與RD.006之間存在著明顯的抑菌帶。

圖4 貝萊斯芽孢桿菌RD.006對炭疽菌FC.006的抑菌效果Fig.4 Antimicrobial effect of Bacillus velezensis RD.006 on FC.006

圖5 貝斯芽孢桿菌RD.006對炭疽菌FC.006的抑菌率Fig.5 Inhibition rate of Bacillus velezensis RD.006 against FC.006

2.3 貝萊斯芽孢桿菌RD.006對無花果炭疽病的防治效果

如圖6所示，在貯藏5 d時，RD-FC組的果實病斑直徑顯著小于FC組和FC-RD組果實（P＜0.05）；貯藏7 d時，RD-FC組果實的病斑直徑是同時期FC組果實的41.5%，而FC-RD組果實的病斑直徑達2.3 cm，與此時只接種病原菌的FC組果實病斑直徑接近，說明預防接種貝萊斯芽孢桿菌RD.006對無花果采后炭疽病有良好的防控作用，且提前接種生防菌的接種方式有助于降低感染炭疽病果實腐爛的嚴重程度，這可能是因為提前接種生防菌會誘導果實組織產生更強的抗病性。

圖6 貝萊斯芽孢桿菌RD.006對無花果炭疽病害的預防和防治作用Fig.6 Preventive and control effects of Bacillus velezensis RD.006 on anthracnose disease of fig

2.4 貝萊斯芽孢桿菌RD.006對無花果果實抗性基因的影響

苯丙氨酸解氨酶（phenylalanineammonialyase，PAL）、肉桂酸-4-羥化酶（cinnamate 4-hydroxylase，C4H）和4-香豆酰-輔酶A連接酶（4-coumarate: coenzyme A ligase，4CL）是苯丙烷代謝途徑中的3 個關鍵酶[29]。取樣時間0 h對應果實損傷接種RD.006菌懸液（RD-FC組）和無菌水（FC組）之后的24 h。由圖7A～C可知，RD-FC組中FcPAL、FcC4H、Fc4CL表達量分別在取樣0 h呈現較高的表達量，可能是因為生防菌屬于生物源激發子，可以誘導果實的抗性基因表達上升，取樣0 h之后這3 個基因的表達量都出現不同程度的下降，之后在不同時間點又恢復上升趨勢并在54 h左右達到峰值。FcPAL在FC組的最高表達量顯著小于其在RD-FC組的最大表達量（P＜0.05），同時后期表達量峰值出現的時間滯后于RD-FC組，FcC4H和Fc4CL基因的表達結果與FcPAL相類似，說明生防菌RD.006處理可以誘導果實迅速發生抗病反應，并且在貯藏后期維持抗病相關基因FcPAL、FcC4H、Fc4CL更高的表達水平。

圖7 貝萊斯芽孢桿菌RD.006對無花果果實FcPAL（A）、FcC4H（B）、Fc4CL（C）、FcAPX（D）、FcCAT（E）、FcPOD（F）基因表達的影響Fig.7 Effect of Bacillus velezensis RD.006 on the expression of the FcPAL (A), FcC4H (B), Fc4CL (C), FcAPX (D), FcCAT (E) and FcPOD (F) genes in fig

木質素等化合物的合成與植物抗病性密切相關，過氧化物酶（peroxidase，POD）參與木質素合成反應的最后一部分，即木質素單體氧化聚合反應，此反應需要H2O2的參與。抗壞血酸酶（aseorbate peroxidase，APX）和過氧化氫酶（catalase，CAT）可以協同清除細胞產生的H2O2，進而減少過氧化物對細胞的破壞。由圖7D～E可知，取樣0 h兩組的FcAPX表達量無顯著差異；在12 h時RD-FC組果實的FcAPX表達量迅速上調至最高值，而FC組的變化并不顯著；在取樣后期（36～72 h），RD-FC組FcAPX表達量顯著小于FC組（P＜0.05）。FcCAT的表達結果與FcAPX表達模式相類似。這可能是因為RD.006的接種誘導了活性氧的爆發，促使植物細胞APX和CAT活性上升以清除產生的過氧化物。而FC組果實FcAPX、FcCAT在取樣后期（36～72 h）的表達水平較高，促進APX和CAT的合成以清除H2O2等有害物質，這可能是因為FC.006侵染也會使果實細胞遭到破壞并產生大量H2O2、自由基等有害物質，激活了果實的抗病性，但這種抗病反應具有一定的滯后性。

由圖7F可知，RD-FC組果實的FcPOD表達水平在取樣0 h時顯著提高，在取樣前期（0～24 h）始終維持較高的表達水平，同時期果實組織的苯丙烷代謝途徑中關鍵酶FcPAL、FcC4H、Fc4CL同樣有較高的表達水平，因此推測RD.006的接種可以迅速激活果實的苯丙烷途徑，增強寄主的抗病性，促使果實類黃酮、木質素等相關抗性代謝物的生成。

3 討 論

炭疽菌（Colletotrichumsp.）是世界上侵染植物的十大致病性真菌之一[30]，炭疽病的病程較短，若不加以防控，一旦感染無花果，在短時間內果實便會發生不可控制的軟爛。無花果炭疽病病原菌的鑒定是生物防治炭疽病的基礎。目前，炭疽菌的分類主要依賴于形態學特征結合基因ITS進行鑒定，但炭疽菌的純培養特征會因培養條件的不同而存在差異，而單一的ITS序列可能會存在一定的錯誤率，因此采用多基因序列對近親緣關系的炭疽菌的研究更加可靠。李丹丹等[31]從安徽‘108B’無花果發病果實和葉子上分離得到病原菌株，并通過形態學和多基因（ITS、ACT、GAPDH、CAL、TUB2、CHS-1）鑒定為膠孢炭疽菌（C.gloeosporioides）；本實驗從‘布蘭瑞克’無花果病果上分離出菌株FC.006，采用多基因序列聯合分析鑒定其屬于膠孢刺盤孢復合種下的哈銳炭疽菌（C.horri），可見引起無花果炭疽病的病原菌種類與果實品種、地理位置、栽培等條件有關。

對植物病原菌具有良好拮抗效力的芽孢桿菌中，多數菌株可以通過分泌具有抑菌活性的代謝物質來達到抑菌的目的。有研究表明，貝萊斯芽孢桿菌可以分泌抗菌蛋白[32]、聚酮類化合物[33]、脂肽類抗生素[34]等抑菌物質。本實驗中的離體平板對峙實驗表明，貝萊斯芽孢桿菌RD.006能通過產生擴散性抑菌物質有效抑制哈銳炭疽菌FC.006菌絲的生長。

Priming機制是指植物組織被生物或非生物激發子處理后，植物顯示出更強的防御能力[35]，被認為是植物中不同類型誘導抗性的共同機理。生防菌對寄主果實抗性的誘導主要是通過激活一系列生化防御反應及果實的免疫系統，同時能夠促進傷口處結構性壁壘物質的積累，病原菌侵染時會發揮更強的組織抗病性。苯丙烷代謝途徑是與植物抗病性密切相關的次級代謝途徑，本實驗結果顯示，生防菌RD.006的預防接種會誘導無花果苯丙烷代謝途徑關鍵酶相關基因的表達上調，表明RD.006會一定程度上激活苯丙烷代謝途徑。該途徑會產生酚類物質、類黃酮和木質素等物質，其中酚類物質和類黃酮對病原菌有直接的殺死作用，而木質素能提高細胞壁組織木質化的程度，從而提高對病原菌的抵御能力。Wang Xiaoli等[36]發現，與單獨接種病原菌或生防菌的枇杷果實相比，兩者同時接種的處理方式會誘導果實產生更高的PAL、POD、PPO等防御相關基因的表達水平，這種誘導作用是Priming機制介導的果實防御體系被激發的結果。本實驗中同樣發現，相較單獨接種病原菌的果實，生防菌和病原菌都接種的果實FcPAL、FcC4H、Fc4CL、FcAPX、FcCAT、FcPOD基因在接種后有較高的表達水平，而只接種病原菌的果實6 個抗性基因的相對表達量在不同時間點也有較高的表達量，但最高值普遍小于生防菌和病原菌同時接種的處理組。佐長賡等[37]的研究同樣表明，貝萊斯芽孢桿菌B.velezensisBG-2與病原菌協同參與誘導厚皮甜瓜CAT、POD、SOD等防御酶的激活。此外，從本實驗結果中可以發現，在貯藏期間的部分時間點，只接種病原菌的FC處理組果實的6 個抗性基因表達量高于生防菌和病原菌都接種的RD-FC組果實，可能是FC.006的強致病作用對生防菌RD.006誘導果實組織的免疫響應具有一定的抑制作用。有研究同樣表明，生防菌直立頂孢霉（Acremonium strictum）產生的枯草菌素類似蛋白AsES可以作為生物激發子誘導植物的防御反應，促進活性氧的積累，加強木質素、胼胝質等加強細胞壁支撐物質的生物合成，上調FaPR1、FaCHI23、FaPDF1.2、FaCAT、FaCDPK、FaCML39等抗性基因的表達，而病原菌隱秘刺盤孢（Colletotrichum acutatumM11）能夠產生一種擴散化合物抑制AsES誘導的植物抗性響應[38]。

4 結 論

從無花果病果上分離出一株病原菌FC.006，通過形態學鑒定結果結合基于ITS、GAPDH、TUB、CHS、ACT、CAL多基因聯合系統發育樹分析鑒定為Colletotrichum horri，其能夠引起無花果炭疽病的發生。在離體條件下貝萊斯芽孢桿菌RD.006可以直接抑制FC.006菌絲的生長，在培養8 d時的體外抑菌率達到85%，預防接種RD.006能夠激活無花果果實的苯丙烷途徑，誘導抗氧化相關基因表達迅速上升，RD.006可以作為一種生物激發子誘導果實抗性，有效防治無花果采后炭疽病害。后續研究可聚焦于RD.006抑菌活性代謝物質的鑒定，此外，苯丙烷代謝途徑分子調控機制等還需深入研究。本研究結果可豐富無花果采后病原菌的種類，同時為采后病害的綠色防控提供理論基礎。